Name: Nosiseptif ve İnflamatuar Arabulucular Doku Özel Ölçüm İnsan In-Vivo Biyoassay (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-12-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 54 s
Description: Keşfedin, deneysel güneş yanığı oluşturulan insan derisinden mikrodiyaliz kateteri kullanarak interstisyel sıvı örnekleme yöntemini. Bu teknik, ağrı ve inflamasyonun biyokimyasal aracılarını in vivo analiz etmek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Deneysel inflamasyon İndüksiyon: <ol><li> Birinci derece güneş yanığı, kalibre, ultraviyole B kaynağı (Saalmann Multitester SBB LT 499, Saalmann GmbH, Hereford, Almanya) yardımı ile uyluk olmayan tabaklanmış deri indüklenir. Güneş yanığı, tam maruz kalan deride kızarıklık ya da üç kez minimal eritemal doz (MED) neden UVB ışık miktarını gerekli üç kez uygulayarak mikrodiyaliz deney başlamadan 24 saat önce meydana gelir. MED, çalışmaya başlamadan önce her konuda belirlenir. Doğru enerji teslimat ile güvence altına alınmıştır UV-metre (RM 12, Dr. Grobel UV-Elektronik GmbH, Ettlingen, Almanya). </li></ol> Kateter yerleştirme ve örnek toplama: <ol><li> Steril eldiven, 1 adet 23 gauge (G) iğne, 1 cc şırınga 30G iğne ile,% 1 lidokain steril iğne tutucu, 1cc döner ucu şırınga ile bir hazırlama alanı hazırlayın, alkol çubuklar, 2x2 steril gazlı bez, mikrodiyaliz kateterler ekli 4cm 23G iğne (Dermal Diyaliz, Erlangen, Almanya), ve kuru buz üzerinde 100μl örnek başına 4μl proteaz inhibitörü çözümü ile 1,5 ml Microcent toplama tüpleri (E ve K Bilimsel, Santa Clara, CA.) sonunda. proteaz inhibitörü çözüm üreticinin talimat başına proteaz inhibitörü kokteyl tablet (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Almanya) kullanılarak yapılır. </li><li> Laktat ringer solüsyonu% 1 human albumin solüsyonu hazırlayın ve 1cc döner ucu şırınganın içine çekmek, şırınga içinde kalan NO hava kabarcıkları vardır emin olun. </li><li> Şırıngaya bir yüksek hassasiyetli infüzyon pompası (Pompa 22, Harvard Apparatus, Güney Natick, MA üzerine monte beşiği (mikrodiyaliz multi-şırınga Rack, Harvard Apparatus, Güney Natick, MA) içine% 1 insan albumin-zenginleştirilmiş ringer laktat çözüm yükleyin .) Şırınga sürüş infüzyon pompası bar şırınga pistonu ile tam temas olduğundan emin olun. Şırınga çapı doğru pompa girmiş olduğunu onayladıktan sonra pompa hızını ayarlayın. Yaygın olarak kullanılan infüzyon oranları 2 4μl/min arasında değişmektedir. </li><li> Numune planı alan tanımlayın. Yukarıda açıklanan güneş yanığı, güneş yanığı kenarında kateter takmadan planı gibi, yapay olarak oluşturulmuş iltihaplı alan, örnekleme. </li><li> Alkol, örnek toplamak niyetinde küçük bir lezyon ters