Name: Proteinler için Poliakrilamid Jeller Hızlı ve Hassas Kolloidal Coomassie G-250 Boyama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-08-03T00:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 57 s
Description: Keşfedin, poliakrilamid jellerde nanogram düzeyinde protein tespiti için hızlı ve hassas kolloidal Coomassie G-250 boyama protokolünü. Bu yöntem, jel bazlı proteomik araştırmalarında analitik amaçlarla kullanılabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dr. Nicola Wiethölter Biz 1-D jellerin hazırlanması ve boyama için teşekkür ederiz. Bu çalışma Deutsche Forschungsgemeinschaft (ND ve SM GRK 1089/project 5) hibe tarafından finanse edilen ve ND için Stiftung Jürgen Manchot bir araştırma bursu ile desteklenmiştir.

Bölüm 1: fincan yükleme kullanarak, iki boyutlu (2-D) jel elektroforezi <ol><li> IPG şerit rehidrasyon ve izoelektrik odaklama (IEF) <ul><li> 125 ul rehidratasyon çözüm Immobiline DryStrip jeller, pH 6-11 rehidrate (7 cm) [7 M üre, 2 M tiyoüre,% 4 ahbap, 50 mM hydroxyethyldisulfide IPG Tampon pH 6-11 ve% 2] Immobiline DryStrip Reswelling Tepsi en azından 10 saat. </li><li> IEF örnek tampon çöktürülmüş protein örnek çözülür [7 M üre, 2 M tiyoüre,% 2 ahbap, Tampon pH 6-11 IPG ASB-14, 50 mM hydroxyethyldisulfide ve% 2], 100 ul başına 60-100 mg protein karşılık gelen% 2 . </li><li> Çözünürleştirme (oda sıcaklığında en az 30 dakika) sonra, numune kaplarını kullanarak fincan yükleme anodik ile protein örnek geçerlidir. Fincan hacmi 100 ul (Manifold bardak ul 150 kadar izin verin). Not: hala fincan sıvı bir film varken odaklama protokol ve dolum bardak başında düşük voltajlı bir adım eklerseniz büyük örnek miktarda yükleyebilirsiniz ! </li><li> Multiphor II Elektroforez Ünitesi degrade modunda 11.1 KVH için izoelektrik odaklama gerçekleştirin. </li></ul></li><li> Denge ve SDS-PAGE <ul><li> IEF sonra, IPG şeritler, çalkalayıcı dengeleme çözüm sırasıyla% 1 ve% 2.5 dithiothreitol iodoacetamide kullanarak her seferinde 15 dakika azaltılması ve alkilleme tabi tutulmuştur [50 mM Tris-HCl/pH 8.8, 6 M üre,% 30 gliserol ve% 2 SDS]. </li><li> H 2 O ile dengelenmiş şeritler durulayın ve aşırı dengeleme tampon kaldırmak için bunları Vatmanlar kağıda kurulayın. Daha sonra SDS çalışan tampon (1X) şeritler daldırma. </li><li> İkinci boyut toplam akrilamid konsantrasyonu% 12 ile dikey elektroforez sistemleri SDS-PAGE ile yapılır. Dengelenmiş IPG şeritleri ayıran jeller üstüne yerleştirilir ve sıcak agaroz çözüm [Bromophenol Mavi içeren tampon çalıştıran% 0.5 agaroz] ile fikse edildi. </li><li> Proteinler, 120 V tarafından takip boya ön jel kaset altına ulaşana kadar 15 dakika için 80 V ile başlayan, 2.5 saat için ayrıldı. </li></ul></li></ol> Bölüm 2: G-250 ile CBB Kolloidal Coomassie boyama 1. Boyama çözümler Not: Millipore sistemleri (Milli-Q su), analitik dereceli (pa) ve yüksek saflıkta su gibi yüksek kalite ile boyama çözümler hazırlanması için kimyasal maddeler kullanmayın. <table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> Coomassie çözüm: </td><td> reklam 2000 ml H 2 O </td></tr><tr><td> % 0,02 (w / v) </td><td> CBB G-250 </td><td> 0,4 g </td></tr><tr><td> % 5 (w / v) </td><td> -hidrat alüminyum sülfat (14-18) </td><td> 100 g </td></tr><tr><td> % 10 (v / v) </td><td> etanol (% 96) </td><td> 200 ml </td></tr><tr><td> % 2 (v / v) </td><td> ortofosforik asit (% 85) </td><td> 47 ml </td></tr></tbody></table> Not: boyama çözümün hazırlanması için, aşağıdaki sıraya göre sıralı ek bileşenlerin muhafaza edilmelidir: <ol><li> Milli-Q su alüminyum sülfat çözülür </li><li> bundan sonra, etanol ekleyip homojenize ve çözüm CBB G-250 karışımı </li><li> çözüm tamamen eriyene kadar son zamanlarda, fosforik asit (asit dahil alkollü medya onların kolloidal haline agrega Coomassie moleküller sağlar) </li><li> Sonunda Milli-Q su ile doldurmak </li></ol> Not: son boyama çözüm koyu yeşil-mavi bir görünüme sahiptir ve parçacıkların etrafında yüzme doludur: <ul><li> Süzüntü bu çözüm değil! </li><li> Hazırlık amacıyla değiştirdiyseniz, daha az duyarlı