Antikor Üretimi: Hibridomlar Kullanılarak Monoklonal Antikorların Üretilmesi

Not: Hibridoma hücreleri ve besiyeri steril bir şekilde (örneğin bir biyogüvenlik kabininde) ele alırken, antikor saflaştırma adımlarına kadar steril hücre kültürü tekniği korunmalıdır.

1. Donmuş hibridoma hücrelerinin çözülmesi

1. Donmuş hibridoma hücrelerini içeren şişeyi 37 ° C'lik bir su banyosunda sadece çözülene kadar (yaklaşık 2 dakika) inkübe edin.
2. Çözülmüş hücreleri 10 mL tam RPMI içeren 15 mL'lik bir konik tüpe ekleyin (% 10 fetal sığır serumu, 100 U / mL penisilin, 100 μg / mL streptomisin, 1mM sodyum piruvat, 1x esansiyel olmayan amino asitler, 50 μM 2-Merkaptoetanol, 10 mM HEPES).
3. Kirletici donmuş ortamları yıkamak için 1200 RPM'de 5 dakika santrifüjleyin.
4. Santrifüjlemeden sonra, sıvı süpernatanı atın ve hücre peletini 5 mL taze tam RPM'de yeniden süspanse edin. Daha sonra, hücreleri 15 mL tam RPMI içeren bir T75 doku kültürü şişesine ekleyin (RPMI'nin son hacmi 20 mL'dir).
5. Hücreleri standart bir inkübatörde 37 ° C'de% 5 CO₂ ile büyütün. Hücreler kültürdeyken yapışık değildir.

2. Hibridoma genişlemesi

1. 
   

1. 
   

11.