Name: LAD-ligasyon murin Model: Miyokard Enfarktüsü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-14T23:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: Öğrenin, fare modelinde sol ön inen arter ligasyonu ile miyokard iskemisinin cerrahi indüksiyonunu. Bu yöntem, kardiyovasküler hastalıkların patofizyolojisini ve tedavi stratejilerini araştırmak için güvenilir bir platform sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, teknik yardım ve sahne histoloji Christiane Pahrmann teşekkür ederim.

<html> 20g en az 8 ila 12 hafta arasında bir yaş ağırlığında Balb / C fareler Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97.633 Sulzfeld) satın alınır. Fare, geleneksel koşulları, beslenen standart fare pelet ve su ad libitum altında muhafaza edilir . Indüksiyon odasına kullanarak (% 2) izofluran anestezisi fare ile. <ol><li> Boyun bölgesi ve göğüs kafesinin sol tarafında Tıraş ve% 80 etanol kullanılarak dezenfekte edin. </li><li> Sırtında fare koyun ve anestezi tutmak için burun ve ağız içinde bir facemask yerde. </li><li> Fare anesthesized yeterli olduğundan emin olmak için, kuyruğu ve arka ayaklarının kısma refleksleri kontrol edin. </li><li> Mikroskopik görünümü altında trakea kaplayan deri, kas ve doku ayıran orta hat servikal insizyon gerçekleştirin. </li><li> Trakea, glottis altında iki kartuş halkaları arasında doku içine endotrakeal tüp (Şekil 1) eklemek için küçük bir delik maruz kaldığında. Mikro cerrahi forecepts ile trakea kafatası parçası tutan endotrakeal tüp yerleştirin. Torasik hareketin her iki akciğerde iyi havalandırılmış olduğundan emin olmak için kontrol edin. </li><li> Solunum hızı (RR), 17 - 18cm H 2 O bir inspiratuar basınç ile, yaklaşık 110 dakikada olmalıdır Sağ tarafta uzanan, sol yan bakan, fareyi dikkatli bir şekilde açın. 3. ve 4. kaburga arasındaki leftsided torakotomi gerçekleştirin ve kanamayı önlemek için bir cauter kullanarak, dikkatli bir şekilde doku ve kas disseke. </li><li> Toraks dikkatle açın toraks açıldıktan sonra, herhangi bir keskin bir nesne ile akciğer dokunmadan, kalp bulmak. Şimdi perikardiyal kese kalp kapsayan bölümü kaldırmak. </li><li> LAD, pulmoner arter ve sol kulak kepçesi arasında yer alır. Tek sütür (Şekil 2) ile proksimal LAD Arter bir 8-0 Prolen sütür (Ethicon, Norderstedt, Almanya) kullanın. </li><li> 4. ve 5. kaburga arasındaki bir göğüs tüpü (28G, rüşvet kateter) yerleştirin. </li><li> Cilt kapatmak için kaburga ve 4-0 Prolen çalışan dikişler (Ethicon, Norderstedt, Almanya) uyum için 6-0 Prolen çalışan dikişler (Ethicon, Norderstedt, Almanya) kullanarak katmanlar halinde torasik insizyon kapatın. </li><li> Dikkatli bir şekilde (Şekil 3) 2 ml şırınga yardımı ile toraks boşaltın. Sırtında fare yerleştirin. Şimdi endotrakeal tüp ve 7-0 Prolen dikişler (Ethicon, Norderstedt, Almanya) kullanarak tek bir dikiş ile trakeal kartuş halkaları uyum. </li><li> Fare üzerinde yüz maskesi koyun ve dikişler (Ethicon, Norderstedt, Almanya) 4-0 Prolen kullanarak cilt yakın. </li></ol> Onaylama LAD-ligasyonu başarısını teyit etmek için farklı olasılıklar vardır. Hayvan euthanize gerek kalmadan sadece 150 lt kan troponin testi, cerrahi sonrası 6 ila 18 saat olabilir. Kan özelleştirilmiş bir troponin test kiti (TROP T Hassas, Roche, Mannheim) (Şekil 4) uygulanır. Troponin kas hücre aktin filamentler bir düzenleyici protein, kas üç tip farklı isotypes vardır. CTnI ve cTnT isotypes kalp bulunur ve doku hasarı olarak yayımlanır. Troponin T (cTnT) için standart bir test iki kalp spesifik monoklonal antikorlar, bir tuzakları kan örneği troponin dayalı, ikinci bir belirteçtir. Enfarkte alanda, 3 gün sonra (Şekil 5) makroskopik tespit edilebilir. Infarkt TTC (2,3,5-triphenyltetrazolium chloride) ile boyanarak önlemler dokusunun canlılığını değerlendirmek için kullanılır. Evans mavi boya (% 1,5, 1.0mL) fosfat tamponlu salin (PBS), iskemik miyokard alanını ölçmek için sol ventrikül boşluğuna enjekte edilir. Fare ötenazi ve kalp dilimler halinde hasat ve kesitli. Doku dilimleri 20dk, 37 ° C&#39;de% 1 TTC PBS solüsyonu, pH 7.4 inkübe edilir. Dokular 2-8 gecede PBS-tamponlu formalin% 10 sabit ° C TTC boya Evans mavi-negatif alanlarda (Şekil 6) ex vivo yönetilmektedir. Histoloji için fare ötenazi olmalı ve kalbin daha fazla işlem için gömülü olması gerekir. Kesitler yaptıktan sonra, slaytlar, H &amp; E (hematoksilen ve eozin) ile boyanmış veya fibrotik doku (Şekil 7) görselleştirmek için trikrom. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1: Trakeal tüp. 1A: Açık trakea, ventral servikal insizyon sonrası. 1B: Trakea gırtlak kaudal iki kıkırdak halkaları açıldı. 1C: Trakeal tüp trakea içine sokulur. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2: kalp sol taraflı torakotomi yoluyla maruz LAD bağlandı. t &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3: Toraks kapatıldıktan sonra, plevra drenaj yapılır. Fare anestezi altında devam etmektedir. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig4.jpg" alt="Şekil 4" /> Şekil 4: troponin testi pozitif olduğu zaman iki satır bir kaç dakika sonra ortaya çıkar. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig5.jpg" alt="Şekil 5" /> Şekil 5: eksplante kalp gösterir. 5A: iskemik alana sahip bir soluk beyaz renk ile kalbin makroskopik görünümü. 5B: enfarkte kalp Kesit, iskemik alanı sağ üst köşesinde gösterir.