bir daha mor-mavi bir çözüm olacaktı. </li></ul><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> Çözüm Destaining: </td><td> reklam 2000 ml H 2 O </td></tr><tr><td> % 10 (v / v) </td><td> etanol (% 96) </td><td> 200 ml </td></tr><tr><td> % 2 (v / v) </td><td> ortofosforik asit (% 85) </td><td> 47 ml </td></tr></tbody></table> 2. Prosedürü Boyama <ul><li> İkinci boyut ayrıldıktan sonra, cam plakalar dikkatle jeller kaldırmak ve Milli-Q su ile dolu bir boyama çanak içine aktarabilirsiniz. </li><li> Milli-Q su ile jeller üç kere yıkayın yatay bir çalkalayıcı (yetersiz yıkama jelleri kalan SDS, protein, boya sınırlayıcı rahatsız edici olduğundan kötü hassasiyet neden) 10 dakika. </li><li> Coomassie çözüm kolloidal parçacıklar eşit dağıtmak için kullanmadan önce iyice çalkalayın. </li><li> 2-12 saat çalkalayıcı üzerinde ajitasyon Coomassie çözümü ile kaplı jeller inkübe edin. Bu boyama arasında boyama ilerlemeyi gözlemlemek, böylece marjinal arka plan üretir. Not: 10 dakika sonra ilk protein lekeleri inkübasyon 2 saat içinde yaklaşık% 80, bu boyama görünen görebilirsinizs maksimum düzeyde tamamlandı. Yaklaşık% 100 boyama için, gecelik inkübasyon önerilir. Bazı durumlarda, lekeli protein miktarı çok büyük ve parlak mavi çözüm dönüşür, boyama çözümün bir yenileme gerekli. </li><li> Boyama işleminden sonra Coomassie çözüm kaldırmak ve jeller iki kez Milli-Q su ile durulayın. Not: parçacıkları hala kalan boyama çözüm sürece yeniden kullanabilirsiniz, aksi takdirde (laboratuvar atık bertarafı için özel düzenlemeler olabileceğini akılda tutmak) atın. </li><li> Boya taneciklerini yapıştırarak, tüy bırakmayan bir kağıt havlu ile leke tabağına çıkartın ve destain 10 - 60 dakika. Not: Ayrıca jeller sadece Milli-Q su ile yıkayabilirsiniz ama tarama işlemi sırasında ortaya çıkacak jeller üzerinde düzensiz, zayıf Coomassie film sürecek, çünkü bu bizim için sadece hazırlık jeller tavsiye . </li><li> Son olarak Milli-Q su ile iki kez jeller durulama: jeller orijinal kalınlığına ulaşmak (alkol-asit ortam jeller daralma yapar) ve su nötralizasyon ek Coomassie renk yoğunluğunu artırır. </li></ul> Bölüm 3: Temsilci sonuçları Yukarıda açıklanan protokol takip ederseniz, 2-D jel ayırt edici giderilmiş ve iyi lekeli koyu mavi protein noktalar olsun. Hatta Shevchenko ve arkadaşları 5, kütle spektrometresi ile iyi bir duyarlılık ve uyumluluk iddia eden bir protokoldür göre gümüş lekeli bir 2-D jel göre, biz eşit boyama sonuçları elde etmek . <img src="/files/ftp_upload/1431/fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1: Yukarıda açıklanan deney Nihai sonuç. Kang&#39;ın Coomassie protokolü (A), Shevchenko ve arkadaşları göre gümüş boyama gibi güçlü bir şekilde gerçekleştirir. (B) 2-D jel elektroforezi sonra proteinleri tespit . Bölüm 4: İpuçları ve püf noktaları <ul><li> Kendi örnekleri işlemeden önce bazı test renklendirmeler gerçekleştirin. Açıklanamaz nedenlerden dolayı bir ilgi protein başarıyla miligram uygulandı bile tespit edilebilir olabilir bazen bildirdi. Bu durumda biz duyarlılık test etmek için bazı seyreltme bir dizi hazırlamak için önerilir. </li><li> SDS-PAGE sırasında ayıran jel istifleme genel başarısız transfer protein jel algılama (ler) düşük varsa muhtemelen sebep olacaktır. Istifleme alanı da dahil olmak üzere tam jel boyama gibi yapışkan proteinlerin kontrol edebilirsiniz. </li><li> Izoelektrik odaklama sonuçları hızlı bir doğrulama için, doğrudan başka bir ikinci boyut ayırımı olmadan IPG-şeritler leke yapabilir. </li><li> (Jeller karşı kayıtsız devam ederseniz, boya jel bir tarafa bağlanır), her iki taraftan eşit şekilde boyanmış böylece Bazen boyama işlemi sırasında jeller açmak. </li><li> Biz karanlık bir şişe boyama çözüm (4 aya kadar şeffaf şişelerde) depolama ömrünü artırır yaşadı. </li><li> Boyama ve belgeleyen (asidik eklerseniz mantarlar tarafından Bulaşmayı önlemek) jeller birkaç yıl boyunca buzdolabında tutabilirsiniz sonra. </li><li> Triptik sindirmek için jel fişlerinin Destaining bir blok ısıtıcı ısınmanın hızlandırılabilir. </li></ul>

