İç Standartlar

1. Uygun Numune İşleme: Bir Çözüm Oluşturma

1. Temiz bir beher alın ve içine doğru miktarda numune koyun. Kullanılan gerçek kütleyi kaydedin. Bu örnekte, bir sonraki analiz için dahili bir standart olarak kullanılmak üzere hacimsel bir şişede bir adenin çözeltisi yapılır. Adenin kütlesi 100 mg'dır. Uzun bir boynu olduğu ve adenin kolayca eklenip çıkarılamadığı için doğrudan hacimsel bir şişeye kütle koymayın.
2. Behere kabaca 25 mL çözücü (bu durumda dimetil sülfoksit (DMSO)) ekleyin ve çözünmesi için karıştırmasına izin verin. Bu örnekte, nihai çözelti 50 mL'lik hacimsel bir şişede yapılır, bu nedenle beherin durulanması ve çözeltinin son hacme kadar yapılabilmesi için yalnızca yaklaşık 25 mL ekleyin.
3. Katı çözündükten sonra, çözeltiyi hacimsel şişeye dökün.
4. Beheri ve karıştırma çubuğunu az miktarda çözücü ile yaklaşık 10 mL durulayın ve durulamayı hacimsel şişeye dökün. İki kez daha tekrarlayın. Bu, uygun çözüm aktarımının sağlanmasına yardımcı olur.

2. Dahili Standart Kalibrasyon Eğrisinin Hazırlanması

1. Gaz kromatografisi analizi için istenen standart numuneleri hazırlayın. Bu örnekte, kafein asetonitril kullanılarak kahveden ekstrakte edilir ve daha sonra ölçüm için dahili bir standart olarak adenin kullanılır.
2. Kafein numuneleri için, 1 mg/mL numune yapmak için gereken numune miktarını tartın. 10 mL'lik hacimsel bir şişe kullanılıyorsa, bu 10 mg'dır.
3. Analiti bir behere tartın, çözünmesi için birkaç mL çözücü (burada metanol) ekleyin, ardından 3 durulama kullanarak kantitatif olarak hacimsel şişeye aktarın.
4. 0.2, 0.5 ve 2 mg / mL kafein ile benzer şekilde 3 standart daha yapın.
5. Her kafein standardından 1 mL'yi bir numune şişesine koyun.
6. Her numune şişesine 0.2 mL 2 mg / mL adenin iç standardı ekleyin.
7. Her kafein standardıyla gaz kromatografisi deneyini çalıştırın. Her kromatogram için, kafein için tepe alanlarının standarda karşı oranını hesaplayın.
8. Alan oranına karşı konsantrasyon oranının bir grafiğini yapın. Bu arsanın eğimi tepki faktörüdür.

3. Gaz Kromatografisi için Dahili Standart ile Gerçek Bir Numunenin Hazırlanması

1. İstenilen numuneyi gaz kromatografisi analizi için hazırlayın. Bu örnekte, kafein asetrontril kullanılarak kahveden ekstrakte edilir.
2. Kahve numunesi için 2 g kahveyi 100 mL'lik bir behere koyun. Kahvenin tam ağırlığını kaydedin.
3. Behere 20 mL asetonitril ekleyin.
4. Sık sık karıştırarak 20 dakika bekletin.
5. Kahve telvesini bir hunide bir filtre kağıdı kullanarak süzün.
6. Filtre kağıdını 3x az miktarda asetonitril (5 mL) ile durulayın.
7. Filtratın son hacmini ölçün. Yaklaşık 35 mL olmalıdır.

4. Numuneyi çalıştırın ve konsantrasyonu hesaplayın

1. 1 mL kahve özü örneğini alın ve bir şişeye 0.2 mL iç standart ekleyin. Şişeyi otomatik örnekleyici rafına yerleştirin.
2. Numunenin GC analizini çalıştırın. GC koşullarının, kafein ve adenin ayrılacak şekilde olduğundan emin olun. Bu örnekte, izotermal ayırma işlemleri 200 °C'de gerçekleştirilmiştir.
3. Analizden sonra, hem dahili standart tepe noktası hem de analit tepe noktası için tepe alanını hesaplayın. Oranlarını kullanarak, numunedeki kafein miktarını hesaplayın.

5. Bulgular: Dahili Standart ile Kafeinin GC Analizi

1. Kafeinin GC analizi Şekil 1'de gösterilmiştir. Adenin, dahili bir standart olarak kullanılır. Tepe alanlarının oranı, konsantrasyonların oranına karşı ölçülebilir ve çizilebilir. Arsanın eğimi tepki faktörüdür (bu durumda 1.8).
2. Şekil 2, adenin iç standardına sahip bir kahve örneğinin kromatogramını göstermektedir. Tepe alanının oranı 1.78'dir. Yanıt faktörü ve bilinen adenin konsantrasyonu (0.33 mg / mL) kullanılarak, bilinmeyen numunedeki kafein konsantrasyonu 0.33 mg / mL olarak hesaplanır.

Şekil 1. Dahili bir standart kullanarak kalibrasyon grafiği. Her birine 0,33 mg/mL adenin iç standardı eklenmiş 3 standart kafein numunesi (1, 0,5 ve 0,2 mg/mL) için alan oranlarına karşı konsantrasyon oranlarının bir grafiği. Çizginin eğimi, tepki faktörü olan 1.8'dir.

Şekil 2. Adenin iç standardına sahip kahvenin kromatogramı. FID dedektörünün örneklere verdiği yanıtın bir grafiği. Üç ana tepe noktası adenin (IS), kafein ve palmitik asittir.