Parkinson Hastalığı için murin Model: 6-OH Dopamin Lezyon Davranış Testi

Merhaba, ben Fab sva. Federal University of Genic biyomedikal bilim laboratuvarından mezun bir öğrenciyim. Bu videoda, beyin lezyonlarını indüklemek için mouse modeline altı-hidroksidopamin nörotoksinini uygulamak amacıyla stereotaktik cerrahi gerçekleştireceğim; bu teknik Parkinson hastalığının çalışılması için kritik öneme sahiptir.

Ayrıca, üst morfin kaynaklı rotasyon testi aracılığıyla motor bozukluk derecesinin nasıl değerlendirileceğini göstereceğim. Materyaller ve enstrümanlar. Prosedüre başlamak için eldiven ve uygun koruyucu kıyafetleri giymelisiniz. Isıtma pedini açın ve 37 °C'ye ayarlayın.

Stereotaktik aparatın tüm parçalarının yanı sıra gerekli malzemelerin ve aletlerin temizlendiğinden ve steril edildiğinden emin olun; anestetikler ve steril salin gibi sıcak tutulması gereken tüm jeller ve çözeltiler hazırlanmalıdır. Altı hidroksidopamin ve apomorfini gibi susuz formda saklanan ürünler, steril enjeksiyon suyunda seyreltilmeli ve laminer akışlı kabin altında filtrelenmelidir; ardından hayvan anestezi altına alınmalı ve cerrahi işlem için hazırlanmalıdır.

Hayvanı tartın ve hayvan sedasyon altına alınırken intraperitonal enjeksiyon yoluyla uygulanması gereken sedatif miktarını hesaplayın. Vücut sıcaklığını korumak için hayvanı ısıtma pedine yerleştirin ve tüyleri tıraş ederek temizleyin. Acıyı ve cerrahi sonrası rahatsızlığı önlemek için Stereotaxic cihazının kulak barlarına Xylocaine gibi bir lokal anestetik uygulayın.

Arka ekstremitenin çekilme refleksini test ederek hayvanın yeterince sedate edildiğinden emin olun. Ancak bu işlemden sonra hayvanı stereotaksik cihaza dikkatlice yerleştirin. Üst kesici dişleri ağızlık aparatına yerleştirin ve ardından aparatı sıkıca sabitleyin.

Ardından kulak barlarını nazikçe yerleştirin, merkezleyin ve kafatasının düzgünce sabitlendiğini kontrol edin. Bunu yapmak için başı yukarı-aşağı ve yanlara doğru hareket ettirmeyi deneyebilirsiniz. Kafatası doğru şekilde yerleştirilmişse hareket etmemelidir.

Korneaların kurumasını önlemek için gözlere bir damla oftalmik solüsyon uygulayın. Stereotaktik cerrahi öncesinde cildi povidon iyot ve ardından %70 etanol ile dezenfekte edin. Bu işlemin tamamını üç kez tekrarlayın.

Geri çekme refleksini test ederek hayvanın yeterince sedate edildiğini yeniden onaylayın. 1,5 santimetre uzunluğunda sagital bir insizyon yapmak için steril bir skalpel kullanın ve ardından periostu sıyırmak için yeni bir bıçak kullanın. Sütürleri ortaya çıkarmak için lambda ve bgma'yı lokalize edin.

Hayvan doğru konumlandırıldıysa, bu iki referans noktası aynı dikey seviyede olmalı ve rostral-kaudal olarak 4.2 milimetre aralıklı olmalıdır. Aksi takdirde, burun parçasının açısını ayarlayın. Ardından, sterilize edilmiş Hamilton iğnesinin ucunu, bgma'ya neredeyse değecek şekilde ayarlayın.

Bu referans noktalarının anterior, posterior ve medial lateral koordinatlarını not edin. İğneyi kaldırın ve bu durumda sol hemisferle aynı yönde olacak şekilde 0,5 milimetre anterior torema ve 2,0 milimetre lateraldeki istenen konuma hareket ettirin. Bu noktayı kafatası üzerinde işaretleyin, ardından Hamilton iğnesini tamamen kaldırın ve delmeye başlayın.

Isınmayı önlemek için kesikli bir hareketle delme işlemi yapmak önemlidir. Delik açıldıktan sonra, kemik kalıntılarını temizlemek için ılık salin ve steril pamuklu çubuklar kullanın. Kemik parçacıklarını dikkatlice toplamak için bir dental küret kullanın ve alanı daha fazla temizlemek için tekrar ılık salin ve pamuklu çubuklar kullanın.