kenarlarında alan, veya site temizleyin. Bu silinen alanları için amaçlanan kateterin yerleştirilmesi ve çıkış noktaları olacaktır. Yeterli intra-kutanöz lidokain enjekte (enjeksiyon cilt beyazlaşma tarafından kanıtlandığı) bu sitelerin çok küçük bir bleb (maksimum 2 mm) oluşturmak için. Mikrodiyaliz kateter giriş ve çıkış noktaları cilt içi lidokain gibi sınırlı miktarda enjeksiyon biyoassay sonuçları değiştirmez, ancak çalışma konuları için önemli ölçüde daha az ağrılı kateterin yerleştirilmesi yapar. </li><li> Aseptik teknikleri kullanarak, keşfedilmeyi cilt alanının uzunluğu boyunca bağlı 23G iğne yardımı ile mikrodiyaliz kateter yerleştirin. Yerleştirme derinliği kutis ve subkutiste arasında arayüz. Yeterli bir derinliğe yerleştirilmesi optik kontrol edilebilir. Iğne, iğne ve ekli kateter ileri taşınır cilt gibi bazı cilt beyazlaşma biraz yukarı katlanır neden olmalıdır. Kanama meydana gelmelidir. Kanama meydana gelirse bu iğne istenenden daha derin bulunan ve yerleştirme derinliği ayarlanabilir olduğunu gösterir. Iğne derinin çıkış noktası üzerinden itilmiş sonra kateter uzunluğu boyunca damlacıkları görene kadar,% 1 albümin zenginleştirilmiş ringer laktat solüsyonu ile kateter yıkayın. Bu dikkatle mikrodiyaliz kateterin distal ucunu bir şırınga (23G iğne) iğne sonuna ekleme ve yavaş yavaş solüsyon enjekte yapılır. </li><li> Yıkamadan sonra kateter deri yoluyla ekli kateter beslemek için iğne hafifçe çekin. Kateterler, küçük çaplı, ve dolayısıyla kırılgan çünkü hassas davranılması gereklidir. Kateter çekin tamamen deri yoluyla dişli kadar, yani, kateterin distal ucu gömme büyük plastik boru tabanına giriş noktasında cilt dokunur. Yukarıda belirtildiği gibi, prosedürün sonunda kanama çok az optimal kateter onaylar. </li><li> Infüzyon pompası rafa dinlenme şırınga 23G iğne ucu kateterin distal ucu takın. Bakım kateter duvarın üzerinden iğne batırmak önlemek için gereklidir, potansiyel kaçak neden olur. </li><li> Kateterin proksimal ucundan iğne kesin. </li><li> ¼-inç pembe bant kullanımı, kateter çıkış yeri yakın cilt hazırlanan 1.5ml Microcent toplama tüpü takın. Microdialysate toplama izin için toplama tüpüne kateterin ucu yerleştirin. Önceden belirlenmiş r perfüzyon pompası Başlatyedik ve aralıklı bu teslim edilir ve toplanan hacmi kadar maçı kontrol. Miktarlar halinde, cilt giriş yeri kaçağı (bazen daha sıkı bir cilt giriş yeri üzerine plastik boru gömülü kateter parçası çekerek çözülebilir) ekarte edilmelidir kadar maç yok. Teslim edilir ve ciltlik eşleşmiyor Alternatif olarak, eğer bir kateter değiştirilmesi gerekebilir. </li><li> Örnekleme tam sonra, numuneler -80 ° C&#39;de depolama kadar kuru buz konur </li></ol>

