Name: ES Hücre türetilen nöroepitelyal Hücre Kültürleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Öğrenin, embriyonik kök hücrelerden nöroepitelyal öncü hücrelerin SDIA kullanılarak türetilmesini. Bu yöntem, sinirsel doku mühendisliği ve rejeneratif tıp stratejilerini geliştirmeye katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Adım 1 <ol><li> Plaka mitomisin-C α-MEM medya jelatin kaplı (30 dakika süreyle% 0.01) 6 kuyucuğu 70.000 / cm2 bir yoğunluk MS5 hücreleri (2,5 saat süreyle 10 mg / ml) ggrowth inhibe. </li><li> Hücreleri eklenir ve bir tek tabaka (gece büyüme üzerinde) oluşmuştur, SRM geçmek. </li><li> Elle olan bir şırınga yardımıyla, 27 ES hücre kültürleri ½ G iğne ES hücre kolonileri izole eder. </li><li> MS5 hücreleri (genellikle 6 plaka başına 2-3 koloni), düşük yoğunluklu 1 ml mavi ucu ve plaka koloniler dikkatle Tritrurate. </li></ol> Not: Embriyonik kök hücrelerin, aynı zamanda, kollajenaz veya tripsin kullanarak enzimatik yayılma alınabilir. Adım 2 <ol><li> Rozet içeren koloniler oluşana kadar 14-21 gün MS5 besleyiciler ES hücreleri büyütün. </li></ol> Not: Değişim medya sık sık. Rozet, sömürge ve SRM (3) 300-500 ng / ml Noggin eklenirse onların oluşumunu büyük ölçüde artabilir dış kenarları genellikle . Bazı farklılaşma protokolleri, SRM N2-medya ile değiş tokuş edilebilir ve hücre özellikleri (2-5) teşvik etmek için, büyüme ya da diğer faktörler ile desteklenmiş. Adım 3 <ol><li> Izole etmek ve rozet almak, 27 ½ G iğne mikroskop altında. </li></ol> Not: kesme ve MS5 stromal hücreler toplama kaçının. Koloniler rozet dolu, bir de tüm koloni ayırabilirsiniz. Adım 4 <ol><li> Aspire rozet, kümeler, poli-L-ornitin (% 0.001) ve fibronektin (1 mcg / ml) veya laminin (1 mcg / ml) kaplı 6 kuyu üzerine 1 ml mavi ucu ve plaka bunları bunları dikkatle tritrurate N2-Bir medya genellikle bFGF (20 ng / ml) ile desteklenmiştir. Rozet reform ve genişleyecektir. </li></ol> Not: hücre yaşamını geliştirmek için, bir tabak damlacıkları küçük kümeler hücre yoğunluğu artırmak için. Bu adım aynı zamanda, hücre özellikleri (2-5) teşvik etmek için ek bir büyüme ya da diğer faktörler ile N2-Bir medya tamamlayan tarafından değiştirilebilir.

