Name: Homarus americanus Stomatogastric Sinir Sistemi Diseksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 26 min 22 s
Description: Öğrenin, Homarus americanus'un stomatogastrik sinir sisteminin ince diseksiyonunu izole etme yöntemini. Bu protokol, nörobiyolojide ritmik davranışları incelemek için sinir hücreleri fonksiyonunu araştırmada kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz danışmanı Dr. Havva Marder kabul etmek istiyorum. Bu araştırma, AE T. Ulusal Sağlık Eve Marder ve NS059255 hibe NS17813 Enstitüsü tarafından desteklenen

Istakoz, mide, bu protokolü başlamadan önce hayvan ve arkadaşı vallahi makale (Bierman ve Tobin, 2009) açıklandığı şekilde hazırlanmış olmalıdır. Aşağıda belirtilen adımları çoğunluğu bir diseksiyon mikroskop altında yapılacak. Bölüm Commissural Ganglia I-Yalıtımlı <ol><li> Orient çanak (dudak) ön uç ve arka uç (pilor) uzak olduğu doğru. </li><li> Çanak mümkün olduğunca düz yatıyor böylece mide tutturulmuş olduğundan emin olun. <ol><li> , Dudak, her tarafta yemek borusu aşağı pin. </li><li> Gerekirse, brüt diseksiyonu sırasında yerleştirilen diğer iğneler yeniden düzenlemek. </li></ol></li><li> Hipodermis çıkarın. <ol><li> Hipodermis gm2/gm3 kasları yakın tut, bu kaslar anterior yönde ayırın ve yavaşça çekin. </li><li> Herhangi bir bağlantı kırpma temel yağ hipodermis ayırın. Stomatogastric sinir sisteminin önemli bir parçası içine merkezi arter etrafında bakım arttı. Hipodermis hakkında gm1b kaslar arasındaki oturur stomatogastric ganglion 0.5 cm çapında, içinde sağlam bırakın. </li><li> Ayrılmış hipodermis kesti. </li></ol></li><li> Altta yatan doku beynin ayırın. <ol><li> Beynin ön kısmı mide ön kısmında commissural ganglionlarda bilateral proje iki büyük commissural sinirler belirleyin. </li><li> Bu sinirlerin bozulmadan bırakmak, forseps ile yavaşça beyin asansör ve beyin dokusunun geri kalanından ayırmak için kesmek. Stomatogastric sinir, beyin altından ve sağlam tutulmalıdır olarak bunu dikkatli olun. </li></ol></li><li> Dokuyu çevreleyen commissural ganglionlar ayırın. <ol><li> Commissural gangliyon biri commissural sinirler izleyin. </li><li> Iyon ve oğlu tanımlanması - Bu sinirlerin sağlam kalmalıdır. Commissural ganglion dışarı yayılan birçok sinir olacak. (Iyon ve oğlu hariç) çoğu kesin, ama bir ekstra sinir diseksiyonu bitirmek yerine commissural ganglion tutun bağlı bırakın. </li><li> Diğer commissural ganglion tekrarlayın. </li></ol></li><li> Lateralden mediale iyon ve oğlu temizleyin. Labial sinir, sinir sistemi, mide çapa gibi bırak. Özofagus ganglion iyon s kesiştiği edildi oturur. Inferior ventrikül sinir kapma ve altından kesmek için yukarı çekerek altında silebilirsiniz. </li></ol> Bölüm II-Yalıtımlı Stomatogastric Ganglion (STG) ve kalan sinirler. <ol start="7"><li> STG dokuyu çevreleyen ayırın. <ol><li> STG gm1b kas ve gm2a, b kaslar arasında çalışan bir arter içinde oturur. Gm2a, b kasları yakın arter kesik ucuna arayın. </li><li> Dvn ortaya çıkarmak için, yukarı ve anteriora arter kesik ucuna çekin. Kalan hipodermis seviyesine ulaşana kadar yukarı çekerek devam edin. Bir kez ayrılmış, kalan hipodermis dokunur seviyesine arter kesilmiş olabilir. </li><li> Istakoz kürsüsüne bulunan flep kesti. </li><li> Arter STG üzerindeki yağ içinde bir tünel yaptığı gözlemleyerek, arter üzerinde hipodermis yukarı kaldırın. Arter içinde bir bıçak, makas koyun ve üstündeki kas kesmek. STG yukarıda güvenli olduğundan emin olmak için kesilmiş olarak dvn görebilirsiniz kontrol edin. Arter aşağıdaki, anteriorda kesme devam edin. STG üzerinde kesim gibi, kas içine STG ve dalış aşağı stn anteriora yayılan görmek mümkün olacaktır. Anteriora STG yukarıdaki kas tamamen ayırmak için kesme devam edin. </li><li> Herhangi bir doku stn temizleyin. </li></ol></li><li> Çevreleyen doku AGN ayırın. (AGN kayıt düşünmüyorsanız bile, sağlam sinir ganglion hücre içi kayıtlar için aşağı pin bir kısmı ihtiyacınız olacaktır.) <ol><li> AGN lar daha iyi görmek için, kalan hipodermis ve altta yatan kas ince bir tabaka kaldırın. </li><li> STG Sadece arka dvn her iki tarafında yağ ve kas karanlık bir tünel tanımlar. </li><li> Tünel içinde bir makas bıçak sopa ve sinir üzerindeki doku kesmek. Izole etmek için, sinir, yanal kesme devam edin. (Birkaç milimetre ganglion iğneleyerek için yeterli, ama maruz kayıt planlıyorsanız AGN en az 5 mm.) </li><li> AGN innervates kas bağlantıları keserek ayırın. </li><li> Diğer AGN izole etmek için, diğer tarafta tekrarlayın. </li><li> Hem AGN s diseke edildikten sonra, mide STG bağlanan tüm kas ve doku kesti. </li></ol></li><li> Mvn yalıtın s LVN dallanma ve yağ altında yanal çaprazlayan küçük sinirlerin iki taraflı bir çift vardır. <ol><li> Ya yakınlarında, dvn bir tarafta yağ ile kesmek için makas ya da iki forseps iki LVN s içine dallarına Burada çok mvn s ve kesme riski olmaz. </li><li> Yağ tabakası yukarı kaldırın ve küçük mvn altında belirlemek. Bu sinirler yanal gm1b kasların sadece posterior medial çalıştırın. </li><li> Mvn üzerinde yağ tabakası, sinir şimdi bu yüzden karışık girmeyeceğim zedelemeden çıkarın. Diseksiyon sonunda mide kapalı lateral ucu. </li><li> Diğer mvn izole etmek için, diğer tarafta bu işlemi tekrarlayın. </li></ol></li><li> LVN ve posterior sinirler izole edin. <ol><li> LVN s şube yanal dvn kapalı, yukarıdaki yağ keserek bir LVN takip nerede başlatılıyor. Hazırlık bağlı olarak, bazen, sinir üzerindeki tüm yağ tabakası çıkardı olabilir. </li><li> Psn dalları noktaya kadar LVN ifşa devam edin. </li></ol></li><li> Pyn ayırın. <ol><li> Pyn bulup posteriora pilorusta üzerinde seyahat eden bir sinir olduğunu. </li><li> Bu bölgeyi kapsayan ince bir zar çıkarın. </li><li> Pyn bağlı pilorusta küçük bir bölümü, kesim pyn kesin. </li><li> Pilorik bölümde yavaşça kaldırın ve PDN verdiği şube ulaşana kadar, pyn her iki tarafta doku kesip . </li></ol></li><li> PDN ayırın. <ol><li> PDN bulup pilorik dilatör kas sinir posteriora seyahat. </li><li> Pilorik dilatör kas PDN bağlı küçük bir bölümünde, kesin. </li><li> Yavaşça, pilorik dilatör kas bölümü kaldırın pyn verdiği şube ulaşana kadar PDN her iki tarafında doku kesip. </li></ol></li><li> LVN pyn ve PDN bağlayan ventral LVN, tecrit edin. <ol><li> Pyn ve PDN ventral LVN bağlanmak üçgen şube noktada, küçük bir bölümü herhangi bir sinir izole vpln gibi ventral LVN kapalı şubeleri. Bu ventral LVN çekmek için bir tutamak olarak kullanılabilir. </li><li> Kolu kaldırın ve yere psn dal ulaşıncaya kadar ön yönde çalışan, ventral LVN iki tarafta doku kesip. </li></ol></li><li> Diğer tarafta LVN ve posterior sinirleri izole etmek için adımlar 10 - 13 tekrarlayın. </li><li> Mide stomatogastric sinir sistemi ayırın. <ol><li> Mide LVN tamamen ayırmak için, psn çekin ve LVN ve ventral LVN bağlı PDN ve pyn hariç, tüm doku ve sinirleri kesmek. Diğer tarafta bu işlemi tekrarlayın. </li><li> Her mvn lateral sonu kesin. Lateral uç kaldırın ve sinir ve altta yatan mide dokusu arasında herhangi bir yabancı ekleri kesti. </li><li> Anterior sonunda, herhangi bir yabancı ekleri commissural ganglionlar kesme, ve her iki