Name: Kerevit Açıcı Kas NMJ Tarihsel ve Fizyolojisi gösteri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-11-09T17:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 56 s
Description: Öğrenin kerevit açıcı kasının diseksiyonunu ve sinaptik yanıtların elektrofizyolojik kaydını. Bu yöntem nöromusküler bağlantı fizyolojisi ve sinaptik plastisite araştırmaları için değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

kerevit açıcı kas nmj tarihsel ve fizyolojisi gösteri

Historical View and Physiology Demonstration at the NMJ of the Crayfish Opener Muscle

Burada bazı kabuklu açacağı nöromüsküler (NMJ) hazırlanması ile yapılan önemli keşifler mevcut ve bu model hazırlama öğrenecek çok şey olduğunu göstermek. Bu NMJ hala pre-ve post-sinaptik fonksiyon ve plastisite ile ilgili soruları yanıtlamak için zengin bir oyun sunuyor neden bugün bile geçmişi anlamada bir takdir edebilirsiniz. Hücre içi gibi ekstrasellüler elektrofizyoloji ve görüntüleme için canlılığı ve terminal erişim kolaylığı önemli avantajlar. Yüksek ve düşük-çıkış terminalleri içinde veziküler kinetik ve füzyon modülasyon arkasındaki mekanizmalar soruşturma için yalvarıyor. Hazırlanması, örneğin kısa vadeli kolaylaştırma sırasında kalsiyum dinamikleri de, teorik modeller sinaptik fonksiyon anahtar değişkenleri incelemek için hesaplama değerlendirmeler ve manipülasyon için test edilebilir bir model sistem sunmaktadır. Sinaptik aktif bölge ve quantal serbest istatistiksel doğanın karmaşıklığı da hem deneysel hem de hesaplama gelecek soruşturma için açık bir konudur.

Kerevit bacak açıcı kas kas fenotip, sinaptik fizyolojisi ve plastisite tarihsel önemi ve deneysel çok yönlülük için sunulmuştur.

Kerevit Açıcı Kas NMJ Tarihsel ve Fizyolojisi gösteri

Burada, krustaselerin açık nöromüsküler (NMJ) preparatı ile yapılmış bazı temel ve önemli keşifleri sunuyor ve ... olduğunu gösteriyoruz.

