Name: Proteinlerin Hücre Biyolojisi Microcontact Baskı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-12-05T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 21 s
Description: Öğrenin mikro temas baskı tekniği ile fibronektin proteinlerini cam yüzeylere desenlendirerek hücre yapışmasını sağlayan kontrollü ortamlar oluşturmayı. Bu yöntem doku mühendisliği uygulamaları için değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Çözümler ve malzemelerin hazırlanması Bu adımlar, birkaç gün önceden yapılmalıdır. <ol><li> Cam lamelleri. Temizleyene kadar karıştırarak ile, 3 oranı ve ısıtmalı su, 1 karışık: lameller Linbro 7X deterjan bir çözüm olarak 10 dakika boyunca daldırma tarafından temizlendi. Lameller yoğun deiyonize su ile durulanır ve sonra 6 saat boyunca 450 ° C&#39;de pişirilir. (Reaktifler) seramik boyama rafları lamelleri Yükleniyor bu süreci basitleştirilmiş. </li><li> Protein damgalama için çözüm. 1 mg / ml konsantrasyonu bir stok çözüm üretici talimatlarına sulandırın fibronektin. </li></ol> 2. Topolojik ustadan pulları Oyuncular Bu adımlar, birkaç gün önceden yapılabilir. Böyle bir doku kültürü yemek olarak kapalı bir çanak Mağaza pulları desen,. <ol><li> Ustadan sıkıştırılmış, filtre edilmiş hava veya inert gaz akışı kullanarak gevşek toz çıkarın. </li><li> Sadece master daha büyük bir plastik çanak alt, ana, desenli yan yerleştirin. 60 - ya da 100 mm doku kültürü yemekleri de bu amaç için uygundur. </li><li> Polistiren 50 ml santrifüj tüpüne, sertleştirici oranında Sylgard bileşenleri bir araya getirir: 1: 10 elastomer tabanı kilo. Böyle bir pipet gibi, plastik bir cihaz kullanarak iyice karıştırın. Elastomer çanak alanının santimetre kare başına en az 0.2 ml hazırlayın. </li><li> Hava kabarcıklarını çıkarmak için 5 dakika boyunca 300 G 50 ml tüp santrifüjleyin. </li><li> Elastomer master üzerine dökün, sonra 30 dakika süreyle vakum altında bir desikatöre yerde. </li><li> 65 ° C&#39;de en az 2 saat süreyle bir fırında elastomer Cure. Yüksek sıcaklıklarda ve daha sert elastomer uzun zamanlar sonuçları Kür. Oda sıcaklığına kadar soğumasını bekleyin. </li><li> Ana sayfa pullarının ayırın. </li></ol> 3. Camına fibronektin Microcontact baskı <ol><li> Tek bir damga kesin. 4 mm uzunluğunda Pullar X 4 mm X 1 cm alanda ve 1 - 2 mm kalınlığında 1 cm ile başlamak daha kolay olacaktır. Bir cam slayt veya küçük plastik tabak koyun desen yüzü yukarı. </li><li> 30 saniye boyunca, vakum altında, bir plazma temizleyici, ve süreç damga yerleştirin. En yüksek çıkış ayarı harrick Bilimsel plazma temizleyici (Ekipman), PDMS yüzeyi hidrofilik verecek. Elastomer çatlama kat daha uzun. </li><li> 50 mcg / ml deiyonize su ile bir damgalama konsantrasyonu fibronektin çözüm sulandırınız. </li><li> Çözümü damga damgalama küçük bir damla (50 ul 10) yerleştirin. Hidrofilik yüzeye yayılmış. Damla damga kapsar, ancak kenarları üzerinde çalışmaz, sadece yeterli bir çözüm ekleyin. 5 dakika damga protein adsorbe edelim. </li><li> Kimwipe ® veya diğer temiz bir kağıt mendil kullanarak, desenli bölgeye dokunmadan, damga protein solüsyonu en fitil. </li><li> Kuru, temiz, kuru, böyle bir azot gibi inert gaz, bir dere altında damga kalan çözüm. </li><li> Cımbız kullanarak, cam slayt damga kaldırmak ters ve temizlenmiş cam lamel (yüzeyi desenli) ile temas yer. Iyi temas teşvik etmek üstüne bir ağırlık koyun. Iyi desenlendirme sağlar özgül ağırlık damga boyut ve desen bağlıdır; 5 gr ağırlığı ile başlar, ve HARDWARE arasında ayarlayın. 1 dakika yüzey ile temas halinde damga bırakın. </li><li> Dikkatli bir yığın sökmeye ve lamel ayrı bir damga. </li><li> Şiddetle yüzeye adsorbe değildir protein kaldırmak için deiyonize su ile PBS içinde desenli lamel, durulayın. Kuru bir azot akışı altında lamel. </li></ol> Temsilcisi Sonuçlar Microcontact baskı yüzeylerde desenlendirme moleküller için güçlü bir süreçtir. Bu süreç, Şekil mikrometre onlarca yüzlerce nanometre arasında değişen boyutları ile özellikleri oluşturmak için yeteneğine sahiptir. Yeşil noktalar ise Şekil gösterildiği 1A, soldaki logolar, her yüksekliği 200 mm. 1B, çapı 1 mm ve merkez-merkez ölçülen 4 mikron aralıklarla aralıklı. Şekil 1B, aynı zamanda, güçlü olduğunu microcontact baskı, yani mülkiyet, ve katkı süreci göstermektedir. Microcontact baskı birden fazla mermi, çok bileşenli sistemler 3 oluşturmak için tek bir yüzeye uygulanabilir . <img src="/files/ftp_upload/old/1065_2008_11_24_3/Figure_a.jpg" alt="Şekil A" /><img src="/files/ftp_upload/old/1065_2008_11_24_4/FIGURE_B.jpg" alt="Şekil B" />

