Kerevit Açıcı Kas NMJ Tarihsel ve Fizyolojisi gösteri

Kerevit bacak açıcı kas kas fenotip, sinaptik fizyolojisi ve plastisite tarihsel önemi ve deneysel çok yönlülük için sunulmuştur.

Hayvandan otomize edilen bir kerevit yürüme bacağından elde edilen açıcı kaslar. Kas açığa çıktığında, inovasyon modeli çeşitli boyama prosedürleri ile ortaya çıkarılabilir. Kısa süreli kolaylaştırma şeklindeki sinaptik tepkiler kastan kolayca kaydedilir.

Bir fokal makro yama elektrodu, sinir terminalleri boyunca tanımlanan varislerin üzerine doğrudan yerleştirilebilir. Daha sonra sinaptik yanıtlar kaydedilir ve bu, terminal üzerinde tanımlanmış bir konumdan niteliksel düzeyde sinaptik etkinliği ölçmek için kullanılabilir. Merhaba, benim adım Ann Cooper, Kentucky Üniversitesi Biyoloji Bölümü'ndeki Dr.Robin Cooper'ın laboratuvarından.

Merhaba, ben Robin Cooper. Öğrencim ve ben size kerevit açıcı kasını incelemek ve farklı uyarıcı paradigmalarla sinaptik tepkileri kaydetmek için kullanmak için bir prosedür göstereceğiz. Bu prosedürleri laboratuvarımızda sinaptik etkinliği ve sinaptik ultra yapı ile fonksiyon arasındaki ilişkiyi incelemek için kullanıyoruz.

Öyleyse başlayalım. 1879'da zoolog TH Huxley, bugün hala bu kabukluların yaşam tarihi, anatomisi ve fizyolojisi için kapsamlı bir rehber olarak kabul edilen Kerevit adlı bir kitap yazdı. Tarihin bu döneminde, kerevit bacaklarındaki açıcı kasın yeniliği karakterize ediliyordu ve kerevit kaslarında fizyolojik çalışmalar zaten devam ediyordu.

Aslında, kerevitlerde yapılan deneyler muhtemelen nöromüsküler kavşakta veya NMJ'de kolaylaştırmayı gösteren ilk deneyler olabilir. Dr. Riche, birincil araştırmasını tıp öğrencilerine kas fonksiyonu hakkında öğretmek için kullandığı tıp ders kitaplarında yayınladı. Önümüzdeki birkaç on yıl boyunca, kerevit n mjs, gerilim gelişimi ve anatomisi açısından anatomik ve fizyolojik olarak tanımlanıyordu.

1961'de doodle ve Kler, kerevit açıcı kasında kolaylaştırma gösterdiler ve ilk kez presinaptik inhibisyon fenomenini gösterdiler ve sinaptik iletimin niteliksel doğası hakkında rapor verdiler. 1971'deki bu NMJ'de, Sherman ve Edward'da, kerevitteki açıcı NMJ'nin uzun vadeli kolaylaştırma veya LTF sergilediğine dair ufuk açıcı bir keşif yaptılar. Kısa vadeli kolaylaştırma veya SDF'ye ek olarak.

Bu dönemden itibaren, birçok araştırmacı, hücresel mekanizmaları incelemek için kerevitin açıcı NMJ'sini kullanarak SDF ve LTF'nin özelliklerine odaklandı. Günümüzde, kerevitteki açıcı kas hazırlığı, sinaptik iletimin temellerini incelemek için hala kullanılmaktadır, çünkü diğerlerine kıyasla kolayca erişilebilir ve çok dayanıklıdır. Kerevit bacağını elde etmek için sinaptik preparatlar Diseksiyon için, vücut uzunluğu altı ila 10 santimetre olan bir kerevit, Iscu bakla segmentinde zorla çimdikleyerek birinci veya ikinci yürüme bacağını otomize etmeye teşvik edilir.

Bu prosedür, bekletme tankına geri dönen kerevitleri öldürmez. Kerevit bacağını mikroskop tablasında bir kağıt mendil üzerine yerleştirin. Bacağınızı dış tarafı yukarı bakacak şekilde çevirin.