<ol><li>Fazekas de St Groth, S., Webster, S. R. G., Datyner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+new+staining+procedures+for+quantitative+estimation+of+proteins+on+electrophoretic+strips%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim.+Biophys.+Acta%22%5BJournal%5D)">Two new staining procedures for quantitative estimation of proteins on electrophoretic strips.</a> Biochim. Biophys. Acta. 71, 377-391 (1963).</li>
<li>Neuhoff, V., Arold, N., Taube, D., Ehrhardt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+staining+of+proteins+in+polyacrylamide+gels+including+isoelectric+focusing+gels+with+clear+background+at+nanogram+sensitivity+using+Coomassie+Brilliant+Blue+G-250+and+R-250%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Improved staining of proteins in polyacrylamide gels including isoelectric focusing gels with clear background at nanogram sensitivity using Coomassie Brilliant Blue G-250 and R-250.</a> Electrophoresis. 9, 255-262 (1988).</li>
<li>Candiano, G., Bruschi, M., Musante, L., Santucci, L., Ghiggeri, G. M., Carnemolla, B., Orecchia, P., Zardi, L., Rigetti, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blue+Silver%3A+A+very+sensitive+colloidal+Coomassie+G-250+staining+for+proteome+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Blue Silver: A very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis.</a> Electrophoresis. 25, 1327-1333 (2004).</li>
<li>Kang, D., Gho, S. G., Suh, M., Kang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Sensitive+and+Fast+Protein+Detection+with+Coomassie+Brilliant+Blue+in+Sodium+Dodecyl+Sulfate-Polyacrylamide+Gel+Electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Bull.+Korean+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Highly Sensitive and Fast Protein Detection with Coomassie Brilliant Blue in Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis.</a> Bull. Korean Chem. Soc. 11, 1511-1512 (2002).</li>
<li>Shevchenko, A., Wilm, M., Vorm, O., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometric+sequencing+of+proteins+silver-stained+polyacrylamide+gels%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometric sequencing of proteins silver-stained polyacrylamide gels.</a> Anal. Chem. 68, 850-858 (1996).</li>
</ol>

Yenilikçi ya da sadece başka bir Coomassie protokol? Şu anda Coomassie Brillant Blue prosedürleri boyama için birden fazla protokol var. Çoğu Neuhoff ve meslektaşları 2 tarafından en yaygın olarak kullanılan protokoller küçük veya büyük değişiklikler sonucu. Ayrıca Kang&#39;ın protokolü Neuhoff formülü dayanmaktadır. Ama gerçekten proteomik araştırma için alternatif Coomassie boyama yöntemi nedir? Biz diğer Coomassie protokolleri ve hatta gümüş ve floresan renklendirmeler ile karş...