<ol><li>Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geometric+control+of+cell+life+and+death%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Geometric control of cell life and death.</a> Science. 276, 1425-1425 (1997).</li>
<li>Kumar, A., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Features+of+Gold+Having+Micrometer+to+Centimeter+Dimensions+can+be+Formed+Through+a+Combination+of+Stamping+with+an+Elastomeric+Stamp+and+an+Alkanethiol+%22Ink%22+Followed+by+Chemical+Etching%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Physics+Letters%22%5BJournal%5D)">Features of Gold Having Micrometer to Centimeter Dimensions can be Formed Through a Combination of Stamping with an Elastomeric Stamp and an Alkanethiol "Ink" Followed by Chemical Etching.</a> Applied Physics Letters. 63, 4-4 (1993).</li>
<li>St. John, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preferential+Glial+Cell+Attachment+to+Microcontact-printed+Surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Preferential Glial Cell Attachment to Microcontact-printed Surfaces.</a> Journal of Neuroscience Methods. 75, 171-171 (1997).</li>
<li>Kam, L., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+adhesion+to+protein-micropatterned-supported+lipid+bilayer+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research%22%5BJournal%5D)">Cell adhesion to protein-micropatterned-supported lipid bilayer membranes.</a> Journal of Biomedical Materials Research. 55, 487-487 (2001).</li>
<li>Kung, L. A., Kam, L., Hovis, J. S., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterning+Hybrid+Surfaces+of+Proteins+and+Supported+Lipid+Bilayers%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Patterning Hybrid Surfaces of Proteins and Supported Lipid Bilayers.</a> Langmuir. 16, 6773-6773 (2000).</li>
<li>Shen, K., Thomas, V. K., Dustin, M. L., Kam, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropatterning+of+costimulatory+ligands+enhances+CD4%2B+T+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Micropatterning of costimulatory ligands enhances CD4+ T cell function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 7791-7791 (2008).</li>
<li>Shi, P., Shen, K., Kam, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+presentation+of+L1+and+N-cadherin+in+multicomponent%2C+microscale+patterns+differentially+direct+neuron+function+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Local presentation of L1 and N-cadherin in multicomponent, microscale patterns differentially direct neuron function in vitro.</a> Developmental Neurobiology. 67, 1765-1765 (2007).</li>
</ol>