tarafında labial sinir kesmek. </li><li> Görme tanımlamak ve sonra mide dokusunda herhangi bir ek ekleri kesme stomatogastric sinir sistemi tarayın. </li><li> Commissural ganglionlar üzerinde, ve mide kapalı stomatogastric sinir sistemi kabuğu, iki commissural sinirlerin ön ucuna alın ve yemeğin tarafa taşımak. Bunu yaparken, sinir sistemi, serbest kalan tüm ekleri kesme. </li></ol></li><li> Küçük Sylgard yemek hazırlayın. <ol><li> Küçük bir tabak içinde Sylgard yüzeyinde bazı mide dokusu iyice ovalayın. Bu tuzlu su yemeğin eşit olarak dağıtmak böylece Sylgard hidrofobik azalacaktır. </li><li> Sylgard tabak soğutulmuş tuzlu su ile doldurmak ve durulayın. </li></ol></li><li> Sinir sistemi, hem de commissural sinirlerin ön uçları kapma, büyük bir çanak sinir sistemi kaldırma ve küçük bir çanak içinde döşeme hazırlanan Sylgard çanak aktarın. </li><li> Tungsten tel kesme Minuten pimleri ve ince pimleri bir kombinasyonunu kullanarak küçük bir tabak içinde STNS Pin. <ol><li> Hazırlık aşağı ventriküler sinir Sylgard işaret olup olmadığını kontrol dorsal yüzü yukarı olduğunu emin olun. </li><li> Beyin çıkarın commissural sinirler pin. </li><li> Yavaşça, posteriora ve yanal her psn s çekme ve onları aşağı bağlantılarını sinir sistemi sıkı ve düz çekin . </li><li> PDN s pilorik dilatör kas çıkarın ve PDN pin s </li><li> Kaldırpyn s pilorik segment ve pyn s pin </li><li> Labial sinirler gibi kalan tüm sinirler izole Pin, mvn ve AGN s </li></ol></li><li> Desheath STG. <ol><li> STG Sylgard karşı düz ve yanal AGN ler, ön stn ve arka dvn gergin düzenlenen olun. </li><li> Dvn içinde akson görselleştirme etkinleştirmek için aydınlatma düzenleyin. </li><li> Küçük bir iğne veya ince tungsten iğne kullanarak, STG sadece arka dvn çevreleyen kılıf, küçük bir sığ delik olun . </li><li> Aksonlar sinir kılıfı yatay bir gözyaşı oluşturmak için, sırt, dvn boyunca iğne çekin. </li><li> STG posterior sinir kılıfı flep alın ve STG dorsal tarafında kılıf kaldırmak için anteriora çekin. </li></ol></li></ol><table border="1"><tbody><tr><td colspan="2"> Kısaltmalar: </td></tr><tr><td> STNS </td><td> Stomatogastric sinir sistemi </td></tr><tr><td> STG </td><td> Stomatogastric ganglion </td></tr><tr><td> COG </td><td> Commissural ganglion </td></tr><tr><td> stn </td><td> stomatogastric sinir </td></tr><tr><td> mvn </td><td> medial ventriküler sinir </td></tr><tr><td> iyon </td><td> alt özofagus sinir </td></tr><tr><td> oğlum </td><td> üstün özofagus sinir </td></tr><tr><td> AGN </td><td> anterior gastrik sinir </td></tr><tr><td> dvn </td><td> dorsal ventriküler sinir </td></tr><tr><td> LVN </td><td> lateral ventriküler sinir </td></tr><tr><td> psn </td><td> posterior mide sinir </td></tr><tr><td> vpln </td><td> ventral arka yan sinir </td></tr><tr><td> pyn </td><td> pilorik sinir </td></tr><tr><td> PDN </td><td> pilorik dilatör sinir </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Marder, E., Bucher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+pattern+generators+and+the+control+of+rhythmic+movements%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Central pattern generators and the control of rhythmic movements.</a> Curr. Biol. 11, R986-R996 (2001).</li>
<li>Nusbaum, M. P., Beenhakker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+small-systems+approach+to+motor+pattern+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A small-systems approach to motor pattern generation.</a> Nature. 417, 343-350 (2002).</li>
<li>Clemens, S., Massabuau, J. C., Legeay, A., Meyrand, P., Simmers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+modulation+of+interacting+central+pattern+generators+in+lobster+stomatogastric+ganglion%3A+influence+of+feeding+and+partial+pressure+of+oxygen%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">In vivo modulation of interacting central pattern generators in lobster stomatogastric ganglion: influence of feeding and partial pressure of oxygen.</a> J. Neurosci. 18, 2788-2799 (1998).</li>
<li>Bierman, H. S., Tobin, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gross+dissection+of+the+stomach+of+the+lobster%2C+Homarus+americanus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Gross dissection of the stomach of the lobster, Homarus americanus.</a> J Vis Exp. 27, (2009).</li>
<li>Maynard, D. M., Dando, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+of+the+stomatogastric+neuromuscular+system+in+Callinectes+sapidus%2C+Homarus+americanus+and+Panulirus+argus+%28Decapoda+crustacean%29%5BTitle%5D)+AND+%22Philos.+Trans.+R.+Soc.+Lond.+B+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean).</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268, 161-220 (1974).</li>
<li>Herrick, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+history+of+the+American+lobster%5BTitle%5D)+AND+%22Bull.+U.S.+Bur.+Fish%22%5BJournal%5D)">Natural history of the American lobster.</a> Bull. U.S. Bur. Fish. 29, 219-252 (1909).</li>
<li>Marder, E., Bucher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+circuit+dynamics+using+the+stomatogastric+nervous+system+of+lobsters+and+crabs%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs.</a> Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).</li>
<li>Bucher, D., Taylor, A. L., Marder, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+pattern+generating+neurons+simultaneously+express+fast+and+slow+rhythmic+activities+in+the+stomatogastric+ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Central pattern generating neurons simultaneously express fast and slow rhythmic activities in the stomatogastric ganglion.</a> J. Neurophysiol. 95, 3617-3632 (2006).</li>
<li>Mizrahi, A., Dickinson, P. S., Kloppenburg, P., Fénelon, V., Baro, D. J., Harris-Warrick, R. M., Meyrand, P., Simmers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+maintenance+of+channel+distribution+in+a+central+pattern+generator+neuron+by+neuromodulatory+inputs+revealed+by+decentralization+in+organ+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Long-term maintenance of channel distribution in a central pattern generator neuron by neuromodulatory inputs revealed by decentralization in organ culture.</a> J. Neurosci. 21, 7331-7339 (2001).</li>
<li>Schulz, D. J., Goaillard, J. M., Marder, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variable+channel+expression+in+identified+single+and+electrically+coupled+neurons+in+different+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Variable channel expression in identified single and electrically coupled neurons in different animals.</a> Nat. Neurosci. 9, 356-362 (2006).</li>
<li>Schulz, D. J., Goaillard, J. M., Marder, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+expression+profiling+of+identified+neurons+reveals+cell-specific+constraints+on+highly+variable+levels+of+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Quantitative expression profiling of identified neurons reveals cell-specific constraints on highly variable levels of gene expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104, 13187-13191 (2007).</li>
</ol>