<table border="1" ><tr><td> Ürün Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog No. </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> : IEF ve SDS-PAGE </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Immobiline DryStrip jeller </td><td> GE Healthcare </td><td> 17-6001-94 </td><td> Tarih sona 2 yıl sonra bile kullanılabilir. </td></tr><tr><td> Immobiline DryStrip Reswelling Tepsi </td><td> GE Healthcare </td><td> 80-6371-84 </td><td> Organik çözücüler ile temizlemeyin. 7-18 cm IPG-şeritler için tasarlanmıştır. </td></tr><tr><td> Immobiline DryStrip Kit </td><td> GE Healthcare </td><td> 18-1004-30 </td><td> Bir tepsi, elektrot sahibi, anot ve katot elektrotları, hizalama ve numune kabı bar ve numune kaplarını içerir. </td></tr><tr><td> EPS 3501 XL Güç Kaynağı </td><td> GE Healthcare </td><td> 18-1130-05 </td><td> Malzemeleri 3500 kadar gerilimi V </td></tr><tr><td> Multiphor II Elektroforez Ünitesi </td><td> GE Healthcare </td><td> 18-1018-06 </td><td> Hareketli elektrotlar tüm uzunluğu IPG şeritler halinde IEF etkinleştirmek (7-24 cm şeritler IPG) </td></tr><tr><td> PerfectBlue jel sistemi Twin S </td><td> Peqlab </td><td> 45-1010-C </td><td> 10x10 cm mini-jel formatında SDS-PAGE. Jel odasının bir soğutma sistemi içerir. </td></tr><tr><td> : Kolloidal Coomassie G-250 boyama için </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> kapakları ile yemekleri boyama </td><td> VWR </td><td> 216-3412 </td><td> Mini jeller için uyar. Çalkalamalı İstiflenebilir. </td></tr><tr><td> alüminyum sülfat-18-hidrat </td><td> Merck </td><td> 1.01102.5000 </td><td> Merck ile en iyi deneyimi yaptı. Sadece 5 kg&#39;lık paket kullanılabilir. </td></tr><tr><td> ortofosforik asit </td><td> Prolabo </td><td> 20 624,295 </td><td> Cam şişelerde satılır. </td></tr></table>

proteinler için poliakrilamid jeller hızlı ve hassas kolloidal coomassie g-250 boyama

Fast and Sensitive Colloidal Coomassie G-250 Staining for Proteins in Polyacrylamide Gels

Coomassie Brillant Blue (CBB), genellikle basit bir boyama prosedürü ve yüksek kantitatif sunan SDS-PAGE ile ayrılmış proteinlerin görselleştirme için kullanılan bir boya. Ayrıca, kitle spektrometrik protein kimlik ile tamamen uyumlu. Ancak bu avantajlara rağmen, CBB, gümüş ya da floresan renklendirmeler daha az duyarlı ve bu nedenle analitik jel tabanlı proteomik yaklaşımlar proteinlerin tespiti için kullanılan nadir olarak kabul edilir. Orijinal Coomassie protokolü 1 CBB duyarlılığını artırmak için bazı geliştirmeler yapılmış. Kolloidal parçacıkları içine boya molekülleri dönüştürerek düşük-bol proteinlerin tespiti geliştirmek için iki önemli değişiklikler getirilmiştir: 1988 yılında, Neuhoff ve arkadaşları CBB G-250 tabanlı boyama çözüm 2,% 20 metanol ve uygulanan yüksek konsantrasyonlarda amonyum sülfat 2004 Candiano ve ark. Mavi Gümüş, fosforik asit, amonyum sülfat ve metanol 3 varlığı ile G-250 CBB kullanarak kuruldu . Bununla birlikte, tüm bu değişiklikler sadece yaklaşık 10 ng protein bir algılama sağlar. Kolloidal Coomassie boyama için yaygın fameless bir protokol Kang ve ark tarafından 2002 yılında yayımlandı. Kompleks maddeler ile ilgili Neuhoff kolloidal CBB boyama protokol değiştirilmiş. Bunun yerine amonyum sülfat, alüminyum sülfat ve metanol yerine daha az toksik etanol 4 kullandı . Roman alüminyum bazlı Kang&#39;ın çalışmada boyama biraz hassasiyet varyasyon proteinleri bağlı olarak 1 ng / bant (fosforilaz b) gibi düşük algılar üstün hassasiyet gösterdi. Burada, hızlı ve hassas analitik amaçlarla proteinlerin kolloidal Coomassie boyama Kang&#39;ın protokolü uygulaması göstermektedir. Biz rutin çalışma grubunda yapılan iki boyutlu jeller kullanarak hızlı ve kolay bir protokol gösterecektir.