Hayvandan otomize edilen bir kerevit yürüme bacağından elde edilen açıcı kaslar. Kas açığa çıkarıldığında, çeşitli boyama prosedürleri ile inovasyon deseni ortaya çıkarılabilir. Kısa süreli kolaylaştırma biçimindeki sinaptik yanıtlar kastan kolaylıkla kaydedilebilir.Sinir terminalleri boyunca tespit edilen varikositelerin üzerine doğrudan odaklanmış bir makro yama elektrot yerleştirilebilir. Ardından, terminal üzerindeki belirli bir konumdan sinaptik etkinliği kalitatif düzeyde ölçmek için kullanılabilecek sinaptik yanıtlar kaydedilir. Merhaba, ben Kentucky Üniversitesi Biyoloji Bölümü'nden Dr. Robin Cooper'ın laboratuvarından Ann Cooper.Merhaba, ben Robin Cooper. Öğrencim ve ben, crayfish açıcı kasını disseke etme prosedürünü ve farklı stimülasyon paradigmalarıyla sinaptik yanıtları kaydetmek için bu kası nasıl kullanacağınızı göstereceğiz. Bu prosedürleri, sinaptik etkinliği ve sinaptik ultrastrüktür ile fonksiyon arasındaki ilişkiyi incelemek için laboratuvarımızda kullanıyoruz.Öyleyse başlayalım. 1879 yılında zoolog TH Huxley, günümüzde hala bu kabuklunun yaşam öyküsü, anatomisi ve fizyolojisine dair kapsamlı bir kılavuz olarak kabul edilen The Crayfish adlı bir kitap yazmıştır. Tarihin bu dönemlerinde, kerevit bacaklarındaki açıcı kasın yenilikçi özellikleri tanımlanmaktaydı ve kerevit kasları üzerine fizyolojik çalışmalar zaten yürütülmekteydi.Aslında, kerevitlerde yapılan deneyler, nöromüsküler kavşakta (NMJ) kolaylaşmayı gösteren ilk çalışmalar olabilir. Dr. Riche, temel araştırmalarını, tıp öğrencilerine kas fonksiyonlarını öğretmek için kullandığı tıp ders kitaplarında yayınlamıştır. Takip eden birkaç on yıl boyunca, kerevit NMJ'leri gerilim gelişimi ve anatomi açısından anatomik ve fizyolojik olarak tanımlanmıştır.1961 yılında, doodle ve Kler, kerevit açıcı kasında kolaylaşma (facilitation) olduğunu göstermiş; presinaptik inhibisyon fenomenini ilk kez ortaya koymuş ve sinaptik iletimin dual doğası hakkında rapor vermişlerdir. 1971 yılında Sherman ve Edward, kerevitteki açıcı NMJ'nin, kısa süreli kolaylaşma (STF)ya ek olarak, uzun süreli kolaylaşma (LTF) sergilediği yönündeki çığır açan keşfi bu NMJ üzerinde gerçekleştirmişlerdir.Bu dönemden itibaren birçok araştırmacı, hücresel mekanizmaları incelemek için kerevitin açıcı NMJ'sini kullanarak SDF ve LTF'nin özelliklerine odaklanmıştır. Günümüzde, kerevitteki açıcı kas preparatı, birçok diğer preparata kıyasla kolayca erişilebilir ve oldukça dayanıklı olduğu için sinaptik iletimin temellerini çalışmak için hala kullanılmaktadır. Diseksiyon için kerevit bacağını elde etmek amacıyla yapılan sinaptik preparatlarda, vücut uzunluğu 6 ila 10 santimetre olan bir kerevite, iskuopod segmenti kuvvetlice sıkılarak birinci veya ikinci yürüyüş bacağının ototomize olması sağlanır.Bu prosedür, tutma tankına geri döndürülen kerevitlere zarar vermez. Kerevit bacağını mikroskop tablasındaki bir parça kağıt mendilin üzerine yerleştirin. Bacağın dış kısmının yukarı bakacağı şekilde çevirin.Bu genellikle kavisli tarafın yukarı bakmasıyla yapılır. Kütikülü, sadece kesip geçene kadar kazımak için keskin bir ustura bıçağı kullanın. Bu düzende, kemik podu ile bakır podu eklemi arasındaki dorsalden ventrale doğru yapılan kesimde, distal yönde çok uzağa gitmemeye dikkat edin.Kütikülü şimdilik yerinde bırakın; jilet neşter ucuyla, uygun diyet segmentinin bir tarafı için belirtilen desende, sadece kütikülü kesecek şekilde kütikül üzerine çizikler atın. Ardından, açıcı kasın kesilmesini önlemek için proksimal kesikleri birleştirerek işlemi diğer tarafta tekrarlayın ve bıçağı daha yakın olan kasa doğru eğimli tutun. Kütikülü keserken, kütikülü şimdilik yerinde bırakın.Ardından, bacağı, tabanında bir santimetre kalınlığında eşik koruyucu kaplama bulunan bir diseksiyon kabındaki kerevit salinine daldırın. Hazırlığı sabit tutmak için ince cımbızlar yardımıyla, meite üzerindeki