<ol>
	<li>Kawasaki, H., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+midbrain+dopaminergic+neurons+from+ES+cells+by+stromal+cell-derived+inducing+activity.">Induction of midbrain dopaminergic neurons from ES cells by stromal cell-derived inducing activity.</a> Neuron. 28, 31-40 (2000).</li><li>Perrier, A. L., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+midbrain+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells.">Derivation of midbrain dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 12543-12548 (2004).</li><li>Pruszak, J., Isacson, O., Sullivan, S., Cowan, C., Eggan, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+dopaminergic+neurons.">Directed differentiation of human embryonic stem cells into dopaminergic neurons.</a> Human Embryonic Stem Cells: The Practical Handbook. , (2007).</li><li>Pruszak, J., Sonntag, K. C., Aung, M. H., Sanchez-Pernaute, R., Isacson, O. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Markers+and+methods+for+cell+sorting+of+human+embryonic+stem+cell-derived+neural+cell+populations.">Markers and methods for cell sorting of human embryonic stem cell-derived neural cell populations.</a> Stem Cells. 25, 2257-2268 (2007).</li><li>Sonntag, K. C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+yield+of+neuroepithelial+precursors+and+midbrain-like+dopaminergic+neurons+from+human+embryonic+stem+cells+using+the+bone+morphogenic+protein+antagonist+noggin.">Enhanced yield of neuroepithelial precursors and midbrain-like dopaminergic neurons from human embryonic stem cells using the bone morphogenic protein antagonist noggin.</a> Stem Cells. 25, 411-418 (2007).</li><li>Kawasaki, H., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+dopaminergic+neurons+and+pigmented+epithelia+from+primate+ES+cells+by+stromal+cell-derived+inducing+activity.">Generation of dopaminergic neurons and pigmented epithelia from primate ES cells by stromal cell-derived inducing activity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 1580-1585 (2002).</li><li>Ko, J. Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+embryonic+stem+cell-derived+neural+precursors+as+a+continuous,+stable,+and+on-demand+source+for+human+dopamine+neurons.">Human embryonic stem cell-derived neural precursors as a continuous, stable, and on-demand source for human dopamine neurons.</a> J Neurochem. 103, 1417-1429 (2007).</li><li>Hong, S., Kang, U. J., Isacson, O., Kim, K. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+precursors+derived+from+human+embryonic+stem+cells+maintain+long-term+proliferation+without+losing+the+potential+to+differentiate+into+all+three+neural+lineages,+including+dopaminergic+neurons.">Neural precursors derived from human embryonic stem cells maintain long-term proliferation without losing the potential to differentiate into all three neural lineages, including dopaminergic neurons.</a> J Neurochem. , (2007).</li><li>Zhang, S. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+subtype+specification+from+embryonic+stem+cells.">Neural subtype specification from embryonic stem cells.</a> Brain Pathol. 16, 132-142 (2006).</li><li>Pankratz, M. T., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+neural+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+via+an+obligated+primitive+anterior+stage.">Directed neural differentiation of human embryonic stem cells via an obligated primitive anterior stage.</a> Stem Cells. 25, 1511-1520 (2007).</li><li>Lazzari, G., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+derivation+of+neural+rosettes+from+cloned+bovine+blastocysts:+a+model+of+early+neurulation+events+and+neural+crest+specification+in+vitro.">Direct derivation of neural rosettes from cloned bovine blastocysts: a model of early neurulation events and neural crest specification in vitro.</a> Stem Cells. 24, 2514-2521 (2006).</li><li>Pomp, O., Brokhman, I., Ben-Dor, I., Reubinoff, B., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+peripheral+sensory+and+sympathetic+neurons+and+neural+crest+cells+from+human+embryonic+stem+cells.">Generation of peripheral sensory and sympathetic neurons and neural crest cells from human embryonic stem cells.</a> Stem Cells. 23, 923-930 (2005).</li></ol>

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Bu protokol, SDIA kullanarak insan ES hücrelerinin nöroepitelyal hücreleri üreten ve izole farklı adımları gösteriyor. Bu yöntemin uygulama manifoldu ve belirtilen nöron (örneğin 1, 2, 5-9) üretmek için birçok protokol olmuştur. Rozet anterior fenotip (2, 5, 10) nöral tüp hücreleri benzerler ve aynı zamanda nöral krest atalarıdır (11, 12) içeren düşünülmektedir. Buna ek olarak, belirli faktörler tarafından belirlenen kültür koşulları desenli olabilir çünkü onlar plastisite belirli bir düzeyde muhafaza. Böylece, onlara ES hücre farklılaşması...

<table><tbody><tr><td>L-Glutamin</td><td></td><td>Life Technologies tarafından üretilen GIBCO</td><td>25030</td><td></td></tr><tr><td>alpha-MEM</td><td></td><td>Life Technologies tarafından üretilen GIBCO</td><td>12571</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin/streptomisin</td><td></td><td>Life Technologies tarafından üretilen GIBCO</td><td>15140</td><td></td></tr><tr><td>Knockout-DMEM</td><td></td><td>Life Technologies tarafından üretilen GIBCO</td><td>10829</td><td></td></tr><tr><td>KnockOut serum ikamesi</td><td></td><td>Life Technologies tarafından üretilen GIBCO</td><td>10828</td><td></td></tr><tr><td>MEM esansiyel olmayan amino asit solüsyonu</td><td></td><td>Life Technologies tarafından üretilen GIBCO</td><td>12383</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td></td><td>Life Technologies tarafından üretilen GIBCO</td><td>11330</td><td></td></tr><tr><td>N2-A takviyesi</td><td></td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>07152</td><td></td></tr><tr><td>Mitomisin-C</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0503</td><td></td></tr><tr><td>Tip-A jelatin</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1890</td><td></td></tr><tr><td>poli-L-ornitin</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4957</td><td>%0,01'lik çözelti</td></tr><tr><td>Laminin</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-2020</td><td></td></tr><tr><td>Fibronektin</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2006</td><td></td></tr><tr><td>Temel fibroblast büyüme faktörü (bFGF)</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>13256</td><td></td></tr><tr><td>27 1/2 G iğneli 1 mL şırınga</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>309623</td><td></td></tr><tr><td>N2-A besiyeri</td><td>besiyeri</td><td></td><td></td><td>DMEM/F12 + %1 N2-A takviyesi </td></tr><tr><td>Serum ikame medyası (SRM)</td><td>besiyeri</td><td></td><td></td><td>Knockout-DMEM + %20 Knockout serum ikamesi + %1 MEM temel olmayan amino asit çözeltisi + 2 mM L-glutamin</td></tr><tr><td>&amp;alpha;-MEM besiyeri</td><td>besiyeri</td><td></td><td></td><td>&amp;alpha;-MEM + %10 FBS + 2 mM L-glutamin + %1 penisilin/streptomisin</td></tr><tr><td>MS5</td><td>hücre hattı</td><td></td><td></td><td>stromal hücreler </td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>6 kuyucuklu plakalar</td><td></td><td></td><td></td><td>doku kültürü için</td></tr></tbody></table>

