Burada dorsal kök gangliyon kültür duyusal nöronlar için kompartman odaları hazırlanması ve bakımı tekniği açıklar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Kompartman Kültürleri Dorsal Kök Ganglia Nöronlar hazırlanması ve Bakım
Bu makalede
Özet
Özet
Nöronlar hedef kaynaklı büyüme faktörleri nöronal hayatta kalma ve işlevi için gerekli olan hedef dokular, çok innerve hücre gövdesi çıkarılır aksonal süreçleri uzatmak. Nörotrofinler özellikle duyusal nöronlar innerve hayatta ve farklılaşma korumak için gereklidir, ancak bu hedef elde edilen nörotrofinler innerve nöron hücre gövdesi nasıl iletişim soru, 30 yılı aşkın bir süredir aktif bir araştırma alanı olmuştur. Nörotrofin sinyalleri hücre gövdesinden nasıl ulaşacağını en yaygın kabul gören model, sinyalizasyon, akson boyunca retrograd bu sinyali taşımak endosomes önermektedir. Retrograd taşıma incelemek üzere, bir kültür sistemi, aslında hücre gövdeleri aksonlar izole edildiği Robert Campenot tarafından icat edildi. Kültür duyusal nöronlar özetlediği hedef kaynaklı nörotrofinler in vivo aşağıdaki sürümde oluşan nöron terminalleri seçici uyarılma için bu kompartman odaları hazırlama tekniği. Uzun menzilli mikrotübül bağımlı retrograd taşıma gerektiren Retrograd sinyalleme olaylarını nörodejeneratif hastalıkların tedavisi için önemli etkileri vardır.
Protokol
Reaktiflerin hazırlanması
- Kollajen kaplama: kollajen kat p35 doku kültürü plakaları ve bir fırında 37 ° ° C bölücüler yağlama 2 gün önce. Kollajen nihai konsantrasyonu 0,71 mg / ml 0,001 N HCl seyreltilmiş olmalıdır. Daha sonra, plaka başına 1 ml karışımı ekleyin.
- Gres yükleyiciler: gres yükleyici doldurmak için, 60 ml şırınga Corning vakum gres yağı ile dolu olmalıdır. Gres yükleyici doldurmak için 45 dakika otoklavda sonra folyo ile sarın ve şırınga kullanın.
- Teflon bölücüler: bölücüler her bir deney sonrası yeniden kullanılır ama olabilir ilk önce düzgün bir şekilde temizlenmesi gerekir. Plaka bölücü çıkarın....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu video, kompartman odaları kültür DRG nöronlar kullanmak için nasıl hazırlamak ve sürdürmek göstermiştir. Düzgün yapılmazsa, bu sistem hangi nörotrofinler uzun aksonlar boyunca sinyal mekanizmaları araştırmak için akson hücre gövdesinden ayrılması sağlar. Bölmeleri arasında akışkan izolasyon olmadığı için, diğer bölmeleri etkilenen olmadan bir kompartmanı seçici uyarılma veya tedavi için izin verir. Kompartman odasına kültürlerin üstün servikal ganglionlar, retina ganglion nöronlar, ve kortikal nöronların sempatik nöronlar da dahil olmak .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Teşekkürler
Biz, Katharina Cosker ve Stephanie Courchesne yararlı tartışmalar için teşekkür etmek istiyorum.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar | |
|---|---|---|---|---|
| kolajen | Reaktif | BD Biosciences | 354249 | |
| N2-metilselüloz 400CPS | Reaktif | Sel-Win Chemicals | ||
| Teflon bölücü | Diğer | Tyler Research | CAMP10 | pek çok farklı bölücü tipi mevcuttur |
| Pin tırmığı | Araç | Tyler Research | Camp-PR | |
| Gres yükleyici | Araç | Tyler Research | Camp-GLSS | |
| DMEM | Reaktif | Fisher Scientific | MT10017CV | |
| NGF | Reaktif | PeproTech Inc | 450-01 | |
| BDNF | Reaktif | PeproTech Inc | 450-02 | |
| Yüksek vakum gresi | Reaktif | Fisher Scientific | 14-635-5D | |
| AraC | Reaktif | Sigma-Aldrich | C-1768 | |
| 23 gauge luer stub adaptör | Araç | Fisher Scientific | 427565 | |
| 90° açılı hemostatlar | Araç | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-7035 |
Kaynaklar
- Campenot, R. B. Independent Control of the Local Environment of Somas and Neurites. Methods in Enzymology. 58, 302-307 (1979).
- Watson, F. L., et al. Neurotrophins use the Erk5 pathway to mediate a retrograde survival response. Nature Neurosci....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