Istakoz mide ve STNS anatomisi daha önce 5,6 olmuştur ve bu diseksiyon prosedür varyasyonları çeşitli çalışmalarda kullanılmıştır. Biz önce başlayan diseksiyonları 5-7 ve STNS 5,8 mide anatomisi aşina olma tavsiye ederiz. Böyle bir aşinalık, sinirler ve doku kaza sonucu hasar riskini azaltmak. Hazırlık sağlığını korumak için, serin bir ısıda hazırlanması korumak için kritik öneme sahiptir. Bu tuzlu su ˚ C tuzlu su, buzdolabında tutulan her 30 dakika 4 ile değiş tokuş ederek kolayca elde edilir. Soğuk tuzlu su dalmış, izole STNS hazırlık kaç saat için geçerli. STG ilgili Homarus Gammarus Kayıtlar in vitro 9 5 gün boyunca istikrarlı bir ritmik faaliyet göstermiştir; benzer sağlamlık H. görülmüştür americanus (atıl Pers..). Commissural ganglionlar STG modüle girişi devam eden motor kalıplarını korumak için gereklidir. Bu nedenle, normal bir ritmik aktivitesi bu ganglionlar ve iyon, oğlu korumak ve stn sinirlerin sağlam tutulmalıdır. (Mide Mill (GM) aksonları içeren), mvn s (Yanal Mide (LG) ve inferior Kardiyak (IC) aksonlar içeren), pyn AGN s: biz tarif diseksiyonu birkaç motor sinirleri (motor nöron aksonları içeren) korur (pilorik nöron (PY) aksonlar içeren), PDN ve LVN (Yanal pilorik (LP), Medial Mide (MG), LPG ​​aksonlar yanı sıra GM içeren (pilorik dilatör (PD) aksonları içeren), PD ve PY). Ek (veya farklı) sinirler diseksiyon, diğer motor nöron aksonları kaydedilebilir. Her birey tip motor nöron akson diseksiyon ve sinir kayıt kas innerve tarafından ayrı ayrı kayıt olabilir, bu tür nöron projeleri. Bu preparat, çeşitli sinir sistemi fonksiyon odaklı çalışmalar için kullanılan olabilir. Nöronların aktivitesi, somata veya aksonları hücre içi, keskin elektrot kayıtları kullanarak veya ekstraselüler sinirlerin elektrik impulsları kayıt ya da kayıt olabilir. Birçok iyon kanalları STG nöronların kısmen klonlanmış ve mRNA elle çekti somata 10,11 ölçülebilir.