es hücre türetilen nöroepitelyal hücre kültürleri

ES Cell-derived Neuroepithelial Cell Cultures

Embriyonik kök hücrelerin yeni tedavilerin geliştirilmesi için cazip bir araç haline getirir tüm germ hücreleri ayırt etmek için bir potansiyele sahip. Genel olarak, ES hücrelerinin farklılaşma, daha sonra yayılır ve olgun hücre fenotipleri içine ayırt edilebilir olgunlaşmamış progenitör hücreler, ilk oluşturmak için konsept izler. İlk olarak, olgun sinir hücrelerine olgunlaşmamış nöroepitelyal öncüleri ve ikinci, farklılaşma türetme ve genişleme: Bu aynı zamanda sinir hücrelerinin gelişiminde iki önemli adımlar takip ettiği ES hücre kökenli bir nöron için geçerlidir. Neuroectoderm dahil olmak üzere tüm germ hücreleri farklılaşma ortaya koymaktadır embriyoid gövde (EB) oluşumu, ES hücrelerinin sinir atalarıdır üretmek için ortak bir yöntem dayanmaktadır. Kafatası kemik iliği kaynaklı stromal hücreler (1) ile birlikte kültür ES hücreleri tarafından elde edilebilir stromal hücre kaynaklı etkinlik inducing (SDIA), nöroepitelyal hücre gelişimi neden için alternatif ve daha verimli bir yöntem kullanır. , EB oluşumu ve SDIA Her ikisi de, sinir benzemeye düşünülmektedir rozet benzeri yapıların geliştirilmesi, tüp ve / veya nöral krest gibi atalarıdır ortaya koymaktadır. Sinir öncüleri tanımlı kültür koşulları kullanarak belirli nöronlar ve glia hücreleri içine alacak şekilde genişlemiştir ve daha farklılaşmış, izole edilebilir. Burada, üretim ve izolasyon gibi rozet, stromal hücre hattı MS5 (2-5) ile birlikte kültür deneylerinde açıklar.

Stromal hücre kaynaklı etkinlik inducing (SDIA) kullanarak embriyonik kök (ES) hücreleri nöroepitelyal öncüleri türetilmesi.

ES Hücre türetilen nöroepitelyal Hücre Kültürleri

ES hücreleri, tüm germ tabakalarından hücrelere farklılaşma potansiyeline sahiptir ve bu durum onları yeni terapilerin geliştirilmesi için cazip bir araç haline getirmektedir. ...

es-cell-derived-neuroepithelial-cell-cultures

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Burada fare epidermal nöral krest kök hücreleri (EPI-NCSC) izole etmek için yöntem gösteriyor. Tekniği içerir mikro diseksiyon, bıyık kıl follikülleri, şişlik izole ve doku kültürü içine placeing. 4 gün - 3 gün içinde EPI-NCSC alt tabaka üzerine çıkıntı eksplantlar göç etmeye başlar.

Fare Epidermal Sinir Crest Kök Hücre (EPI-NCSC) Kültürler

Atılır insan fetal kortikal doku sinir kök hücrelerin izolasyonu ve kültürü üzerinde basit ve güvenilir bir yöntem açıklanmıştır. Bilinen insan nörolojik bozukluklar türetilen Kültürler farmakolojik etkinliğini değerlendirmek için bir platform sağlamak gibi, hücresel ve moleküler patolojik süreçleri karakterizasyonu için kullanılabilir.

Atılan İnsan Fetal Kortikal Doku Sinir Kök Hücre Üretimi

İnsan neuroprogenitor hücreleri (NPC) çoğalan koşullar altında genişletilmiştir. NPC nörotrofinlerin bir kombinasyonunun mevcudiyetinde nöron zengin kültürler içine ayırt edildi. Nöronal belirteçler immunofloresan boyama ile tespit edilmiştir. Nöron saf bir popülasyonu izole etmek için, NPC PEN membran slaytlar üzerinde farklılaştırılmış ve lazer yakalama mikrodiseksiyon uygulandı.