<ol><li>Atkins, B. Z., Hueman, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+cardiomyoplasty+improves+diastolic+properties+of+injured+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Cellular cardiomyoplasty improves diastolic properties of injured Heart.</a> J Surg Res. 85 (2), 234-242 (1999).</li>
<li>Jaquet, K., KT, K. rause <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+myocardial+scar+size+after+implantation+of+mesenchymal+stem+cells+in+rats%3A+what+is+the+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Reduction of myocardial scar size after implantation of mesenchymal stem cells in rats: what is the mechanism.</a> Stem Cells Dev. 14 (3), 299-309 (2005).</li>
<li>Joung, B., Kim, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+mononuclear+stem+cells+transplanted+in+rat+infarct+myocardium+improved+the+electrical+conduction+without+evidence+of+proarrhythmic+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Yonsei+Med+J%22%5BJournal%5D)">Bone marrow mononuclear stem cells transplanted in rat infarct myocardium improved the electrical conduction without evidence of proarrhythmic effects.</a> Yonsei Med J. 48 (5), 754-764 (2007).</li>
</ol>

Harçlar Bu çalışmada Üniversitesi Hastanesi Hamburg (MK, Kadın Habilitasyon Hibe), DFG (SS, SCHR992/3-1), ISHLT (TD, Araştırma Ödülü 2009) tarafından desteklenmiştir. Açıklama Bütün hayvanlar Laboratuar Hayvan Bakımı İlkeleri ile uyumlu insan bakım, hayvanlar üzerinde yapılan deneyler tarafından yayınlanan Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım için Tıbbi araştırma ve Kılavuzu Ulusal Derneği tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak yapıldı Ulusal Sağlık Enstitüleri (Ulusal Sağlık yayın 85-23 Enstitüleri, 1985 revize). Bütün hayvanlar, Charles River Laboratuvarları (Sulzfeld Almanya) elde edilen ve hayvan bakım tesisleri Üniversitesi Hastanesi Hamburg Eppendorf tutuldu. Hayvanlar standart yem ve su ad libitum aldı.