<table><tbody><tr><td>İnce Tungsten Tel (0,001 in. çapında)</td><td>Alet</td><td>California Fine Wire Company</td><td></td><td>İnce pin olarak kullanmak için 1-2mm'lik parçalar halinde kesin.</td></tr><tr><td>Pens #5</td><td>Alet</td><td>Fine Science Tools</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>Minuten Pinleri</td><td>Alet</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>Moria Yaylı Makas (7mm bıçaklar)</td><td>Alet</td><td>Fine Science Tools</td><td>15370-52</td><td>Bunlar en üst segmenttir. Aynı firmadan daha ekonomik yaylı makaslar da temin edilebilir.</td></tr><tr><td>Petri Kabı (100x15mm)</td><td>Alet</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-12</td><td>2-4mm yüksekliğinde Sylgard 182 ile doldurun.</td></tr><tr><td>Sylgard 182</td><td>Diğer</td><td>Dow Corning</td><td>182</td><td></td></tr><tr><td>Pin Tutucu</td><td>Alet</td><td>Fine Science Tools</td><td>26018-17</td><td>Opsiyonel. Kılıf çıkarma işlemi sadece makas ve ince penslerle yapılabilir.</td></tr><tr><td>Süper ince pens #5SF</td><td>Alet</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Tungsten İğneler</td><td>Alet</td><td>Fine Science Tools</td><td>10130-05</td><td>Opsiyonel. Kılıf çıkarma işlemi makasla veya ince tungsten telden kesilen pinlerle yapılabilir.</td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

