Name: Hazırlanması Drosophila Embriyolar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-03-13T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: Öğrenin Drosophila embriyoları için asma bırak yöntemiyle canlı görüntüleme hazırlama tekniğini. Bu basit ve ekonomik protokol, nem kontrolü ve gaz değişimi sağlayarak embriyoların sıkışmasını önler.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz minnetle Discovery Hibe yanı sıra, Kanada Doğal Bilimler ve Mühendislik Araştırma Konseyi (NSERC) Araştırma Araçları ve Çalgı Hibe yoluyla BHR destek kabul ediyorsunuz. Ayrıca H. Oda ve örnek canlı görüntüleme sekansları kullanıldı genetik stokları sağlamak için Bloomington Drosophila stok Center kabul etmiş sayılırsınız.

Hazırlık <ol><li> Üzüm suyu standart agar plaklarına 4 embriyo toplayın. Bu otomatik bir Drosophila Yumurta Collector (flymax Bilimsel Cihazlar Ltd.) Kullanmak için uygundur. Senkron kullanarak embriyo koleksiyonları istenilen gelişimsel aşamada yeterli sayıda embriyo elde etmek için yapılmalıdır dechorionations sayısını azaltacaktır düzenledi. </li><li> Çift taraflı bant, bir mikroskop lamı bir parça takarak dechorionation slayt hazırlayın; bant desteğini kaldırmak. </li><li> Odanın iyi uyacak şekilde bir parça doku keserek canlı görüntüleme odası hazırlayın. Iyi doku ve distile su ile ıslatın. </li><li> 1:1 oranında karıştırın Halokarbon yağı (Halokarbon Ürünleri A.Ş.) viskozite serisi 700 ve 56 serisi. Karışım saklanır ve süresiz kullanılabilir. </li><li> Lamel (22 X 40 mm, No: 2) yüzey üzerinde birkaç küçük damla Halokarbon yağı koyun. Hacmi önemli değildir ama 20-40 ul sipariş olmalıdır. </li></ol> Prosedür <ol><li> Jeweler forseps ya (5) sayılı bir çift veya çok ince bir boya fırçası kullanarak üzüm suyu agar plaklarına bir stereomikroskopta yardımı ile embriyolar toplamak. Embriyolar birbirlerine ve forseps ipuçları sopa eğilimindedir; kolayca yığınlarda toplanmıştır. </li><li> Bir stereomikroskopta yardımı ile hafifçe düşük forseps ipuçları dechorionation slayt bant yüzeye yapıştırılır embriyoların yığınları. </li><li> Yine stereomikroskopta kullanarak, yavaşça iç vitellin membran (vitellin membran rüptüre ise embriyo patlaması) çatlaması olmaksızın dış mumlu koryon açık kırmak için forseps yan embriyoların dürtmek veya inme. </li><li> Dış koryon rüptüre edildikten sonra, koryon embriyo tease dechorionated embriyo forseps yüzeye yapışma eğilimi. Dechorionated embriyo bant yüzeyine dokunmaktan kaçının dikkat edin. </li><li> En kısa sürede bir embriyo dechorionated olduğu gibi, lamel Halokarbon petrol önceden hazırlanmış damlasına kadar hızlı bir şekilde aktarın. Halokarbon yağ damlası yüzey dechorionated embriyo taşıyan forseps ucu Touch - bu yağın içine forseps embriyo püskürmesi. </li><li> Yağ damlası embriyo transferi onaylayın. Bu siyah bir arka plan üzerinde çalışmak ve eğik bir açıyla fiber optik aydınlatma kaynağı kullanmak çıplak göz ile yapılabilir. </li><li> Denemeden önce başka bir embriyo dechorionate için herhangi bir yağ, forseps temizleyin. Petrol kaplı Forseps dechorionation daha zor hale koryon yüzeyinde daha az satın alma var. </li><li> Dechorionated embriyolar Halokarbon yağ içinde yüzen. Forseps veya bir fırça kullanma ve bir stereomikroskopta izlerken, yağ damlası alt embriyo itin ve istenilen pozisyona düzenlemek. </li><li> Canlı görüntüleme odasının çok üzerinde lamel hızla çevirin. Embriyoların istenilen yönde lamel karşı dinlenme olduğunu onaylayın. Yağı kaldırma kuvveti nedeniyle embriyoların lamel alt yüzeyi karşı yüzer. Lamel canlı görüntüleme odasına bant ile sabitleyin. Bant sonu ve canlı görüntüleme odasının iyi lamel arasındaki boşluğu kapsadığı alan kaset delik keserek odasına havalandırınız. </li><li> Dik bir floresan mikroskop ya da floresan stereomikroskopta embriyoların görüntü için kullanılır. </li></ol>