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Microcontact baskı işlemi desenlendirme moleküllerin geniş bir yelpazede çeşitli yüzeylere uygulanabilir olan, kavramsal olarak basit ve çok sağlam. Ancak bu süreç, bir sanat bir şey kalır. Desen oluşturulacak özel geometri, protein desenli, uygulanan ağırlık ve kaplama / damgalama koşulları damgalama kalitesini etkileyebilir. Örneğin, sık sık büyük özellikleri, desen Şekil sağ üst logosu görülebileceği gibi boşlukları sonuçları uygulanan çok az ağırlık,. 1A. Tersine, çok fazla kilo plazma tedavisi adım atlanmış ise ikinci bir örnek, özel p...

<table><tbody><tr><td>Plazma Temizleyici</td><td></td><td>Harrick Scientific Products, Inc.</td><td>PDC-32G</td><td></td></tr><tr><td>Desikatör</td><td></td><td>Nalge Nunc international</td><td>5315-0150</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>10010-072</td><td></td></tr><tr><td>Protein markalama kiti</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>A30006</td><td></td></tr><tr><td>Fibronektin</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2006</td><td></td></tr><tr><td>Boyama rafı</td><td>Reaktif</td><td>Thomas Scientific</td><td>8542E40</td><td></td></tr><tr><td>Lameller</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-12</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184</td><td>Reaktif</td><td>Ellsworth Adhesives</td><td>184 Sil Elast Kit</td><td></td></tr><tr><td>Kırınımsal Izgara</td><td>Reaktif</td><td>Edmund Scientific</td><td>3040267</td><td></td></tr></tbody></table>

proteinlerin hücre biyolojisi microcontact baskı

Microcontact Printing of Proteins for Cell Biology

Desen proteinleri ve diğer substratlar üzerine biyomoleküllerin yeteneği ekstrasellüler çevre mekansal karmaşıklığı yakalamak için önemlidir. Whitesides grup tarafından microcontact baskı Gelişimi (<a href="http://gmwgroup.harvard.edu/"&gt; Http://gmwgroup.harvard.edu/</a&gt;) 1990&#39;ların ortalarında mikroelektronik / yaşam bilimleri üzerine odaklanmıştır laboratuarlara imalat teknikleri yaparak bu alanda revolutionalized. Polidimetilsiloksan (PDMS) pulları malzeme yüzeyleri Fonksiyonlu kimyasalların desenleri oluşturmak için kullanılan bu yöntem ilk uygulamaları<sup&gt; 1</sup&gt;. O zamandan beri, proteinler de dahil olmak üzere bir dizi yenilikçi yaklaşımlar, desen diğer moleküllerin geliştirilmiştir var<sup&gt; 2</sup&gt;. Bu video PDMS pulları yaratmanın temel sürecini gösterir ve bu adımları doğru kelimelerle ifade etmek zor olduğundan, desen proteinler için bunları kullanır. Biz desenlendirme ekstrasellüler matriks proteini fibronektin desenlendirme belirli bir örnek olarak cam lamelleri üzerine odaklanır. Microcontact baskı sürecinin önemli bir bileşeni pulları dökme topolojik master, ana kaldırdı ve alçaltılmış bölgelerde damga yansıtılmış ve son deseni tanımlamak. Tipik olarak, bir ana, fotorezist ile kaplı ve sonra fotolitografi ile desenli bir silikon gofret oluşur, burada yapıldığı gibi. Belirli bir desen içeren ustaların oluşturulması, özel ekipman gerektirir ve en iyi bir imalat merkezi veya tesis ile istişare yaklaştı. Ancak, topoloji ile hemen hemen herhangi bir yüzeye plastik gibi kırınım ızgaralar gibi bir usta, (bir örnek için Reaktifler) olarak kullanılır ve bu tür şans eseri ustaları hazır, basit desenler sağlamak olabilir. Bu protokol, elinde bir ana noktada başlar.

Microcontact baskı malzemesi yüzeylerde desen proteinleri ve diğer molekülleri yaygın bir biçimde kullanılmaktadır. Biz fibronektin cam üzerine desen damgalama, bu sürecin temel adımları göstermektedir.

