Drosophila (meyve sineği) Saldırganlık incelenmesi

Benim adım Sarah Ertel; Harvard Tıp Fakültesi Nörobiyoloji Bölümü'ndeki Ed Kravitz Laboratuvarı'nda doktora sonrası araştırmacıyım. Benim adım Sibu. Almanya'dan gelen bir tıp öğrencisiyim ve Kravitz Laboratuvarı'nda araştırma rotasyonumu gerçekleştiriyorum.

Bu videoda, dövüşlerin nasıl düzenlendiğini ve meyve sineklerindeki agresyonun nasıl incelendiğini göstermek istiyoruz. İlk olarak, sinek yemini mikrodalga fırında ısıtıp yem katılaştığında bir kültür tüpüne 1.5 ml ekleyerek izolasyon tüplerini hazırlıyoruz. Ardından tüpü pamukla kapatıyoruz.

İlk adım, sosyal olarak deneyimsiz sinekler elde etmektir. Başka bir sinek türü görmedim. Bunu yapmak için, ilgilendiğimiz sinek türlerinden geç evre pupaları alırız ve pupaları penset yardımıyla dikkatlice şişeden çıkarırız.

Hazırlanmış izolasyon tüpünü alın, pamuğu çıkarın ve pupayı nazikçe içeri yerleştirin, kapağını kapatın ve tüpü etiketleyin. Bu pupalar, gece-gündüz döngüsü kontrollü inkübatöre geri yerleştirilir. Ardından ertesi gün, sineklerin pupadan çıkıp çıkmadığı kontrol edilir ve sineklerin çıktığı tarih kaydedilir.

Ardından onları üç ila beş gün boyunca yaşlandırırız ve bu süre zarfında sinekleri tanımlayabilmek için abdomenlerinin arkasına boya uygularız. Şimdi ise asıl dövüşler için odacıklar hazırlıyoruz. Bunun için iki adet sade mikroskop lamı kullanıyoruz; ortasını ölçüp elmas uçlu kalemle işaretleriz, yüzeyi çizeriz ve ardından bir kenar bulduğumuzda mikroskop lamı kolayca ikiye bölünmelidir. Tamam.

Ardından, lamların kenarlarını yapıştırıcı ile birbirine yapıştırıyoruz. Daha sonra, bir kutu oluşturmak için iki yarı birbirine yapıştırılır. Parmak izlerini temizlemek için kutuyu %70 ethanol ve ardından bir miktar su ile temizleyebiliriz.

Haznenin tabanını %1 agros ile doldurun ve hazneyi içine yerleştirin. Bu işlem sinekler için nem sağlar. Ardından, sineklere mücadele edecekleri bir şey sunmak istiyoruz.

Böylece, odacığın gerçek boyutu bir bölge olarak kabul edilebilse de, onlara yiyecek sağlıyoruz. Bu yiyeceği bir sintilasyon şişesine koyuyoruz ve bu durum, bir sineğin savunmak isteyebileceği ek bir bölgesellik düzeyi oluşturuyor.

Şimdi mikrodalgada yeni ısıtılmış yemi alacağım ve bunları, daha sonra sineklerin dövüşeceği arena olarak kullanılacak olan sintilasyon kaplarına dolduracağım. Tüm yüzeyi net bir şekilde görebilmeniz için yemin hafifçe dışbükey olması önemlidir. Ayrıca hava kabarcığı oluşmamasına dikkat etmelisiniz; çünkü bu kabarcıklar, sinekler yem kabı üzerinde yürürken engel teşkil edecektir. Sinekleri yem kabına çekmek için bu işlem gerçekleştirilmektedir.

Ayrıca besin kabının ortasına bir damla maya macunu ekleyeceğiz. Bunun için öncelikle maya macununu hazırlamamız gerekiyor. Bunun için canlı maya macunu alıp bir besin kabına koyuyoruz, ardından bir damla su ekleyip macun kıvamına gelene kadar karıştırıyoruz.