<ol><li>Kiehart, D. P., Galbraith, C. G., Edwards, K. A., Rickoll, W. L., Montague, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+forces+contribute+to+cell+sheet+morphogenesis+for+dorsal+closure+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Multiple forces contribute to cell sheet morphogenesis for dorsal closure in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 149, 471-490 (2000).</li>
<li>Schock, F., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+processes+associated+with+germ+band+retraction+in%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Cellular processes associated with germ band retraction in.</a> , 248-2429 (2002).</li>
<li>Reed, B. H., Wilk, R., Schock, F., Lipshitz, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrin-dependent+apposition+of+Drosophila+extraembryonic+membranes+promotes+morphogenesis+and+prevents+anoikis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Integrin-dependent apposition of Drosophila extraembryonic membranes promotes morphogenesis and prevents anoikis.</a> Curr. Biol. 14, 372-380 (2004).</li>
<li>Wieschaus, E. p, Nusslein-Volhard, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWieschaus%2C+Ep+%22Drosophila%3A+a+practical+approach%22">Drosophila: a practical approach</a>. Roberts, D. B. , IRL Press Limited. Oxford, England. 199-227 (1986).</li>
</ol>

Biz asılı damla protokol dediğimiz canlı görüntüleme analizi, Drosophila embriyolar hazırlarken yeni bir yöntem açıklanmaktadır. Ne yazık ki, ters bir mikroskop ile çalışıyorsanız asılı damla protokolünü kullanmak mümkün değildir. Bu durumda sandviç tekniği (soyut yukarıda açıklandığı gibi) ve embriyoların sıkıştırma bir sorun olmaya devam ediyor olması gerekir. Morfogenetik hareketi ile ilişkili güçleri hesaplamak için, hücre şekli ve büyüklüğü ölçülür deneylerde, dik bir mikroskop ve asılı...

Mikroskop lamı, lamelleri (22 x 40 mm, No 2), çift taraflı bant, kuyumcu Kullanıcı forseps (Dumont tarzı No 5: Standart donanım ve asılı damla protokolü kullanılarak, canlı görüntüleme için embriyolar hazırlamak için gerekli malzemeleri aşağıdaki öğeleri içerir ), Halokarbon yağ serisi 56 ve 700 serisi (Halokarbon Ürünleri A.Ş.), maket bıçağı veya tek kenar jilet, kağıt mendil, makas, damıtılmış su, genel amaçlı bant ve 20-40 ul sunmak için uygun bir pipetlemeyin. Canlı görüntüleme protokolü de ısmarlama bir canlı görüntüleme odası gerektirir. Bu, standart bir mikroskop lamı (75 X 25 mm) boyutları 5 mm polikarbonat plastik levha düşünüyorum kesim ve bir rotor kullanarak slayt (20 X 55 mm) 3mm derin depresyon oluşturmak için hazırlanmıştır. Stereomikroskopta (diseksiyon mikroskobu) ve fiber optik aydınlatma kaynağı da gereklidir.

hazırlanması drosophila</emasma bırak protokolü kullanarak canlı görüntüleme> embriyolar