Bu video Kang göre kolloidal Coomassie G-250 boyama protokol sevdirmek olacaktır<em&gt; Ve ark.</em&gt; Jeller ortalama 4 ng protein tespiti için. Boyama ve herhangi bir çaba olmadan 2 saat içinde tamamlanır. Biz rutin analitik amaçlar için jel bazlı proteomik Kang&#39;ın protokolü kullanın.

Proteinler için Poliakrilamid Jeller Hızlı ve Hassas Kolloidal Coomassie G-250 Boyama

Coomassie Brilliant Blue (CBB), SDS-PAGE ile ayrıştırılan proteinlerin görselleştirilmesinde yaygın olarak kullanılan, basit bir boyama prosedürü sunan bir boyadır ve...

Bu videoda, poliakrilamid jellerde birkaç nanogram proteini saptamak için modifiye edilmiş bir Coomassie boyama protokolünün gücünü göstereceğiz. Birinci boyut ayrımı öncesinde iki boyutlu jel elektroforezi örneğini kullanarak, immobilize pH gradyan şeritleri denatüre edici tampon koşullarında yeniden hidrate edilir.Şeritlerin gece boyunca yeniden şişirilmesinin ardından, protein örnekleri anodik kap yüklemesi yoluyla uygulanır. Odaklama işlemi sırasında proteinler, izoelektrik noktalarına göre ayrıştırılır. İkinci boyut ayrımı SDS-PAGE ile gerçekleştirilir.Ardından jel bir boyama kabına aktarılır ve proteinler kolloidal kumasi ile boyanarak tespit edilir. Merhaba, Olor Üniversitesi biyomedikal araştırma merkezindeki Sabina Meka laboratuvarından Nadine de Bala ben. Bugün dikkatinizi, Kangan meslektaşlara göre yaygın olarak bilinmeyen bir prosedüre çekeceğim; Cy Brilliant Blue, elektroforetik ayırmaların ardından proteinlerin görselleştirilmesi için yaygın olarak kullanılan bir boyadır ancak karşılaştırmalı proteomik için genellikle daha az uygulanabilir olduğu varsayılır.Buna karşın, kolloidal cos boyaması hassasiyet, maliyet ve pratiklik açısından üstün özellikler sunmaktadır. Lab

fast-sensitive-colloidal-coomassie-g-250-staining-for-proteins

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

, Jel proteinlerin elektroforetik yöntemlerle ayrılması ardından çeşitli boyama yöntemleri ile tespit edilebilir. Coomassie Mavi, Gümüş Boyama, SYPRO Turuncu, SYPRO Ruby ile proteinlerin Boyama Bu video gösterilmektedir.

Jeller içinde Proteinler Boyama

Coomassie Brillant Blue (CBB) poliakrilamid jeller G-250 ile protein boyanması için kısa bir protokol CBB ile klasik boyama işlemleri gibi organik çözücüler veya asetik asit kullanmadan açıklanmıştır.

Organik Solvent ve Asetik Asit olmadan Jeller Coomassie G-250 ile Proteinlerin Boyama

Bu video, mavi yerli poliakrilamid jel elektroforezi (BN-PAGE) multiprotein kompleksler (MPCs) karakterizasyonu açıklar. Birinci boyut, diyaliz hücresel lizatları bireysel MPCs tanımlamak için BN-PAGE ile ayrılır. Ikinci bir boyut SDS-PAGE, faiz MPCs daha immün bileşenleri analiz alt gruba ayrılır.