<ol><li>Angst, M. S., Clark, J. D., Carvalho, B., Tingle, M., Schmelz, M., Yeomans, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+profile+in+human+skin+in+response+to+experimental+inflammation%2C+noxious+stimulation+and+administration+of+a+COX-inhibitor%3A+A+microdialysis+study%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Cytokine profile in human skin in response to experimental inflammation, noxious stimulation and administration of a COX-inhibitor: A microdialysis study.</a> Pain. 139, 15-27 (2008).</li>
</ol>

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Mikrodiyaliz teknikleri ve multipleks immunoassay teknoloji kombine kullanımının ilgi doku biyokimyasal olaylar içgörü sağlayan değerli bir gerçek zamanlı, in vivo insan biyoassay. Ağrı testleri gibi davranış testleri ile birlikte, yöntem, ağrı ve iltihaplanma aracılık biyokimyasalın karmaşık etkileşimleri inceleyerek sağlar. Periferik dokularda patoloji ile kronik enflamatuar ve ağrı koşulları patoloji mekanistik bir kavrayış sağlayan ağrı ve iltihaplanma, 2) arabuluculuk doku spesifik biyobelirteçleri belirlenmesi yöntemi 1) umut verici v...

<table><tbody><tr><td>Mikrodiyaliz kateteri</td><td>Araç</td><td>Dermal Dialysis</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Pompa 22</td><td>Araç</td><td>Harvard Apparatus</td><td>552219</td><td></td></tr><tr><td>Saalmann Multitester SBB LT 400</td><td>Araç</td><td>Saalmann GmbH</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>RM-12 IP-65 Radyometre</td><td>Araç</td><td>Dr. Grobel UV Elektronik GmbH</td><td>82120000/81112100</td><td></td></tr><tr><td>Komple Proteinaz İnhibitörü</td><td>Reaktif</td><td>Roche Group</td><td>11836145001</td><td></td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpü</td><td>Araç</td><td>E&amp;amp;K Scientific</td><td>380150-X</td><td></td></tr><tr><td>Albumin %5</td><td>Reaktif</td><td>ZLB Behring</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Laktatlı Ringer</td><td>Reaktif</td><td>Hospira Inc.</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Xylocaine-MPF</td><td>Diğer</td><td>AstraZeneca</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga 1mL</td><td>Araç</td><td>BD Biosciences</td><td>309602</td><td></td></tr></tbody></table>

nosiseptif ve İnflamatuar arabulucular doku Özel Ölçüm İnsan in-vivo biyoassay

Human In-Vivo Bioassay for the Tissue-Specific Measurement of Nociceptive and Inflammatory Mediators

Bu in vivo insan biyoassay insan gönüllüler ve hastalar çalışma için kullanılabilir. Örnekler aseptik takılı mikrodiyaliz kateterler (Dermal Diyaliz, Erlangen, Almanya) ile deri gibi yerinde doku sitelerinden toplanır. Bu örnekte gösterildiği insan gönüllüler üzerinde yapılan deneysel iltihaplı cilt interstisyel sıvı toplanması. Numune toplama diğer deneysel testler ile kombine edilebilir. Örneğin, aynı anda değerlendirme yerel piyasaya biyokimyasalın ve deneysel iltihaplı deride ağrılı uyaranlara subjektif hassasiyet, ağrı ve inflamasyon biyobelirteçleri tanımlamak için kritik biyokimyasal-davranışçı bağlantı sağlar. Sunan yaşayan insan organizması testi doku ağrısı ve / veya inflamasyon altında yatan spesifik süreçlere mekanistik anlayış sağlar. Bu yeni ilaç adaylarının - ağrılı ve / veya inflamatuvar koşulları tedavi hedeflemesi Bu yöntem aynı zamanda mevcut veya yeni müdahalelerin etkinliğini incelemek için uygundur. Bu makale, insan deneklerin deneysel iltihaplı cilt lezyonu interstisyel sıvı toplanması için mikrodiyaliz tekniklerinin kullanımı ile ilgili ayrıntılı bir açıklama sağlayacaktır. İnterstisyel sıvı numuneleri, genellikle multipleks boncuk dizisi immunoassay 50 mikrolitre hacmi gibi küçük numunelerin 100 analitler assaying izin yardımı ile işlenir.

In vivo ağrı ve inflamasyon aracılık biyokimyasalın ölçümü için ilgili doku siteleri (deneysel iltihaplı cilt) interstisyel sıvı örneklerinin toplanması için bir teknik sunulmuştur.

Nosiseptif ve İnflamatuar Arabulucular Doku Özel Ölçüm İnsan In-Vivo Biyoassay

Bu in-vivo insan biyolojik testi, insan gönüllüler ve hastalar üzerinde çalışmak için kullanılabilir. Örneklar, ... aracılığıyla cilt gibi ilgili doku bölgelerinden toplanır.