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

Yeşil floresan proteini (GFP) timelapse canlı görüntüleme, doku morfolojilerinden, hücre-hücre adezyon veya hücre ölümü gibi dinamik süreçlerin genetik düzenleme çalışmak için güçlü bir tekniktir tabanlı. Drosophila embriyolar ifade GFP kolayca ya stereoskopik veya konfokal mikroskopi kullanılarak görüntülü. Herhangi bir canlı görüntüleme protokolü amacı, dehidratasyon ve hipoksi gibi zararlı etkileri en aza indirmek için. Drosophila embriyolar canlı görüntüleme analiz için hazırlanması için Önceki protokolleri Halokarbon yağ dechorionated embriyolar yerleştirme ve bir Halokarbon gaz geçirgen zar ve bir lamel arasında sandviç yer var<sup&gt; 1-3</sup&gt;. Bu şekilde montaj embriyolar ile sıkıştırma giriş morfolojilerinden herhangi bir biyomekanik tabanlı analiz için istenmeyen bir komplikasyondur temsil eder. Asılı damla protokol, canlı görüntüleme sırasında, embriyo mükemmel canlılığı sonuçları çağrı ve embriyolar sıkıştırılmış olmasını gerektirmez yöntemi. Kısaca, asılı damla protokol, nemli bir oda içinde pozisyonda sabit da, bir lamel, askıya Halokarbon petrol bir damla embriyo yerleştirme içerir. Gaz değişimi ve dehidrasyon önlenmesi için ek olarak, bu düzenlemenin timelapse satın alma sırasında pozisyon sürüklenen bunları önlemek için Halokarbon yağ embriyoların kaldırma kuvveti yararlanır. Bu video canlı görüntüleme için asılı damla protokolünü kullanarak Drosophila embriyolar toplamak ve hazırlamak için nasıl ayrıntılı olarak anlatılmaktadır. Bu protokol stereomicroscopy veya herhangi bir dik bileşik floresan mikroskop kullanarak görüntüleme dechorionated embriyolar için uygundur.

Drosophila embriyolar canlı görüntüleme analizi hazırlama, basit, ucuz ve etkili bir yöntem sunulmuştur. Bizim protokol nem ve gaz değişimi sağlar ve Drosophila embriyo sıkıştırmak değil. Bu yöntem, GFP tabanlı bir stereomikroskopta ya da dik bileşik mikroskop kullanarak Drosophila embriyoların canlı görüntüleme için uygundur.

Hazırlanması Drosophila</emAsma Bırak Protokolü kullanarak Canlı Görüntüleme> Embriyolar

Yeşil floresan protein (GFP) tabanlı zaman ayarlı canlı görüntüleme, ... gibi dinamik süreçlerin genetik düzenlenmesini incelemek için güçlü bir tekniktir.

Merhaba. Benim adım Bruce Reed. Kanada'nın Ontario eyaletindeki Waterloo şehrinde bulunan Waterloo Üniversitesi Biyoloji Bölümü'nde yardımcı doçentim. Bugün, canlı görüntüleme analizi için yumuşak embriyolarınızı hazırlamak amacıyla geliştirdiğimiz yeni bir tekniği belgelemek için bu video arşivini oluşturuyoruz.Drosophila embriyoları kullanılarak canlı görüntüleme analizi gerçekleştirirken sıklıkla zaman ayarlı (time-lapse) görüntüleme yapıyoruz ve bu işlem birkaç saat sürebiliyor. Bu nedenle, embriyoların hem dehidrasyondan hem de hipoksiden korunduğu bir tekniğe sahip olmak önemlidir. Ayrıca, embriyonun herhangi bir sıkışmasını önleyecek bir teknik geliştirmek istiyoruz.Montaj için, asılı damla hazırlığı adını verdiğimiz çok basit, ucuz ve etkili bir yöntem geliştirdik. Asılı damla hazırlığı, stereo mikroskopi veya herhangi bir dik bileşik mikroskop kullanılarak embriyoların canlı görüntüleme analizleri için uygundur. Bu zaman ayarlı film, asılı damla protokolü kullanılarak hazırlanan ve zaman ayarlı floresan mikroskopi ile görüntülenen GFP eksprese eden sekiz embriyoyu göstermektedir.Bu görüntüleme dizisi, dört saatten fazla geçen süreyi temsil etmektedir. Hareketin başlaması,

the-preparation-drosophila-embryos-for-live-imaging-using-hanging

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Drosophila hemocytes gelişmekte olan embriyonun bütünlüğü içinde dağılırlar . Bu protokol, floresan etiketli hemocytes embriyoları kullanılarak bu göçler montaj ve görüntü nasıl gösteriyor.

Uygulamalarda Canlı Görüntüleme Drosophila melanogaster Embriyonik Hemocyte Göçler

VE Dik Görüntüleme Drosophila Embriyolar

Bireysel hazırlanması Drosophila</emCanlı Görüntüleme için> Yumurta Chambers

SAC kardeş kromatidler arasında mitotik segregasyon izlenmesi, sinyali başlatır nerede kinetochore olduğunu. A metodunda kromozom hareketi ile kinetochore proteinler ve koordinasyon birinin seçilmesi ve devir görselleştirme tarif...