Özetle, bu video LAD-ligasyonu modeli, adım-adım görselleştirir ve kolay uygulanabilir cerrahi işlemler olarak farelerde LAD-ligasyonu tanımlar.

lad-ligasyon murin model: miyokard enfarktüsü

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

Enfarktüsü ve miyokardiyal iskemi Araştırma modelleri, miyokard iskemisi, akut ve kronik pathobiological ve patofizyolojik süreçleri incelemek ve gelecekteki tedavi geliştirmek ve optimize etmek için gerekli. Miyokard iskemisi oluşturma İki farklı yöntemler laboratuar kemirgenler gerçekleştirilir. İlk yöntem oluşturmak için cryo enfarktüsü, hızlı ama yanlış bir tekniği, bir cryo-kalem (1-3) kalp yüzeyine uygulanır. Bu yöntemi kullanarak, bilim adamı cryo yara izi de geniş bir miyokard hasarı, miyokard enfarktüsü ile ilgili patofizyolojik yan etkileri gösterir oluşturulur, iskemi yol açar garanti edemeyiz. İkinci yöntem, sol ön inen arter (LAD) daimi ligasyonu. İşte LAD hemen görülebildiği bir iskemi oluşturan tek bir dikiş ile bağlandı. LAD kapatarak, daha fazla kan akımı, miyokard doku çevresindeki neredeyse etkilenmez iken bu alanda izin verilir. Bu cerrahi işlem, enfarktüs ilgili miyokard iskemisi meydana pathobiological ve patofizyolojik yönlerini taklit eder. Bu video tanıtılan yöntem LAD ligating bir fare enfarktüsü modeli cerrahi işlem göstermektedir. Bu model, kalp enfarktüsü pathobiological ve patofizyolojik yanı sıra Bağışıklık çalışmaları için uygundur. Gösterilen teknik, yüksek doğruluk sağlar ve histolojik bölümleri ile de ilişkilidir.

Bu video, miyokard iskemisi pathobiological ve patofizyolojik süreçleri incelemek için hızlı ve güvenilir bir model nasıl kullanılacağını gösterir.

LAD-ligasyon murin Model: Miyokard Enfarktüsü

Enfarktüs ve miyokardiyal iskemi araştırma modelleri, akut ve kronik patobiyolojik ve patofizyolojik süreçleri incelemek için temel öneme sahiptir...