homarus americanus stomatogastric sinir sistemi diseksiyon

Homarus Americanus Stomatogastric Nervous System Dissection

Sistemleri faaliyet üretmek ve çevreye yanıt nasıl sinir anlayış hedefi, Nörobilimadamları ilgi faaliyet gösterirler ve erişilebilir ve deneysel yöntemler için uygun model sistemler açın. Amerikan ıstakoz stomatogastric sinir sistemi (STNS) (<i&gt; Homarus americanus</i&gt;;) Atlantik veya Maine ıstakoz da biliyorum ağlar ağlar ve nöromodülasyon üreten ritim eğitimi için bir model sistem olarak kurulmuştur. STNS stomatogastric ganglion (STG) merkezi projesi modülatör nöron içeren 3 ön ganglionlar (2 commissural ganglionlar ve özofagus ganglion) oluşur. STG iki merkezi desen üreten ağları oluşturan yaklaşık 30 nöronlar, kabuklularda beslenme davranışlarının altında yatan pilorik ve mide ağları içeren<sup&gt; 1,2</sup&gt;. Bu sistemin çalışma mümkün olsa da<i&gt; In vivo</i<sup&gt; 3</sup&gt; STNS izole zaman ritmik faaliyet üretmeye devam ediyor<i&gt; In vitro</i&gt;. Bir tabak içinde STNS Fiziksel izolasyon, intrasellüler elektrofizyolojik kayıtlar için ganglionlar somata ve ekstrasellüler kayıtları için STNS sinirler kolay erişim sağlar. STNS Yalıtımlı iki parçalı bir süreçtir. Hayvan mide diseksiyon ilk bölümünde, eşlik eden bir video makalede açıklanan<sup&gt; 4</sup&gt;. Bu video makalede, ince diseksiyon teknikleri mide STNS izole etmek için kullanılır. Bu prosedür, elektrofizyolojik kayıtlar için kullanılabilir bir sinir sistemi hazırlama sonuçları.

Biz Amerikan ıstakoz mide stomatogastric sinir sisteminin ince diseksiyon tarif (<i&gt; Homarus americanus</i&gt;).

Homarus americanus Stomatogastric Sinir Sistemi Diseksiyon

Sinir sistemlerinin nasıl aktivite ürettiğini ve çevreye nasıl tepki verdiğini anlamak amacıyla nörobilimciler, ... sergileyen model sistemlere yönelmektedirler.