Bölgeyi tüm gevşek partiküllerden arındırmak için seçme ve silme işlemini gerektiği kadar tekrarlayın. 6-hidroksidopamin çözeltisinin berrak olduğunu kontrol edin. Eğer sarımsı kahverengi bir renk almışsa, çözeltiyi atın ve toplamda 10 µg enjeksiyon yapacak şekilde tazesini hazırlayın.

Hamilton enjektörüne, 5 µg/µL konsantrasyonda 2 µL yükleme yapın. Ayrıca, Hamilton enjektörü altı hidroksi dopamin ile doldurulduktan sonra, solüsyonun oksitlenmesini önlemek için şırıngayı alüminyum folyo ile kapatmanız gerektiğini unutmayın. Gözlem mikroskobu altında, iğnenin ucunu dura mater üzerine yerleştirin ve dorsal ventral referans değerini okuyun.

Ardından Hamilton'ı beyin dokusuna yavaşça yerleştirin. Kortikal yüzeyin 3,0 milimetre altındaki istenen ventral pozisyona ulaştığınızda, dokunun iğneye uyum sağlaması için beş dakika bekleyin. Enjeksiyona başlamadan önce, altı hidroksi dopamin nörotoksinini dakikada 0,1 µL hızında çok yavaş bir şekilde enjekte etmek önemlidir.

Diğer bir ifadeyle, bu enjeksiyon işlemi 20 dakikadan daha kısa sürmemelidir. İki mikrolitrelik hacmin tamamı enjekte edildikten sonra beş dakika bekleyin ve ardından Hamilton'u, üç milimetrelik kısmın tamamı en az beş dakikalık bir süre içinde çıkacak şekilde dikkatli ve yavaşça geri çekin. Bölgeyi steril bir pamuklu çubukla iyice temizleyin.

Ardından stereotaksik kolu ve skopu geri çekin. İnsizyonu kapatmak için USP 6-0 boyutunda naylon sütürler kullanın. Bizim durumumuzda, 3-2-4 U formu dikişler kullanacağız.

Enfeksiyonlara karşı ekstra bir önlem olarak neomisin içeren lokal bir antibiyotiğin uygulanması önerilir. İlk olarak kulak barlarını gevşeterek hayvanı stereotaktik cihazdan çıkarın. Ardından, ağızlık aparatını çözün ve hayvanın dişlerine zarar vermemek için onu ensesinden tutarak kaldırın.

Sedasyon etkisi geçene ve hayvanın dahili termal regülasyonu geri kazanana kadar hayvanı ısıtma pedinin üzerinde bırakın. Sonraki iki gün boyunca hayvana deri altına enjekte edilen 500 µL ılık steril salin ile hidrasyon sağlayın. Ameliyat sonrası analjezi amacıyla, içmele şişesindeki 100 mL suya 0,2 mL ibuprofen süspansiyonu ekleyin.

Apple morfinle indüklenen rotasyon testi. APO morfin rotasyon testi genellikle lezyon indüklemesinden bir ay sonra gerçekleştirilir; APO morfin solüsyonunun berrak olduğunu onaylayın. Kilogram başına 0,5 miligramlık bir dozu insülin şırıngasına çekin ve ense bölgesinden deri altına enjekte edin.

Hayvanı test kabına yerleştirin ve alışması için beş dakika süre verin, ardından davranışını beş dakika daha izlemeye devam edin. Soldaki hayvan altı hidroksi dopamin enjeksiyonu almışken, sağdaki hayvan 0.9% Sodyum klorür içinde seyreltilmiş %0,2'lik abik asit çözeltisi ile araç enjeksiyonu almıştır. Bu grafik, tanımlanan stereotaktik cerrahi işlemin üzerinden bir ay geçtikten sonra, toplam 20 İsviçre faresinde (beşi kontrol, 15'i lezyonlu) gerçekleştirilen çeşitli apomorfinele tetiklenen rotasyon testlerinden elde ettiğimiz sonuçları göstermektedir.

Sonuç olarak, Parkinson hastalığı merkezi sinir sisteminin nörodegeneratif bir bozukluğudur; ancak farklı tedavilerin etkinliğini inceleyebilmek için orta beyindeki dopaminerjik nöron kaybını yeniden üreten, iyi yapılandırılmış bir modele sahip olmak kritik öneme sahiptir. Bu prosedürle oluşturulan lezyonlar, Parkinson'un etkilerini çok yakından taklit ederek araştırmacıların bu yıkıcı hastalıkla mücadele etmek için yeni tedaviler geliştirmesine, tasarlamasına ve test etmesine olanak tanır. Dolayısıyla, basit ve kolay tasarımıyla birlikte ürettiği güvenilir sonuçlar göz önüne alındığında, bu tekniğin cazibesi açıkça görülmektedir.

Başarılar dileriz ve bu videonun araştırmalarınızda faydalı olduğunu umuyoruz.