Dorsal önbeyin eksplantlar Büyüme Faktörü-Kaplı Boncuk Yerleştirme

İşte bunlar kullanacağım ilk boncuk türü. Onlar jel mavisi jel boncuklardır. Yumuşaktırlar.

Bu yüzden, bu boncukları Xs'e yerleştirmek için bir ağız pipetinin ucunda havuzlanmış bir cam pipet kullanmam gerekiyor. Sert bir boncuk türüdür ve bu boncukları bir tungsten iğnesi kullanarak X eksplantlarına yerleştireceğim. İşte bunlar, ilk olarak bunsen brülörünü kullanarak eriteceğim cam kılcal borular.

Sonra daha ince bir uç oluşturmak için onları çekeceğim. Bu yüzden kılcal boruyu alevin ortasında tutuyorum ve tüp eridikçe yuvarlıyorum. Yumuşadığını hissedebiliyorum.

Onu alevden kaldıracağım ve sonra çekeceğim. Güzel bir düz kesim yapabilmem için bu elmas uçlu kalemle kılcal boru boyunca bir çizgi çizeceğim. Sonra temizlemek için uçlarını alevle parlatacağım.

Ucunu parlatmak için kılcal damarı alevin içinden geçireceğim ve açıklığı kılcal damardan geçen boncuk yerine bir boncuk yakalayabilecek şekilde küçülteceğim. Unutulmaması gereken önemli bir nokta, kılcal boruyu alevin içinde çok uzun süre tutmak istememenizdir. Aslında çok hızlı bir geçiş, aksi takdirde mühürlenir.

Genelde bunlardan birkaçını yaparım çünkü birçoğu ucun alevle kapatıldığı yerde ortaya çıkar. Kontrol etmek zor, bu yüzden sadece birkaç tane yapıyorsunuz. Bu, ucun mühürlendiği bir örnektir.

Bu iyi bir pipet örneğidir. Bu einor tüpüne 250 mikrolitre agel boncuk pipetledim ve ıslattıkları azi solüsyonunu çıkarmak için onları bir mililitre PBS ile beş kez yıkayacağım. Boncukların yerleşmesi için yaklaşık üç dakika bekleyeceğim ve sonra fazla PBS'yi aspire edeceğim ve bunu dört kez daha tekrarlayacağım.

Boncuklar henüz tam olarak oturmadı, bu yüzden boncuklar yerleşti ve fazla PBS'yi aspire edeceğim ve bunu dört kez tekrarlayacağım. Ve sonunda 300 mikrolitre PBS ekleyeceğim ve boncuklarla çalışmaya başlayacağım. Bu standart bir ağız pipeti ve ben sadece çektiğim kılcal damarı alacağım ve yolun yaklaşık üçte biri kadar oraya iteceğim.

İlk olarak, pipetleri PBS ile doldurun. Genellikle sadece bir kılcal hareketle dolar. Bu 30 milimetrelik kültür kabının bir kapağı ve ben mavi renkte bir damla boncuk koydum.

Ve yanında küçük bir PBS damlası var. Ve bu tabakta beş mikrolitrelik bir protein çözeltisi damlası var. Bu durumda, B ve P dörttür, ancak ağız pipetini kullanarak tercih ettiğiniz bir proteini kullanabilirsiniz.

Buradaki mavi daireden bir boncuk aktaracağım, PBS damlasında bir kez durulayın. Daha sonra boncuğu ağız pipetiyle alıp protein çözeltisi damlacığına yerleştireceğim ve oda sıcaklığında yaklaşık bir saat veya dört derece birkaç saat inkübe edeceğim. İşte orada PBS'de bir boncuk havuzu görüyorsunuz ve doğru boyutta boncukları seçmem gerekiyor.

Çok küçüklerse, sadece ağız pipetinden geçerler. Sadece sonunda oturmaları gerekiyor. Şimdi görüyorsunuz ki orada birkaç boncuk seçtim, üç büyük boncuk ve üç küçük boncuk.

Deneyde daha büyük boncukları kullanacağım. Şimdi büyük bir boncuğu PBS damlasından protein çözeltisi damlasına aktaracağım. Ve bunu yapmak için, dilimi nazikçe ağız pipetinden geri çekeceğim.

Bu bir emme emme hareketi değil, sadece biraz negatif baskı uygulamak için. Ve sonra onu aktaracağım ve sonra temelde dilimi tekrar ağzımın üzerine yerleştireceğim. Boru kafası, üfleme değil, sadece ritmi uçtan itmek için biraz pozitif basınç ekliyor.

Şimdi protein çözeltisi damlacığında beş boncuğum var ve bunları birkaç saat boyunca dört derecede veya alternatif olarak oda sıcaklığında yarım saat ila bir saat arasında inkübe edeceğim. İşte bu, daha önce incelediğim patlıcanlarla birlikte ortamda yüzen zarı içeren kültür yemeği. Pipetimin ucunu alacağım ve medyanın bir kısmını emeceğim.

Boncukları X exexplain'e yerleştirmeden hemen önce bir damla ortamda sadece bir kez durulayacağım. Bunlar akrilik boncukları alıp yerleştirmek için kullanacağım tungsten iğneleri. Bu tungsten iğnesi ve şimdi tutucusunda.

Ve bunlar bazı güzel forsepsler. 45 derecelik bir açıyla. Bu PBS havuzundan bir boncuğu kaldırmak ve boncuğu bir damla protein çözeltisine aktarmak için forsepsli Tungsten iğnemi kullanacağım.

Agel boncuklarında yaptığım gibi. Agel boncuklarda olduğu gibi, bu akrilik boncukları PBS'de beş kez duruladım ve bu plakaya bir damlacık aktardım. Daha sonra tungsten iğnemi forsepste kullanarak bir boncuğu bir protein damlasına aktaracağım ve tıpkı jel boncuklarda yaptığım gibi kuluçkaya yatıracağım.

Yani bu bir boncuk kaldırmak. Sağ elimi masaya sıkıca dayıyorum ve sıvının içine inerken iğneyi sabitlemek için sol işaret parmağımı kullanıyorum, bir boncuğa iğneyle hafifçe dokunuyorum ve yavaşça sıvıdan kaldırıyorum. Bazen iğneyi düşürür, bu yüzden başka bir tane için geri dönün.

Şimdi sol elimle 45 derece açılı forsepslerim var. Noktalar aşağıda, boncuğu ve iğneyi sıvıya dokunduruyorum ve kullanıyorum. Forsepsin ucunu kullanarak hafifçe bastırın.

Şimdi proteinde beş boncuğum var. Tamam, sağ elimle boncuğun içinde tungsten iğnem var ve sol elimle, forsepslerim tekrar ucu aşağı gelecek şekilde onları dördü ittiğim gibi, burada x ex'te tekrar yapacağım. 37 derecede inkübe edin ve süre belirli bir teste bağlıdır.