Trakeayı açığa çıkarmak için orta hat servikal insizyon yapılır ve endotrakeal tüpün yerleştirilmesi için trakeaya küçük bir delik açılır. Fare sağ yanına çevrilir ve üçüncü ile dördüncü kaburgalar arasından sol taraflı torakotomi gerçekleştirilir. Kalp açığa çıkarılır ve LAD tek bir dikişle bağlanır.Göğüs tüpünün yerleştirilmesi ve kesinin kapatılmasının ardından, şırınga ile dikkatlice aspirasyon yapılarak toraks drene edilir. Son olarak, fare sırt üstü çevrilir.Trakeal tüp çıkarılır ve trake ile servikal insizyon kapatılır. Merhaba, ben Sonya Refa. Hamburg Üniversitesi Kalp Merkezi Kardiyovasküler Cerrahi Bölümü'nde İmmünoloji ve kalp cerrahisi profesörüyüm.Laboratuvarım kök hücre immünobiyolojisi ve transplant immünolojisi üzerine odaklanmaktadır. Bugün sizlere LID ligasyon modelini tanıtacağız. Laboratuvarımızda bu modeli, miyokard enfarktüsü sonrası kalbi yeniden oluşturmada kök hücre tedavisinin etkisini incelemek için kullanıyoruz.Ben Stanford Üniversitesi'nde öğrenci ve Drer'in TSI Laboratuvarı'nda yaz fellowsu olan KA Wan. Ben de Hamburg Üniversitesi Kalp Merkezi TSI Laboratuvarı'ndan Mandy Cooch. Size bir ligasyon işleminin nasıl gerçekleştirileceğini göstereceğim ve daha sonra farklı yöntemler kullanarak miyokard enfarktüsü başarısının nasıl doğrulanacağını göstereceğiz.Hadi başlayalım. Anestezize edilmiş farenin boyun bölgesini ve göğüs kafesinin sol tarafını tıraş edin. Fareyi sırt üstü yatırın ve %2 izofluran ile anesteziyi sürdürmek için burnunun ve ağzının üzerine bir yüz maskesi yerleştirerek sterilize edin.Cerrahi işleme başlamadan önce beta isod kullanarak, farenin yeterince anestezi altında olduğunu teyit etmek için kuyruğunu ve arka ayaklarını sıkıştırın. Mikroskobik görüş altında, trakeayı örten deri, kas ve dokuyu ayıran orta hat bir servikal insizyon gerçekleştirin. Trakea açığa çıktıktan sonra, endotrakeal tüpü yerleştirmek için glottisin altındaki iki kıkırdak halka arasındaki dokuda küçük bir delik açın.Trakeanın kranial kısmını tutarken endotrakeal tüpü yerleştirin. Her iki akciğerin de iyi havalandırıldığından emin olmak için mikrocerrahi pens kullanarak torasik hareketi kontrol edin. Solunum hızı dakikada yaklaşık 110, inspirasyon basıncı ise 17 ila 18 centimeters.H2O olmalıdır.Fareyi dikkatlice çevirerek, sol tarafı size bakacak şekilde sağ yanına yatırın. Üçüncü ve dördüncü kaburga arasından sol taraf torakotomi uygulayın ve doku ile kası diseke edin. Kanamayı önlemek için dikkatlice koter kullanın.Toraksı dikkatlice açın. Toraks açıldıktan sonra, herhangi bir kesici aletle akciğere dokunmadan kalbi bulun. Ardından, perikard kesesinin kalbi örten kısmını çıkarın.LAD, pulmoner arter ile sol Oracle ligate arasında yer alır. Proksimal LAD, tek bir 8-0 prolen sütür ile bağlanır. 4. ve 5. kaburga arasına 28 gauge ven kateteri ile bir endotrakeal tüp yerleştirin.Torasik insizyonu, kaburgaları adapte etmek için 6-0 Prolene sürekli dikişler ve 4-0 Prolene sürekli dikişler kullanarak katmanlar halinde kapatın. Cildi kapatmak için, toraksı 2 mL'lik bir şırınga yardımıyla dikkatlice drene edin. Toraksı drene ettikten sonra fareyi sırt üstü yatırın.Yüz maskesini fareye yerleştirin ve endotrakeal tüpü çıkarın. Trakeal kartuş halkalarını 7-0 prolene sütürler kullanarak tek bir dikişle adapte edin ve cildi 4-0 prolene sürekli sütürlerle kapatın. LAD ligasyon fare modelinin, miyokard enfarktüsü oluşturmak için zarif ve güvenilir bir teknik olduğunu göstermiş bulunuyoruz.Başarılı bir miyokard enfarktüsünü doğrulamanın farklı yolları vardır. Yöntemlerden biri, fareden alınan 150 µL kanın özelleştirilmiş bir troponin test kitine uygulandığı troponin testidir. Birkaç dakika sonra iki çizginin belirdiği pozitif bir sonuç, doku hasarı nedeniyle kalpten troponin T salındığını gösterir.Başarılı bir miyokard enfarktüsünü doğrulamak için kullanılan ikinci bir yaklaşım, doku canlılığını ölçmek ve enfarkt boyutunu değerlendirmek amacıyla kalbin enine kesitlerini 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride veya TTC ile boyamaktır. Kalp TTC ile kaplanır ve 37 °C'de 20 dakika boyunca inkübe edilir. Canlı doku kırmızı görünürken, enfarkt alanı beyaz görünecektir.Son olarak, fare kalbi parafine gömülebilir ve histoloji için kesitleri alınabilir. Fibrotik dokuyu görüntülemek için kesitler trikrom ile boyanır. Az önce, ardından farelerde LID ligasyonunun nasıl gerçekleştirileceğini gösterdim.LID ligasyonundan saatler sonra veya haftalar sonra yapılan LID ligasyonunda, başarılı miyokard enfarktüsünün nasıl doğrulanacağına dair farklı yöntemler gösterdik. Akciğer hasarını önlemek için akciğer dokusundan uzak durmak önemlidir. Hepsi bu kadar.Videoyu izlediğiniz için çok teşekkür ederiz, deneylerinizde başarılar dileriz.

lad-ligation-a-murine-model-of-myocardial-infarction

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Akut miyokard infarktüsü (AMI) sıçan modelinde kalp patofizyolojik ve fizyolojik fonksiyonu MI sonucu incelemek için yararlıdır.