Proteinlerin Hücre Biyolojisi Microcontact Baskı

Proteinlerin ve diğer biyomoleküllerin substratlar üzerine desenleme yeteneği, hücre dışı ortamın mekansal karmaşıklığını yakalamak açısından önem taşımaktadır. ...

Mikro temas baskılama, hücre dışı ortamların karmaşıklığını yeniden oluşturmak amacıyla proteinleri ve diğer molekülleri malzeme yüzeylerine desenlemek için kullanılır. Mikro temas baskılamaya başlamak için önce topolojik bir kalıp oluşturulur ve ardından Syl guard'dan kalıba göre bir damga dökmek için yumuşak litografi kullanılır. Damga protein ile kaplanabilir ve ardından hücrelerin yapışabileceği yeni bir yüzeye proteinleri basmak için kullanılabilir.Merhaba, benim adım Chen. Columbia Üniversitesi biyomedikal mühendisliği bölümündeki Dr. Lance Camp'in laboratuvarından geliyorum. Merhaba, ben Makine Mühendisliği Bölümü'nden GT.Merhaba, ben Columbia Üniversitesi Biyomedikal Mühendisliği Bölümü'nden Lance Kem. Laboratuvarımızda, hücrelerin hücre dışı ortamlarındaki proteinlerin karmaşık dizilimlerine nasıl tepki verdiğini incelemek için bu prosedürü kullanıyoruz. Bu yöntem, 1990'ların ortalarında George Whitesides'ın laboratuvarı tarafından geliştirilmiş olup yaygın olarak kullanılan ve değerli bir araç haline gelmiştir.Bu tekniğin birçok varyasyonu vardır, ancak bugün G ve Co U temel mikro temas baskı sürecini gösterecekler. Öyleyse başlayalım. Mikro temas baskı için lamine camlar

microcontact-printing-of-proteins-for-cell-biology

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video kullanımı ile mikro-desenli yüzeyler, protein-protein etkileşimleri sonraki analizi ile deneyler gösterir. Bu yaklaşım, canlı hücreler protein etkileşimleri tespit etmek imkanı sunar ve kantitatif bilgileri ayıklamak imkanı ile yüksek verimlilik özellikleri bir araya getiriyor.

Mikro desenli Yüzeyler, protein-protein etkileşimleri-vivo Algılama

Uzun zincirli altın Alkan tiyoller oluşan Kendinden monte mono tabakaları (SAMs), protein desen ve hücre hapsi oluşumu için iyi tanımlanmış substratları sağlar. Microcontact baskı ile dolgu takip polidimetilsiloksan (PDMS) damga kullanarak hexadecanethiol glikol-sonlandırılır Alkan tiyol monomer damgalı hexadecanethiol bölgede sadece protein ve hücreler adsorbe bir desen üretir.

Protein ve hücre Etrafının İki Boyutlu Desenli Yüzeyler Oluşturma

Bir bioprinter içine bir HP Deskjet 500 Yazıcı dönüştürmek için kullanılan yöntemlerin açıklaması. Yazıcı membran geçici gözenekler neden canlı hücreler, işleme kapasitesine sahiptir. Bu gözenekler baskılı hücrelerine flüoresan G-aktin dahil olmak üzere küçük moleküller, dahil etmek için kullanılabilir.

Standart Mürekkep Püskürtmeli Yazıcı Kullanımı Geçici Hücre Zarı Gözenekler oluşturma

Canlı hücre göç çalışmaları için bir mikroskop odasında yapıştırıcı ve çözünür degradelerin montajı için bir yöntem tarif edilmiştir. Mühendislik ortamı çözümü degradelerle antifouling yüzeyleri ve yapıştırıcı parçaları birleştirir ve bu nedenle bir rehberlik ipuçları göreli önemini belirlemek için izin verir.

Floresan Mikroskobu ile Görüntüleme Hücre Göç Yapıştırıcı ve Çözünür Degradeler oluşturma

Bu 3D mikroakışkan baskı teknolojisi, hücre dizilerini batık yüzeylere yazdırır.  Hücre dizilerinin 3D akış hücrelerinde mikroakışkan olarak batık yüzeylere nasıl iletildiğini açıklıyoruz.  Batık yüzeylere baskı yapılarak, çok sayıda alanda ilaç taraması ve sitotoksisite değerlendirmesine izin veren hücre mikrodizileri üretildi.