Living Görselleştirilmesi Dinamik Kinetochore Protein Davranış ve Kromozom Hareket tarafından Mitotik Checkpoint incelenmesi<em&gt; Drosophila</em&gt; Sinsityal Embriyolar

Bu videoda, canlı Drosophila embriyolarına reaktifler veren mikroenjeksiyonların nasıl gerçekleştirileceği açıklanmaktadır. Araştırmacılar bu yöntemi, embriyo gelişiminin erken aşamalarında nükleik asitler ve proteinler gibi eksojen bileşikleri tanıtmak için kullanabilirler. Öne çıkan protokol, herhangi bir çözünür reaktifin enjeksiyonu için prosedürün nasıl kurulacağını ve gerçekleştirileceğini gösterir - burada, canlı görüntüleme deneyleri için bir floresan protein.

Canlı Drosophila Embriyolarının Mikroenjeksiyonu: Reaktiflerin Gelişmekte Olan Embriyoya Erken Verilmesi

Burada apoptotik hücre boşluk dinamikleri eğitim için etkili bir yöntem...

Apoptotik hücresi Temizliği görüntülenmesi sırasında Canlı<em&gt; Drosophila</em&gt; Embriyo

Bu protokol, canlı Drosophila pupa göz nöroepitelini görüntülemek için etkili bir yöntem sunar. Bu yöntem, doku hareketini ve düzensiz topolojiyi telafi eder, birden fazla GFP etiketli bağlantı proteininin kullanılması yoluyla hücre sınırlarının görselleştirilmesini geliştirir ve kolayca monte edilebilen bir görüntüleme teçhizatı kullanır.

Canlı-görüntüleme Drosophila Pupa Göz

Burada sunulan mikroenjekte etmek ve aynı anda görüntü birden fazla Drosophila embriyoembriyonik gelişim sırasında bir plaka tabanlı, yüksek içerik görüntüleyici kullanarak bir protokoldür.

Drosophila Embriyo Hazırlama ve Canlı Hücre Mikroskopisi Için Mikroenjeksiyon Otomatik Yüksek İçerik Analizörü Kullanılarak Gerçekleştirildi

Işık tabakası bazlı floresan mikroskopisi gelişim biyolojisinde en değerli araçtır. Karşılaştırmalı çalışmalarda önemli bir konu ortam değişkenliğidir. Protokolümüz, birden fazla örneğin eşzamanlı canlı görüntülenmesi için deneysel bir çerçeveyi açıklar ve bu nedenle bu sorunu pro-aktif olarak ele alıp gidermektedir.

Örnek Oda Bazlı Işık Tabakası Floresan Mikroskoplarında Birden Fazla Böcek Embriyosunun EşZamanlı Canlı Görüntülenmesi

Burada, geç embriyonik Drosophila erkek gonadını canlı olarak görüntülemek için gerekli bir diseksiyon protokolü sunuyoruz. Bu protokol, normal koşullar altında veya transgenik veya farmakolojik manipülasyondan sonra dinamik hücresel süreçlerin gözlemlenmesine izin verecektir.

Geç Embriyonik Drosophila Gonad'ın Diseksiyonu ve Canlı Görüntülemesi

Bu protokol, geleneksel GFP/mCherry etiketi yaklaşımları kullanılarak tespit edilmesi zor olan düşük bolluktaki proteinlerin veya translasyon sonrası modifikasyonların canlı görüntülenmesini sağlamak için özelleştirilmiş antikor bazlı floresan etiketlemeyi ve erken Drosophila embriyolarına enjeksiyonu açıklar.

Floresan Antikor Enjeksiyonu ile Canlı Drosophila Embriyolarında Düşük Bolluktaki Proteinlerin ve Translasyon Sonrası Modifikasyonların Görselleştirilmesi

Öğrenin Drosophila embriyoları için asma bırak yöntemiyle canlı görüntüleme hazırlama tekniğini. Bu basit ve ekonomik protokol, nem kontrolü ve gaz değişimi sağlayarak embriyoların sıkışmasını önler.

Hazırlanması Drosophila Embriyolar

Daha fazla video keşfet