Hücresel lizatları Multiprotein Kompleksleri Analizi Mavi Native Poliakrilamid Jel Elektroforez (BN-PAGE)

Bu videoda, florojenik problar kullanarak toplam proteinin görselleştirilmesi için poliakrilamid jellerin gümüş boyama yöntemini gösteriyoruz.

Floresan Gümüş Boyama: Poliakrilamid Jellerdeki Toplam Proteini Görselleştirmek İçin Bir Teknik

Bu video, proteinler için denatüre edici bir poliakrilamid bazlı ayırma tekniğini göstermektedir. Bu teknik, proteinlerin moleküler ağırlıklarına göre ön tanımlanmasına yardımcı olur.

Protein Analizi için Sodyum Dodesil Sülfat Poliakrilamid Jel Elektroforezi: Moleküler Ağırlığa Göre Proteinleri Ayırmak ve Görselleştirmek İçin Bir Teknik

Bu videoda, insan fonksiyonel olmayan hipofiz adenomunun (NFPA) tümör dokularından elde edilen karmaşık bir protein karışımından tek tek proteinleri ayıran iki boyutlu bir jel elektroforezi yöntemi gösteriyoruz. Proteinler, birinci boyutta elektrik yüklerine göre ayrılır ve ikinci boyutta moleküler ağırlıklara göre daha da ayrılır.

İki Boyutlu Poliakrilamid Jel Elektroforezi: Yük ve Moleküler Ağırlığa Dayalı Kompleks Protein Karışımındaki Proteinlerin Analizi İçin Bir Ayırma Tekniği

Burada, kütle spektrometresi (ayırmak ve bir iyi ve tekrarlanabilir 2DE desen sunar insan hipofiz adenom doku Proteom tanımlamak için MS) ile birleştiğinde bir iki boyutlu Jel Elektroforez (2DE) mevcut. Çoğu protein her 2DE yerde karmaşık kanser Proteom yüksek-duyarlı MS kullanımı ile analiz ederken gözlenir.

İnsan hipofiz adenom doku Proteom analizi için kütle spektrometresi yöntemleri ile birleştiğinde iki boyutlu Jel Elektroforez

Burada, sadece üç reaktifler ve 7 min işleme gerektirir ve yüksek kaliteli SSR veri genetik analiz hızlı üretimi için uygundur Protokolü boyama basit ve düşük maliyetli bir gümüş raporu.

Bir hızlı gümüş boyama Protokolü etkinleştirme basit ve SSR bir sigara denaturing Polyacrylamide jel kullanarak işaretleri, verimli algılama

Burada, biz yeni bir floresan polyacrylamide jellerin toplam protein algılaması için teknik boyama özetleyen bir detaylı iletişim kuralı tanımlamak. Ag+algılar bir gümüş iyon özgü Floresans tahrik sonda protokol kullanır-protein kompleksleri ve geleneksel chromogenic gümüş lekeler belirli sınırlamaları ortadan kaldırır.

Floresan gümüş Polyacrylamide jeller proteinlerin boyama

Klasik bölgeye yönelik mutagenezin sınırlamalarının üstesinden gelmek için, spesifik modifikasyonlara sahip prolin analogları birkaç floresan proteinine dahil edildi. Hidrojenin flor ile veya prolin kalıntılarındaki tekli çift bağlarla ("moleküler cerrahi") değiştirilmesinin, katlanmaları ve ışıkla etkileşimleri de dahil olmak üzere temel protein özelliklerini nasıl etkilediğini gösteriyoruz.

Floresan Proteinlerde Prolin Analogları ile Prolinin Kalıntıya Özgü Değişimi: Omurganın "Moleküler Cerrahisi" Katlanma ve Stabiliteyi Nasıl Etkiler?

Bu protokol, sadece küçük miktarlarda numune mevcut olduğunda solunum süper komplekslerinin analizi için bir tekniği tanımlar.

Küçük Doku ve Hücre Kültürü Örneklerinden Mitokondriyal Süperkompleks Analizi için Mitokondri İzolasyonu 

Keşfedin, poliakrilamid jellerde nanogram düzeyinde protein tespiti için hızlı ve hassas kolloidal Coomassie G-250 boyama protokolünü. Bu yöntem, jel bazlı proteomik araştırmalarında analitik amaçlarla kullanılabilir.

Proteinler için Poliakrilamid Jeller Hızlı ve Hassas Kolloidal Coomassie G-250 Boyama

Daha fazla video keşfet