Bu video, kalibre edilmiş bir UV ışık kaynağı kullanılarak bir hastanın uyluk bölgesinde deneysel güneş yanığı oluşturulmasının 24 saat sonrasında başlamaktadır. Lokal anestezik uygulamasının ardından, bir mikrodiyaliz kateteri kesiler ile deri altı arasına yerleştirilir ve ardından deri boyunca çekilir. Kateterin proksimal ucuna bir perfüzyon şırıngası takılır ve perfüzyon pompasının çalıştırılmasıyla mikro lizat akışı ve toplanması sağlanır.Örnekler toplandıktan sonra, nosiseptif ve inflamatuar mediyatörlerin analizine hazır olana kadar -80 °C'de saklanabilir. Merhaba, ben Stanford Üniversitesi Anestezi Bölümü'nden Martin Angst. Ve merhaba, ben Martha Tingle, Stanford Üniversitesi'nde Dr. Angst tarafından 1995 yılında kurulan İnsan Ağrı Laboratuvarı'nın kıdemli araştırma hemşiresi ve yöneticisiyim.Bugün size, interstisyel sıvı toplamak amacıyla insan çalışma katılımcılarının deneysel olarak enflame edilmiş ciltlerine mikrodiyaliz kateterlerinin yerleştirilmesine yönelik bir prosedür göstereceğiz. Laboratuvarımızda bu tekniği, ağrı ve inflamasyonun aracılığında kritik rol oynayan biyokimyasalların dokuya özgü salınımını incelemek için kullanıyoruz. Haydi başlayalım.Deneysel deri e

human-vivo-bioassay-for-tissue-specific-measurement-nociceptive

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Belirli zaman noktalarında cerrahi yara biyokimyasal mediyatörler toplamak ve ölçmek için bir tekniktir.

Cerrahi Yaralar Nosiseptif ve İnflamatuar Arabulucular Toplama ve Ölçüm

Algoritmalar insan deneklerin deneysel iltihaplı deride ısı ve mekanik ağrı eşikleri değerlendirilmesi gösterilmiştir. Iki ağrı test paradigmalar, acı verici, iki büyük periferik sinir lifi popülasyonları bağımsız nosiseptif işleme incelemek, yani miyelinli olmayan C lifleri ve küçük A-delta lifleri miyelinli.

İnsan denekler üzerinde iltihaplı cilt ısı ve mekanik ağrı eşiğini Belirlenmesi

Bu video, insan akciğer dokusundan türetilmiş bağışıklık hücrelerinin Haemophilus influenzae ile inkübe edilmesiyle enfeksiyon sırasında inflamatuar mediatörlerin miktar tayinini göstermektedir. Akış sitometrisi, bakteriyel enfeksiyona yanıt olarak proinflamatuar sitokinlerin üretimi ile ilişkili olarak etiketli lenfositlerdeki sitokin floresansını ölçmek için kullanılır.

Enfekte İnsan Dokusundan Elde Edilen Hücrelerde İnflamatuar Mediatörlerin Miktar Tayini

Ağrılı nöropatiler (PN) olarak nosiseptif intraepidermal sinir lifleri (IENFs) değişiklikleri incelemek için, doğrudan nosiseptif IENFs gözlenen üç boyutlu morfolojik değişiklikleri incelemek olabilir protokolleri geliştirmiştir. IENFs üç boyutlu analiz PN İESL morfolojik değişiklikleri değerlendirmek için bir potansiyele sahiptir.

İnsan Cilt Biyopsiler içinde Nosiseptif İntraepidermal Sinir Elyaf üç boyutlu görüntüleme

Biz inflamatuvar aşamaları ayırt için invaziv olmayan bir görüntüleme yöntemi açıklanmaktadır. Luminol sistemik teslim nötrofillerinde MPO aktivitesi bağlı akut inflamasyon alanları ortaya koymaktadır. Bunun aksine, lusigenin enjeksiyon makrofajlarda Phox aktivitesi bağlı kronik inflamasyon görselleştirme sağlar.