Bu genellikle kemerli taraf yukarıdır. Kütikülü sadece kesene kadar aşındırmak için keskin bir tıraş bıçağı kullanın. Bu modelde, ilik bölmesi tarafından bakır bakla eklemine kadar dorsal distalden ventral kesime çok fazla kesmemeye dikkat edin.

Kütikülü şimdilik yerinde bırakın, jiletli neşter bıçağıyla, bir tarafta uygun diyet segmenti için bu deseni kesene kadar kütikülü uygun diyetle aşındırın. Bundan sonra, diğer tarafta tekrarlayın, açıcı kasını kesmekten kaçınmak için proksimal kesikleri birleştirin, bıçağı daha yakın kasa doğru eğilmeye devam edin. Kütikülü keserken, kütikülü şimdilik yerinde bırakın.

Daha sonra, bacağı, altta bir santimetre kalınlığında eşik koruyucu kaplaması olan bir diseksiyon kabında kerevit tuzlu suya batırın. Preparasyonu ince cımbızla sabit tutmak için meite'de yapılan pencerenin kesimi içindeki dorsal kordal köşeye bir pim batırın. Kütikülü distal uçtan hafifçe kaldırın ve jiletle fleksör kas liflerini distal proksimal bir şekilde kütikülden uzaklaştırın.

Ardından kütikül penceresini kaldırın. Kütikül kaldırıldıktan sonra, tendonu dikkatlice bacak boşluğundan çekin ve AEM'yi meitten CARite eklemine kesin. Tendonun iç tarafında bulunan ana bacak sinirini değil, sadece tendonu kesmeye özen gösterin.

Tendonu kesildiği yerden cımbızla sıkıştırın ve fleksör kasını kordal yönde kaldırarak çekin. Ana bacak siniri ve ekstansör kası artık açığa çıkmıştır. Uygun diyet segmentine ilerleyin ve uygun diyette daktil lipid dite eklemine kesin.

Uygun diyetin ventral segmentini üç ayda bir aşağı ve geriye doğru çekin, böylece kordal bölgeye bağlı kas görülebilir. Bu kasları jiletle kesin. Açıcı kasa giden motor sinir dalını kesmemeye dikkat edin.

Açıcı kas şimdi tuzlu suya maruz kalır. Bacak sinir demetinin genellikle iki ayrı sinir demeti içerdiği meit segmentinin en kordal bölgesine dönün. Sırt demetini ince bir makasla kesin.

Daha sonra kesilen ucu cımbızla alın ve meit segmentinin uzunluğunun yaklaşık yarısına ulaşılana kadar hafifçe distal olarak çekin. Bu uzun sinir dalı, uyarıcı açıcı siniri içerir. Daha büyük sinir demeti, açıcı kasın inhibitör motor nöronunu içerir.

Meit segmentindeki hazırlığı, meitin dorsal yönünden bir böcek pimi yerleştirilebilecek şekilde çapraz bir şekilde kesin. Bu, açıcı kasın ventral yönünü, gözlemciye bakacak şekilde konumlandırır. Ardından, açıcı kasın görüşünü engelleyen daha yakın kasın artık liflerini çıkarın.

Lifleri kütiküle doğru iterek ve boşluktan dışarı çıkarak, açıcı kas boyunca uzanan ve daktil lipide giden ana bacak siniri ince cımbızla nazikçe yukarı çekilebilir ve ardından kesilebilir. Artık açıcı kaslar, dalgaya girecek herhangi bir doku olmadan açığa çıkar. Uyarıcı post-sinaptik potansiyelleri veya EPSP'leri geri çağırmak için bir hücre içi elektrot veya bir fokal makro yama elektrodu, açıcı kas preparatını plastik bir emme elektrotu ile tasarlanmış bir kayıt odasına yerleştirir.

Uyarıcı elektrotun hazneye yerleştirilmiş olması, uyarıcı bir elektrot yerleştirmek için bir mikro manipülatör kullanmak zorunda kalmayı, preparatörü kayıt kabına sabitlemeyi ve uyarıcı siniri içeren sinirin dalını emme elektroduna yerleştirmeyi önler. Açıcı kas, distal, merkezi ve proksimal olmak üzere üç genel bölgeye ayrılır. Her ne kadar tüm açıcı kas tek bir motor nöron tarafından yenilense de, njs yapısal olarak farklıdır ve sinaptik etkinlikte bölgesel spesifik farklılıklara sahiptir.