Sıçanlarda Akut Miyokard Enfarktüsü

Çok sayıda genetik manipülasyonlar ve / veya genler, proteinler, hücre ve / veya biyomalzemeler intramiyokardiyal enjeksiyonu, akut iskemi / reperfüzyon hasarı ve farelerde kronik remodeling çalışmaları zaman boyutu üzerine bindirilmiş. Bu video iskemi / reperfüzyon için mikrocerrahi prosedürleri, kalıcı koroner arter ligasyonu ve intramiyokardiyal enjeksiyon çalışmaları göstermektedir.

Enfarktüsü bir murin Model Koroner Arter ligasyon ve intramiyokardiyal Enjeksiyon

Farelerde Deneysel miyokardiyal enfarktüs indüklemek için kullanılan cerrahi prosedür kalp ve akciğer sol ön yüzeyine görselleştirmek için üçüncü ve dördüncü kaburgalar arasındaki sol torakotomi ile başlar. Sol koroner arter ligasyonu olduğu, göğüs kapalı ve fare kendiliğinden kurtarmak için izin verilir.

Fare Koroner Arter Ligasyonu için Modifiye Tekniği

Bu videoda, sol ön inen koroner arteri kalıcı olarak bağlayarak miyokard enfarktüsünün bir fare modelini oluşturmak için cerrahi bir prosedürü açıklıyoruz.

Miyokard Enfarktüsünün Murin Modelinin Oluşturulması: Fare Modelinde Sol Ön İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu İçin Cerrahi Bir İşlem

Biz tekrar elde edilebilirliğini arttırmak için, sol ön inen arter (LAD) üzerine ligasyon konumlandırma daha fazla netlik sağlar fare modellerinde miyokard infarktüsü (MI) simüle etmek için deneysel iskemi / reperfüzyon (I / R) hasarı ikna etmek için bir cerrahi yöntemi tanıtmak Farelerde MI deneyler.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Kalp yetersizliği hastaneye yatışların önde gelen nedeni ve mortalitenin önemli bir nedenidir. Miyokard enfarktüsü sonrası ventriküler yeniden şekillenme ve kardiyak disfonksiyonu araştırmak için farelerde sol ön inen koroner arterin kalıcı ligasyonu modeli uygulanır. Farelerde invaziv hemodinamik ölçüm tekniği sunulmuştur.

Farelerde Sol Ön İnen Koroner Arter Daimi ligasyonu: Post-miyokard Enfarktüs Remodelling ve Kalp Yetmezliği Bir Model

Bir fare modelinde sol ön inen arter (LAD) ligasyonu için güvenilir bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem, endotrakeal entübasyon, sol taraflı torakotomi yaklaşımı ve torasentezi içeren diğer yöntemlere göre nispeten daha az invazivdir. Bu yöntem hem akut hem de kronik miyokard enfarktüsü (MI) için bir model olarak kullanılabilir.

Kemirgen Sol Ön İnen (LAD) koroner arter ligasyonu: Miyokard İnfarktüsü Yönelik Gelişmiş ve Basitleştirilmiş Modeli

Burada farelerde sol anterior inen koroner arterin kalıcı ligasyonunun nasıl elde edilebildiğini gösteren bir cerrahi prosedürü açıklıyoruz. Bu model miyokard enfarktüsü ve eşlik eden biyolojik süreçlerin patofizyolojisini araştırmak için yüksek öneme hemşilir.

Sol Anterior İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu ile Murine Miyokard Enfarktüsü Modeli

Burada, mikromanipülasyon yoluyla sol ön inen koroner arterin hassas ligasyonu ile farelerde miyokard enfarktüsü veya miyokardiyal iskemi-reperfüzyon hasarını indükleyebilen basit ve tekrarlanabilir bir yöntem tanımlanmıştır.

Farelerde Miyokard Enfarktüsü ve Miyokard İskemi-Reperfüzyon Hasarının İndüksiyonu

Burada sunulan, farelerde sol koroner arterin kalıcı olarak bağlanması için cerrahi bir prosedürdür. Bu model, miyokard enfarktüsü sonrası patofizyolojiyi ve ilişkili inflamatuar yanıtı araştırmak için kullanılabilir.

Sol Koroner Arter Ligasyonu: Miyokard Enfarktüsünün Cerrahi Murin Modeli

Öğrenin, fare modelinde sol ön inen arter ligasyonu ile miyokard iskemisinin cerrahi indüksiyonunu. Bu yöntem, kardiyovasküler hastalıkların patofizyolojisini ve tedavi stratejilerini araştırmak için güvenilir bir platform sunar.

LAD-ligasyon murin Model: Miyokard Enfarktüsü

Daha fazla video keşfet