Istakozdan ST mide sinir sistemini izole etme prosedürü, kaba ve ince diseksiyon olmak üzere iki kısma ayrılabilir. Bu video, STG olarak adlandırılan steato gastrik ganglion ve cogs olarak adlandırılan komissüral ganglionlar dahil olmak üzere, somatik mide sinir sisteminin mideden ince diseksiyonunu kapsamaktadır. Temel olarak, önce cgs'lerin izolesi, ardından St G'nin izolesi ile başlayarak, sinirler ve ganglionlar çevre dokulardan ayrılmalıdır. Bu prosedürün sonucunda, sinir sistemi fonksiyonlarına odaklanan çeşitli çalışmalarda kullanılmaya hazır, bir kap içerisinde iğnelenmiş sistematik mide sinir sistemi elde edilir.Merhaba, ben Brandeis Üniversitesi biyoloji bölümündeki Dr. Eve Martyr laboratuvarından Annalise Tobin. Merhaba, ben de Martyr Laboratuvarı'ndan Hillary Burman. Bugün size, midenin nasıl çıkarıldığını görmek amacıyla homarus Americana ıstakozunun midesinden somatik gastrik sinir sistemini izole etme protokolünü göstereceğiz.Lütfen JoVE'deki beraberindeki video protokolümüze bakınız. Bu prosedürü, ritmik davranışlar oluşturmada küçük nöral devrelerdeki nöronların işlevini incelemek için laboratuvarımızda kullanıyoruz. Öyleyse hadi başlayalım.Başlamak için, bunun nasıl gerçekleştirildiğini görmek adına ıstakoz midesinin hazırlanması gereklidir. Beerman ve Tobin tarafından hazırlanan beraberindeki videoyu izleyin; öncelikle, dudağın bulunduğu iç ucun sizden uzağa, arka ucun ise size doğru bakacak şekilde örneği yönlendirin. Prosedürün bu kısmı, preparatın daha hassas bir şekilde iğnelenmesiyle başlar.Yemek borusunu dudağın her iki yanından iğneleyin ve gerekirse, makroskobik diseksiyon sırasında yerleştirilen diğer iğneleri midenin düz duracağı şekilde yeniden düzenleyin. Ardından, önce gm, iki GM üç kaslarının yakınından tutarak, hipodermisi bu kaslardan ayırıp nazikçe anterior yöne doğru çekerek çıkarın. Hipodermisi, somatik gastrik sinir sisteminin bir kısmını çevreleyen santral arter etrafındaki bağlantıları dikkatlice keserek alttaki yağ dokusundan ayırın; hipodermisi bütün halde bırakın.GM one B kasları arasında yer alan somatik mide ganglionunun yaklaşık 0,5 santimetre yarıçapındaki alanı içerisinde, ayrılmış olan hipodermis artık kesilerek çıkarılabilir. Bir sonraki adım, beyni alttaki dokudan ayırmaktır. Beynin ön kısmından, midenin ön kısmındaki Commis ganglionlarına iki yan boyunca uzanan iki büyük commis sinirini tanımlayarak başlayın.Bu sinirleri sağlam bırakarak, beyni pensle nazikçe kaldırın ve beyni dokunun geri kalanından ayırmak için kesin. Bunu yaparken dikkatli olun, çünkü somatik gastrik sinir beynin altındadır ve sağlam tutulmalıdır. Komissural ganglionları çevre dokudan ayırmak için, öncelikle komissural sinirlerden birini bir gangliona kadar takip ederek onları konumlandırın.Şimdi ION ve SON'u belirleyin. Bu sinirler sağlam kalmalıdır. Her komissüral gangliondan dışarı doğru uzanan birçok sinir bulunacaktır.ION ve SON hariç çoğunu kesin. Diseksiyonu tamamlayana kadar komiss ganglionunu yerinde tutmak için ek bir siniri bağlı bırakın. Şimdi diğer komiss ganglionundaki sinirleri aynı şekilde bulun ve kesin.Ardından, ION ve SON'u lateralden mediale doğru temizleyin. Hazırlığın mideye sabitlenmesi için labial siniri sağlam bırakın. Özofageal ganglion, iOS kesişiminde yer alır.İnferior ventriküler siniri kavrayıp yukarı doğru yönlendirerek alt kısmını kesebilir ve bu alanı temizleyebilirsiniz. Bir sonraki adım, STG'yi çevre dokulardan ayırmaktır. STG, GM one B kasları ile GM two a B kasları arasında uzanan bir arterin içinde yer alır.gm yakınındaki arterin kesik ucunu arayın. İki AB kası, DVN'yi açığa çıkarmak için arteri yukarıya ve içe doğru çeker. Kalan hipodermise kadar yukarı çekmeye devam edin.Ayrıldıktan sonra, arter, kalan hipodermise değdiği seviyeye kadar kısaltılabilir. Şimdi, istakozun rostrum kısmında yer alan kas flebini kesin. Ardından, arterin üzerindeki hipodermisi yukarı kaldırın.Arter, yağ dokusunun içinde bir tünel oluşturur. STG'nin üzerindedir. Makasınızın bir ucunu arterin içine yerleştirin ve üzerindeki kası kesin.Güvenli bir şekilde ilerlediğinizden emin olmak için kesim yaparken DVN'yi görebildiğinizi kontrol edin. STG'nin üzerinden, arteri takip ederek ön yönde kesmeye devam edin. STG'nin üzerinden kesim yaparken, STG'den ön yönde çıkan ve kasın içine doğru dalan STN'yi görebileceksiniz.STG üzerindeki kası tamamen ayırmak için anteriora doğru kesmeye devam edin. STN çevresindeki tüm dokuları temizleyin. Şimdi diğer birkaç siniri izole etme işlemine geçebiliriz.Çevre dokulardan ayrılması gereken sıradaki sinirler AGN'lerdir. AGN'den kayıt yapmayı planlamasanız bile, ganglionu sabitlemek için bu sinirin bir kısmına ihtiyaç duyacaksınız. AGN'leri daha iyi görebilmek için, STG'nin hemen arkasındaki kalan hipodermisi ve altındaki kas tabakasının ince bir katmanını kaldırın.DVN çubuğunun her iki yanındaki yağ ve kas tabakasında koyu renkli bir tünel arayın, bir makas ağzını tünelin içine sokun ve sinirin üzerindeki dokuyu kesin. Siniri izole etmek için sinir boyunca lateral olarak kesmeye devam edin. Ganglionu sabitlemek için birkaç milimetre yeterlidir, ancak A GN'den kayıt almayı planlıyorsanız en az beş milimetrelik bir alanı açığa çıkarın.Bağlantıları keserek bir AGN'yi innerve ettiği kastan ayırın. Şimdi, diğer AGN'yi izole etmek için bu işlemi diğer tarafta tekrarlayın. Her iki AGN diseke edildikten sonra, STG'yi mideye bağlayan tüm kasları ve dokuyu kesin. Ardından, M vns'leri izole edin.Bunlar, LVN'den dallanan ve yağ tabakasının altından lateral olarak seyreden bilateral bir çift küçük sinirdir. DVN'nin iki LVN'ye ayrıldığı noktanın yakınında, tek bir taraftaki yağ dokusunu kesmek için makas veya iki adet pens kullanın. Burada M VNS'den