Sürekli Akış Microspotter kullanma Modifiye yüzeye hücrelerin Batık Baskı

Biyolojik ligandların mikro ölçekli modelleriyle işlevselleştirilmiş hücre kültürü substratları, doku mühendisliği alanında çok büyük bir faydaya sahiptir. Burada, biyolojik ligandların mekansal olarak hassas ve bölgeye özgü immobilizasyonunu sağlayan ortogonal kimyalar sunan çoklu, mikro desenli poli (etilen glikol) fırçalarla doku kültürü substratlarının çok yönlü ve otomatik üretimini gösteriyoruz.

Robotik Microcontact Baskı (R-μCP) kullanarak Karmaşık Kültürü Substratlar ve Sıralı nükleofilik Giren Fabricating

Bu rapor, biyolojik araştırmalar için mikroakışkan kanalları hücreler ve substratlarla doldurmak için düşük basınçlı vakum kullanan basit, uygulaması kolay bir tekniği açıklamaktadır.

Desenlendirme Proteinlerin ve Hücreleri Çok Yönlü Yöntemi

Burada, içinde yüksek üretilen iş ekran ekstraselüler protein microarrays kimliği roman reseptör-ligand etkileşimleri için bir iletişim kuralına mevcut. Ayrıca protein-microbead kompleksleri kullanarak geçici protein-protein etkileşimlerinin algılama geliştirmek için bir yöntem açıklar.

Hücre dışı Protein Mikroarray teknoloji yüksek işlem hacmi düşük benzeşme reseptör-Ligand etkileşimleri algılanması için

Genel amacımız, hücrelerin yönlendirilmiş aksonal büyümeye yol açan hücre dışı ipuçlarını nasıl algıladığını anlamaktır. Burada, akson büyümesini ve yol bulmayı yöneten belirli olayları incelemek için hücre dışı matriks bileşenlerinin tanımlanmış mikro desenlerini üretmek için kullanılan Proteinlerin Hafif Kaynaklı Moleküler Adsorpsiyon metodolojisini açıklıyoruz.

Hücre Dışı Matriks Proteinlerine Hücre Yanıtlarını İncelemek Için Mikro-Desenleme için PRIMO Sistemini Kullanan Proteinlerin Işık Kaynaklı Moleküler Adsorpsiyonu

Yumuşak hidrojeller üzerindeki hücre dışı matris proteinlerinin nokta dizilerinin tek bir çıkarma modelleme adımıyla mikrotemaslı baskıya dayanan hücresel çekiş kuvvetlerini ölçmek için standart bir yöntemdeki iyileştirmeleri açıklıyoruz. Bu yöntem, hücre kümesi şeklini kontrol etmek için gerekli olan ada desenlerinin daha basit ve daha tutarlı bir şekilde üretilmesini sağlar.

Mikrodesen Traksiyon Mikroskobu için Desen Oluşturma

Geleneksel olarak, hücre kültürü, hücrelerin doğal ortamını in vivo olarak zayıf bir şekilde taklit eden düzlemsel substratlar üzerinde gerçekleştirilir. Burada, fizyolojik olarak ilgili kavisli geometrilere ve mikro desenli hücre dışı proteinlere sahip hücre kültürü substratları üretmek için bir yöntem tanımladık ve bu hücre dışı ipuçlarının hücresel olarak algılanmasına sistematik araştırmalara izin veriyoruz.

Üç Boyutlu Hücre Kültürü Substratlarının UV-Fotodesenlenmesi ile Multicue Hücresel Mikro Ortamların Oluşturulması

Öğrenin mikro temas baskı tekniği ile fibronektin proteinlerini cam yüzeylere desenlendirerek hücre yapışmasını sağlayan kontrollü ortamlar oluşturmayı. Bu yöntem doku mühendisliği uygulamaları için değerlidir.

Proteinlerin Hücre Biyolojisi Microcontact Baskı

Daha fazla video keşfet