Kültür farklılaştırılmış insan Neuroprogenitor Hücreler Nöronlar Lazer Yakalama Mikrodisseksiyon

Yetişkin beyin hasat nöral kök hücreler sinir sistemi gelişiminin temel araştırma rejeneratif tıpta potansiyel klinik uygulamaları keşfetmek için çeşitli uygulamalar kullanılmaktadır artmaktadır. Bu deneysel sonuçların ses için kritik bu hücreleri büyümek için kullanılan yalıtım ve kültür koşullarında titiz kontrolü yapar.

Yetişkin Kemirgen Beyin konvansiyonel ve konvansiyonel olmayan Bölgelerinden Nöral Kök Hücreler Büyüyen

Farklılaşmış insan nöral kök hücreleri (hNSC'ler) üzerindeki miRNA'lardaki değişiklikleri karakterize etmek amacıyla, üç boyutlu bir sistemde hNSC farklılaşmasını, miRNA PCR dizisi ile mikroRNA ekspresyonundaki değişikliklerin değerlendirilmesini ve miRNA hedef tahmini için hesaplamalı analizi ve ikili lusiferaz testi ile doğrulanmasını açıklıyoruz.

Üç Boyutlu Kültürleri, mıkroRNA Analizi ve Putatif Hedef Genler üzerinde bir İnsan Sinir Kök Hücre Hattı Farklılaşma

Bu yayın, çocuklardan nazal epitel mukozasının başarılı bir şekilde örneklenmesi ve kültürlenmesi ve bu hücrelerin indüklenmiş Pluripotent Kök Hücrelere (iPSC'ler) yeniden programlanması için yöntemleri göstermektedir.

Çocuklar Primary Burun Epitel Hücreleri yetiştirmek ve uyarılmış pluripotent kök hücrelerin içine programlayın

Epitelden mezenkimal geçişe (EMT) kanserlerin invaziv hale gelmesine izin verir. EMT'yi araştırmak için, serum ve enzimlerden yoksun bir nöral kök hücre (NSC) tabanlı in vitro model tanımlanmıştır. Bu standartlaştırılmış sistem, hücre göçünün, gen ve protein ekspresyonunun kantitatif ve kalitatif değerlendirmesine izin verir. Model, ilaç keşfi için uygundur.

Ilaç keşfi için uygundur EMT araştırma için enzim ve serum içermeyen nöral kök hücre kültürü modeli

Burada sunulan insan embriyonik kök hücrelerinin tek hücreli kültür ve nöral progenitor hücrelere sonraki farklılaşma için bir protokoldür. Protokol basit, sağlam, ölçeklenebilir ve ilaç tarama ve rejeneratif tıp uygulamaları için uygundur.

İnsan Embriyonik Kök Hücrelerinin Tek Hücre Kültürünü Kullanarak Etkin Nöral Farklılaşma

Sunulan protokol, küçük molekül bileşiklerinin nörat dışı büyüme testini ve nörotoksisite değerlendirmesi için bir yöntem tanımlamaktadır.

İnsan Nöral Progenitor Hücre Kaynaklı Nöronlar ile Bir Neurite Outgrowth Assa ve Nörotoksisite Değerlendirmesi

Burada, erişkin murin subventriküler bölgesinden izole edilen genişletilmiş nöral kök hücrelerde (NSC'ler) gen iletim verimliliğini artırmak için tasarlanmış bir nükleofeksiyon sistemini açıklıyoruz. Bulgular, bu yöntemin NSC'lerde gen bozulmasını önemli ölçüde iyileştirdiğini, geleneksel transfeksiyon protokollerinin etkinliğini aştığını ve hücre sağkalım oranını artırdığını göstermektedir.

Erişkin Murin Subventriküler Bölgesinden Nöral Kök Hücrelerin İzolasyonu, Genişlemesi ve Nükleofeksiyonu

Fare embriyonik kök hücrelerinden kraniyal nöral krest hücreleri üretmek için tekrarlanabilir boyutta nöroküreler üreten üç boyutlu (3D) bir in vitro farklılaşma protokolü sunuyoruz. Bu metodolojinin önceki protokollere kıyasla değişkenliği azalttığını ve kraniyal nöral krest hücre gelişimini incelemek için çoğullanmış test için nasıl kullanılabileceğini gösteriyoruz.

Kraniyal Nöral Krest Hücreleri Çoğullanmış Test için Üç Boyutlu İn Vitro Farklılaşma Protokolü

Öğrenin, embriyonik kök hücrelerden nöroepitelyal öncü hücrelerin SDIA kullanılarak türetilmesini. Bu yöntem, sinirsel doku mühendisliği ve rejeneratif tıp stratejilerini geliştirmeye katkı sağlar.

ES Hücre türetilen nöroepitelyal Hücre Kültürleri

Daha fazla video keşfet