uzak olduğunuz için onları kesme riski taşımazsınız.Yağ tabakasını kaldırın ve altında küçük bir sinir olup olmadığına bakın. M VNS, GM one B kaslarının seviyesinin hemen posteriorunda lateral olarak uzanır. Sinirin karışmasını önlemek için şimdilik siniri bütün bırakarak MVN üzerindeki yağ tabakasını temizleyin.Sinir sistemi diseksiyonunun sonunda, lateral ucunu ve M VNS'ye olan tüm bağlantılarını keseceksiniz. Diğer MVN'yi izole etmek için aynı işlemi diğer tarafta tekrarlayın. İzole edilecek sıradaki yapılar, posterior sinirlerdeki LVN'lerdir.LVN'ler, DVN'den lateral olarak ayrılır. LVN'yi, üzerindeki yağı keserek takip edin. Hazırlığa bağlı olarak, bazen sinirin üzerindeki tüm yağ tabakası çekilerek çıkarılabilir.PSN'nin ayrıldığı noktaya kadar LVN'yi açığa çıkarmaya devam edin. Şimdi PYN'yi bulun. Bu, porilerin üzerinden posteriora doğru ilerleyen bir sinirdir.Bu bölgeyi örten ince membranı kaldırın. PYN kanalına bağlı olan pori kısmından küçük bir kesit alarak PYN'yi izole edin. Ardından, pric bölümünü nazikçe kaldırın ve PDN'ye bağlanan dala ulaşana kadar PYN'nin her iki yanındaki dokuları kesin.Pupilla dilatatör kasının posterioruna doğru ilerleyen PDN sinirinin izolasyonuna geçiniz. Öncelikle, PDN'ye bağlı olan pupilla dilatatör kasının küçük bir bölümünü kesiniz. Ardından, pupilla dilatatör kası bölümünü nazikçe kaldırınız.PYN'ye bağlanan dala ulaşana kadar PDN'nin her iki yanındaki dokuyu kesin. Şimdi, PYN ve PDN'nin ventral LVN ile birleştiği üçgen dallanma noktasında, PYN ve PDN'yi LVN'ye bağlayan ventral LVN'yi bulun; VPLN gibi ventral LVN'den ayrılan herhangi bir küçük sinir bölümünü izole edin. Bu bölüm, tutamağı kaldırarak ventral LVN'yi çekmek için bir tutamak olarak kullanılacaktır.PSN'nin ayrıldığı noktaya ulaşana kadar anterior yönde ilerleyerek, ventral LVN'nin her iki yanındaki dokuları kesin. Böylece midenin bir tarafındaki posterior sinirleri başarıyla diseke etmiş oldunuz. Şimdi, LVN'yi ve diğer taraftaki posterior sinirleri izole edin.LVN'yi mideden tamamen ayırın. PSN'yi çekin ve PDN ve PYN dışındaki LVN ve ventral LVN'ye bağlı tüm doku ve sinirleri kesin. Bu işlemi diğer taraf için tekrarlayın.Ardından, her bir MVN'nin lateral ucunu kesin. Lateral ucu kaldırın ve anterior uçtaki MVN'ye ait tüm bağlantıları kesin. Comm ganglionlarına olan tüm bağlantıları kesin ve her iki taraftaki labial siniri kesin.Mide dokusuna olan ek bağlantıları belirlemek için somatik gastrik sinir sistemini görsel olarak tarayın ve ardından bu bağlantıları kesin. Tüm bağlantıları kestikten sonra, her iki commis sinirinin Commis ganglionlarının üzerindeki ön ucundan tutarak somatik gastrik sinir sistemini mideden ayırabilir ve kabın kenarına çekebilirsiniz. Bu işlemi yaparken, sinir sistemini tamamen serbest bırakmak için ek bağlantıları kesin.Diseksiyon işlemi tamamlanmıştır. Sinir sisteminin iğneleneceği agar kabını hazırlayarak başlayın. Küçük kaptaki agarın yüzeyine bir miktar mide dokusunu iyice sürün.Bu işlem, salinin kap boyunca eşit şekilde dağılması için agarın hidrofobikliğini azaltacaktır. Agar kabını soğutulmuş salin ile durulayın ve doldurun. Her iki komissür sinirinin anterior uçlarından tutarak sinir sistemini hazırlanmış agar kabına aktarın.Sinir sisteminin büyük kapttan kaldırılıp küçük kaba yerleştirilmesi. Sinir sistemini sabitlemek için minyatür iğneler ve daha ince iğnelerden oluşan bir kombinasyon kullanın. Önce tungsten telden kesin; inferior ventriküler sinirin syl guard'dan uzağa baktığını kontrol ederek preparatın dorsal tarafının yukarıda olduğundan emin olun.Şimdi beyni çıkarın ve komissür sinirlerini iğneleyin. Her bir PSN'yi posteriora ve laterale doğru çekip iğneleyerek, bağlı ve düz haldeki sinir sistemini nazikçe gerin. Ardından, P dilatör kasını PNS'den ayırın ve bu sinirleri iğneleyin.Ardından, GYN'lerden pilorik segmenti çıkarın ve GYN'leri sabitleyin. Son olarak, labial sinirler, m vns ve AGN'ler gibi geri kalan izole sinirleri sabitleyin. Bir sonraki adım, S st'nin kılıfını çıkarmaktır.İlk olarak, S st G'nin S korumasına düz bir şekilde dayandığından ve lateral AGN'ler tarafından sıkıca tutulduğundan emin olun. Anterior STN ve posterior DVN, DVN içindeki aksonların görüntülenmesini sağlamak için aydınlatmayı ayarlar. Ardından küçük bir iğne veya ince bir tungsten iğne kullanın.STG'nin hemen posteriorunda, DVN'yi çevreleyen kılıfta küçük ve sığ bir delik açın. Aksonların dorsalinde boyanan DVN boyunca iğneyi çekerek sinir kılıfında yatay bir yırtık oluşturun. Şimdi, STG'nin posteriorundaki bir sinir kılıfı flebini tutun, anteriora doğru çekin ve kılıfı STG'nin dorsal tarafından ayırmak için kesin.Kılıf çıkarıldıktan sonra, preparat yaklaşık 4 ile 15 santigrat derece arasında soğuk tutulduğu sürece deneyler için hazırdır. Bu preparatın beş güne kadar deneysel olarak stabil kaldığı kaydedilmiştir. Bozulmamış Sato mide sinir sistemi, Syl guard kaba iğneyle sabitlenmelidir.Gösterildiği üzere, sinirler hasarsız olmalı ve hücre dışı kayıtlar için erişilebilir durumda olmalıdır. Bozulmamış STG'nin hücre gövdeleri görünür olmalı ve hücre içi kayıtlar için erişilebilir olmalıdır. Lobster Homa Americana'nın somatik mide sinir sisteminin nasıl izole edileceğini göstermiş olduk.Bu diseksiyonu gerçekleştirirken, herhangi bir dokuya veya sinire zarar vermemek için anatomiye çok hakim olmak önemlidir. Ayrıca, preparatı 4 ile 15 °C arasındaki serin bir sıcaklıkta tutmak kritiktir. Preparat serin tutulduğunda, diseksiyon sırasında her yarım saatte bir salin çözeltisini, buzdolabında 4 °C'de muhafaza ettiğiniz soğuk salin ile değiştirerek bunu kolayca sağlayabilirsiniz.Saatlerce, hatta günlerce canlı kalabilir. İşte bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