In vivo Görüntüleme Yöntemi Akut ve Kronik İltihap ayırt

Bu opioid kaynaklı hiperaljezi ve farelerde tolerans gelişimini incelemek için bir protokol açıklar. Naif ve morfin ile tedavi edilen hayvanların, termal ve mekanik nosiseptif yanıtların ölçümü dayanarak, ağrı duyarlılığı (hiperaljezi) 'de artışı ölçmek ve kronik opiat uygulama ile bağlantılı analjezi (tolerans) azalma sağlar.

Termal ve Mekanik nosiseptik Usuller kullanma Farelerde Morfin kaynaklı Hiperaljezi ve Analjezik Hoşgörü Değerlendirilmesi

Bu yazıda, iltihaplanmanın iki farklı deneysel modelindeki temel matris metalloproteinazların in vivo aktivitesini görselleştirmek için aktive edilebilir bir optik görüntüleme probu kullanılarak floresan görüntülemenin uygulanmasını açıklanmaktadır.

Non-invaziv<emIn vivo</em&gt; Aktive Edilebilir Floresan Görüntüleme Ajanını Kullanan İnflamatuvar MMP Aktivitesinin Flüoresan Optik Görüntülemesi

Morfolojik değişiklikler, aktivasyon sonrasında bağışıklık duyarlı fibroblast hücrelerinde ortaya çıkar ve hücresel işe alma değişiklikleri teşvik. Genetik olarak tasarlanan fibroblast spesifik protein 1 (FSP1)-CRE ile birlikte 2-foton görüntülemenin kullanılması; tdtomato floxed-dur-floxed (TB/TB) fare hattı ve yeşil floresan etiketlenmiş lipopolisakkarid-fitc, biz dermal fibroblastlar ve morfolojik değişiklikler içinde lipopolisakkarid son derece spesifik alımı göstermek olabilir vivo.

İn vivo Iki renkli 2-foton görüntüleme genetiği etiketlenmiş Reporter hücrelerinin cilt içinde

HNSCC'nin sinjenik fare modelinde IL-1α'nın antitümör aktivitesini ve ilişkili toksisitesini incelemek için standart bir protokol tanımlanmıştır.

Polianhidrit IL-1α Nanopartiküllerinin In vivo Antitümör Aktivitesinin Değerlendirilmesi

Peptit vericilerini in vivo olarak ölçmek için yerleşik immünokimyasal yöntemler, çevrimdışı analiz için numune almak üzere mikrodiyaliz veya dökme sıvı çekilmesine dayanır. Bununla birlikte, bunlar mekansal zamansal sınırlamalardan muzdariptir. Mevcut protokol, mevcut tekniklerin sınırlamalarının üstesinden gelen kapasitif bir immünoprob biyosensörünün üretimini ve uygulanmasını açıklamaktadır.

Domuz Kalbinde Kapasitif İmmünoprob ile Nöropeptit Dinamiğinin İn Vivo Ölçümü

Protokol, farelerde diz hiperaljezisinin nasıl ölçüleceğini açıklar. Akut diz ağrısının fare modellerinde ve osteoartrit (OA) modellerinde örnekler gösteriyoruz.

Farelerde Diz Hiperaljezisinin Basınç Uygulama Ölçümü Kullanılarak Değerlendirilmesi

Keşfedin, deneysel güneş yanığı oluşturulan insan derisinden mikrodiyaliz kateteri kullanarak interstisyel sıvı örnekleme yöntemini. Bu teknik, ağrı ve inflamasyonun biyokimyasal aracılarını in vivo analiz etmek için kullanılır.

Nosiseptif ve İnflamatuar Arabulucular Doku Özel Ölçüm İnsan In-Vivo Biyoassay

Daha fazla video keşfet