Besin kapları soğuduğunda, maya pastasını veya ondan küçük bir damlayı besin kabının ortasına yerleştirirsiniz. Şu an davranış odalarımızdan birindeyiz. Tüm ışıkları açtığımızda bu oda tamamen karanlık olur; ayrıca nem ve sıcaklık kontrollüdür.

Sıcaklığı 25 °C'de tutuyoruz ve sinekleri mümkün olduğunca çok koşulda kontrol edebilmek için nemi %40'ın üzerinde tutmaya çalışıyoruz. Şimdi ise sinekleri yerleştireceğim. Daha önce hazırladığımız besin kaplarını buraya getirdim ve onları bu bölmelere yerleştireceğim.

Onları haznenin ortasına yerleştirmeye çalışın. Kapağı tekrar kapatıyoruz. Tamam. Ve şimdi, tam olarak bir çift sineği çekmek için bu aspiratörü kullanacağım.

Şimdi iki sinek alacağım, bunları buraya aspire edeceğim ve ardından hazneye yerleştireceğim. Yapacağım işlem budur. Şimdi, sineklerin yerçekimine karşı ışığa doğru gitme eğiliminde oldukları ve yukarı doğru hareket ettikleri bilindiği için flakonu bu şekilde tutacağım.

Böylece pamuğu çıkardığımda onları yakalamam daha kolay olur. Gördüğünüz gibi, şu anda her iki sinek de ator içerisinde. Ayrıca, bunlar boyanmış sinekler olduğu için, bir tane boyalı ve bir tane boyanmamış sinek aldığından emin olmam gerekiyor.

Veya iki renk kullanırsak, biri tek renge boyanmış, diğeri başka bir renge boyanmış olur ancak genotipleri aynıdır. Şimdi onları bunun için hazneye yerleştiriyorum. Balmumu topunu çıkarıyorum.

Sinekleri yerleştireceğim küçük bir delik var ve kapağı, tıkladığımda sineklerin kaçamayacağı bir konumda tutmaya çalışıyorum. Sinekler biraz aşağı düşecekler ve ardından onları çok sert üflemeden, rahatsız etmemek için sadece hafifçe üflüyorum. Sakinleşmeleri ve oda içindeki çevreye göz atmaları yaklaşık 3 ile 40 dakika arası sürüyor.

Ardından yem kabını işgal etmeye başlayacaklar ve dövüş başlayacak. Şimdi tüm hazneyi alıp kameranın önüne yerleştireceğim; tüm yem kabını görebilmemiz için yem kabını hafif bir açıyla çekecek şekilde yüksekliği ayarlamam gerekiyor. Böylece yem kabının tamamı net odak noktasında olacak.

Ayrıca, bu agresyon analizlerinin kurulduğu oda da önemlidir. Burası, trafikten ve gürültüden arındırılmış, izole bir odadır. Sineklerin bu durumdayken mutlu ve sağlıklı kalmaları için oda 25 °C'de tutulur ve nemin %45 ile %55 arasında tutulmasına çalışılır.

Ayrıca, yemek kabındaki ışığın da sinekler için bir çekim noktası olması amacıyla tavan ışıklarını kısıyoruz. Model sistem olarak DFA'yı ve bu tür bir düzeneği kullanmak, yalnızca saldırganlık yoğunluklarına değil, aynı zamanda gözlemlediğimiz spesifik saldırganlık örüntülerine de bakmamıza olanak tanır. Beynin gelişim sırasında nasıl yapılandığını ve ardından bu durumun, bu davranışları öğrenmemiş bir yetişkin olarak nasıl ortaya çıktığını öğrenmekle yakından ilgilendiğimiz spesifik davranışlar bunlardır.

Böylece, diğer sineklerle etkileşime girmeye başladıklarını gördükleri anda hemen dışarı çıkıyorlar. Nasıl hamle yapacaklarını ve nasıl agresif olacaklarını biliyorlar. Bu nedenle, bu davranışların sineklerin sinir sistemine nasıl kodlandığını ve ardından nasıl kontrol edildiklerini öğrenmek istiyoruz.