homarus-americanus-stomatogastric-nervous-system-dissection

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Jonah yengeç stomatogastric sinir sistemi (STNS)...

Kanser Borealis Stomatogastric Sinir Sistemi Diseksiyon

Biz Amerikan ıstakoz mide brüt diseksiyon tarif...

Brüt Diseksiyon Lobster Mide, Homarus americanus</em

Bu deneyin temel amacı, primer duyusal nöronlar bir hayvan için proprioseptif bilgi olarak eklem hareketleri ve pozisyonları bilgi iletmek nasıl anlamak için. Bu raporun ek bir amacı diseksiyon mikroskobu altında diseksiyon ve nöron inceleyen hazırlık anatomi mevcuttur.

Kerevit Karın kas Reseptör Organlar: Propriyoseptör Öğrenci Laboratuvar Egzersiz

Burada yengeç stomatogastric ganglion nöronlar detaylı aktivite, hızlı ve yüksek çözünürlüklü floresan voltaj duyarlı boya görüntüleme için bir metodoloji mevcut.

Gerilim duyarlı Boyalar ile Yengeç Stomatogastric Ganglion Nöronlar Optik Görüntüleme

Biz deniz deniz tavşan sinir sisteminin diseksiyonu...

Duyusal nöronlar izolasyonu<em&gt; Aplysia californica</em&gt; Glutamaterjik Akımlar Patch Kelepçe Kayıtlar için

Lamprey tam omurilik hasarı sonrası lokomosyonu kurtarmak. Ancak, bazı spinal çıkıntı nöronlar iyi rejeneratörler ve diğerleri değildir. Bu kağıt tam omurilik kesilerde üreten ve in situ hibridizasyon için Wholemount beyinleri ve omurilik hazırlama, konut deniz taşemen larvaları (ve son zamanlarda dönüştürülmüş yetişkinler) için teknikleri göstermektedir.

Sonradan wholemount için komple Omurilik Yaralanmalı ve Beyin Diseksiyon Protokolü<em&gt; Yerinde</em&gt; Larva Deniz taşemen içinde Hibritleşme

Burada kerevit abdominal sinir kordonunun diseksiyonunu tarif ediyoruz. Ayrıca, yüzücü motor nöronlarından hayali hareketi kaydetmek için elektrofizyolojik bir teknik de gösteriyoruz.

Kerevit ve yüzgeç Sistemi: Sinir Kordon ve Motorlu Pattern Extracellular Recordings ve Diseksiyon için Pratik Kılavuzu

Davranışsal tahliller, nöronal işlevi anlamak için güçlü araçlar sağlar. Burada, model nematod Pristionchus pacificus ve akrabalarında bulunan yırtıcı beslenme davranışını ölçmek için çeşitli protokoller sunuyoruz. Ek olarak, ağız yapıları ve dişler dahil olmak üzere yırtıcı beslenme adaptasyonlarını analiz etmek için yöntemler sunuyoruz.

içinde Yırtıcı Beslenme Davranışları tahlil<em&gt; Pristionchus</em&gt; Ve Diğer Nematodlar

Burada, bu kasların beslenme davranışı sırasındaki rollerini anlamak için deniz yumuşakçaaplikası kalinonik kalinonik besleyici cihaza kasların minimal invaziv cerrahi lezyoniçin bir protokol sıyoruz.

Aplysia californica Odontofor Kaslar Için Minimal İnvaziv Lezyon Tekniği

Bu protokol, transgenik olmayan omurgasız türlerde, absorbans voltajı duyarlı boyalar ve bir fotodiyot dizisi kullanılarak nöronal popülasyon aktivitesini tek hücreli çözünürlükle görüntüleme için bir yöntem sunar. Bu yaklaşım, görüntüleme ve analizin tek bir gün boyunca takip edilebildiği hızlı bir iş akışı sağlar.

Transgenik Olmayan Omurgasızlarda Tek Nöron Çözünürlüğü ile Ağ Dinamiklerini Kaydetmek için Fotodiyot Tabanlı Optik Görüntüleme

Öğrenin, Homarus americanus'un stomatogastrik sinir sisteminin ince diseksiyonunu izole etme yöntemini. Bu protokol, nörobiyolojide ritmik davranışları incelemek için sinir hücreleri fonksiyonunu araştırmada kullanılır.

Homarus americanus Stomatogastric Sinir Sistemi Diseksiyon

Daha fazla video keşfet