En distal lifler, preparatlar arasında tutarlılık için kolayca ayrılabildiğinden, uyarılmış bir yanıt ortaya çıkarmak için bu gösteri için distal bölgeyi kullanacağız. Uyarıcı akson, bir çim sekiz sekiz stimülatörü tarafından seçici olarak uyarılacaktır. Açıcı kasın distal bölgesi, üç molar potasyum klorür ile doldurulmuş keskin bir hücre içi elektrot ile saplanır.

Hücre içi EPSP'leri kaydetmek için bir model akson kelepçesi iki B amplifikatörü ve A bir XL lu kafa aşaması kullanılır. Kısa süreli kolaylaştırma veya istenen diğer çeşitli tepkiler, uyaran koşullarının değiştirilmesiyle elde edilebilir. STF, uyarıcı sinire sırasıyla 10 veya 22. aralıklarla 10 veya 20 atımlık bir tren verilerek elde edilir.

Tren içindeki stimülasyon sıklığı değiştirilebilir. Çimin çıkışı, plastik emiş elektrodu içindeki gümüş tele bağlı kurşun ile bir uyaran izolasyon ünitesine bağlanır. Kurşun, fokal kaliteli EPSP'leri doğrudan sinir terminalinin tanımlanabilir bölgeleri üzerinden kaydetmek için banyodaki gümüş bir tele bağlanır.

Sinaptik varisler önce vital bir floresan boya, dört boya, iki A, SP ile görüntülenir. Burada chix camdan yapılmış bir makro yama kayıt elektrodu kullanılacaktır. Elektrotun lümeni, floresan mikroskobu altında çalışan bir tuzlu su banyosu ortamı ile doldurulur, sinir terminalini uyandırmak için bir makro yama kayıt elektrodunun lümeni doğrudan tek bir izole varisite üzerine yerleştirilir. Uyarıcı motor sinir, daha önce gösterildiği gibi uyarılır.

Spontan ve aynı zamanda uyarılmış niteliksel yanıtlar, elektrot lümenini nazikçe düşürerek ve üzerine kaldırarak görselleştirilmiş varisler dizisi boyunca kaydedilebilir. Her varislik, niteliksel olayların doğrudan sayımı, uyarılan her yanıt için düşük stimülasyon frekansları ile mümkündür. Nitelik olaylarının sayısı bir dizi yanıt için belirlenebilir.

Nitelik olaylarının toplam sayısı, daha sonra bu doğrudan sayımlara dayalı olarak ortalama nitelik içeriğini tahmin etmek için sayılır. Ortalama nitelik içeriğini hesaplamak için bir yaklaşım, stimülasyon sırasında uyarılan niteliksel olay türlerindeki toplam sayıyı almak ve aşağıdaki formülü kullanarak toplam uyaran denemesi sayısına bölmektir. Burada, 40 hertz'de 30 darbeyi uyarmak için bir dizi tekrarlayan deneme gösterilmektedir.

Her çalıştırma için kolaylaştırıcılığa ve stimülasyonun 60 hertz'e yükselmesi durumunda ortalama tepkiye dikkat edin. Bir varisite üzerinde bir fokal elektrot ile kayıt yaparken ve bir hertz'de uyarırken daha belirgin bir kolaylaştırma gözlenir. Uyarılan qal cevapları gözlenir.

Size kerevit açıcı kasını nasıl inceleyeceğinizi ve çeşitli stimülasyon paradigmaları ve teknikleriyle sinaptik tepkileri kaydetmek için nasıl kullanacağınızı gösterdik. Bu prosedürleri yaparken, nöronları dikkatli bir şekilde tedavi etmeyi ve onları çok sert çekmemeyi veya sıkıştırmamayı unutmamak önemlidir. Ayrıca, fokal makro yama elektrodunu görselleştirilmiş varislerin üzerine yerleştirirken, elektrotu bu varislerin üzerine hafifçe yerleştirin ve geri kaldırın.

Hatırlanması gereken bir diğer nokta da, hazırlığı cıva ışığına çok uzun süre maruz bırakmak istememenizdir, çünkü bu sinir terminaline de zarar verebilir. İşte bu kadar. İzlediğiniz için teşekkür ederiz ve deneylerinizde iyi şanslar.