pencere kesiğinin içindeki dorsal kordal köşeye bir iğne saplayın. Kütikülü distal uçtan hafifçe kaldırın ve jiletle fleksör kas liflerini distalden proksimale doğru kütikülden ayırın.Ardından kütikül penceresini kaldırın. Kütikül kaldırıldıktan sonra, tendonu bacak boşluğundan dikkatlice çekin ve AEM'yi meite ile CARite eklemi arasından kesin. Sadece tendonu kestiğinizden ve tendonun iç tarafında bulunan ana bacak sinirini kesmediğinizden emin olun.Kesilen tendonu pensetle tutun ve fleksör kası kordal yönde kaldırarak ayırın. Ana bacak siniri ve ekstansör kas şu an açığa çıkmıştır. Uygun diyet segmentine geçin ve daktil lipid dite eklemindeki uygun diyet bölgesinden kesin.Uygun diyetin ventral segmentini, kordal bölgeye tutunmuş kaslar görülebilecek şekilde aşağıya ve geriye doğru çeyrek ölçüde çekin. Bu kasları jiletle kesin. Açıcı kasa giden motor sinir dalını kesmemeye dikkat edin.Açıcı kas şu an salyine maruz kalmış durumdadır. Bacak sinir demetinin genellikle iki ayrı sinir demeti içerdiği meite segmentinin en kordal bölgesine geri dönün. Dorsal demeti ince makasla kesin.Ardından, kesik ucu bir cımbızla tutun ve meite segmentinin uzunluğunun yaklaşık yarısına ulaşana kadar nazikçe distal yöne doğru çekin. Bu uzun sinir dalı, eksitatör açıcı siniri içerir. Daha büyük sinir demeti ise açıcı kasın inhibitör motor nöronunu içerir.Hazırlığı, bir böcek iğnesinin meite segmentinin dorsal kısmından geçebileceği şekilde diyagonal olarak kesin. Bu işlem, açıcı kasın ventral kısmını gözlemciye bakacak şekilde yukarıya konumlandırır. Ardından, açıcı kasın görünümünü engelleyen kapatıcı kasın kalıntı liflerini temizleyin.Lifleri kütiküle doğru itip boşluktan dışarı çıkararak, açıcı kas boyunca uzanan ve daktil lipide giren ana bacak siniri ince cımbızla nazikçe yukarı çekilebilir ve ardından kesilebilir. Böylece, yola engel olacak herhangi bir doku kalmadan açıcı kaslar açığa çıkmış olur. Eksitatör post-sinaptik potansiyelleri veya EPSP'leri kaydetmek için hücre içi bir elektrot veya odaklanmış makro yama elektrot kullanmak amacıyla, açıcı kas preparatı plastik vakumlu elektrotla tasarlanmış bir kayıt odasına yerleştirilir.Uyarıcı elektrodun hazneye entegre edilmiş olması, kayıt kabına yerleştirilen preparata bir uyarıcı elektrot pini yerleştirmek ve eksitatör sinir liflerini içeren sinir dalını vakum elektroduna yerleştirmek için bir mikromanipülatör kullanma zorunluluğunu ortadan kaldırır. Açıcı kas; distal, santral ve proksimal olmak üzere üç genel bölgeye ayrılmıştır. Açıcı kasın tamamı tek bir motor nöron tarafından inerve edilse de, nöromüsküler bağlantılar (nj'ler) yapısal olarak farklıdır ve sinaptik etkinlik açısından bölgeye özgü farklılıklar göstermektedir.En distal lifler, preparatlar arasında tutarlılık sağlamak amacıyla kolayca belirlenebildiği için, uyarılmış bir yanıt elde etmek amacıyla bu gösterimde distal bölgeyi kullanacağız. Eksitatör akson, bir grass eight eight stimülatörü ile seçici olarak uyarılacaktır. Opener kasının distal bölgesine, 3 molar potasyum klorür ile doldurulmuş keskin bir hücre içi elektrot saplanacaktır.Hücre içi EPSP'lerin kaydedilmesi için bir Axon Clamp 2B amplifikatörü ve bir Axon One XL kafa katı (head stage) kullanılır. Kısa süreli kolaylaştırma veya istenen diğer çeşitli yanıt türleri, stimülasyon koşulları değiştirilerek elde edilebilir. STF, eksitatör sinire sırasıyla 10 veya 20 darbelik bir trenin 10 veya 22 ms aralıklarla verilmesiyle elde edilir.Uyarı dizisi içindeki stimülasyon frekansı değiştirilebilir. Grass cihazının çıkışı, plastik vakum elektrodu içindeki gümüş tele bağlı olan bir stimülasyon izolasyon ünitesine bağlanır. Sinir terminalinin belirlenebilir bölgeleri üzerindeki fokal kalitatif EPSP'leri doğrudan kaydetmek için iletken, banyodaki bir gümüş tele bağlanır.Sinaptik varikositeler ilk olarak hayati bir floresan boya olan four dye two A SP.A ile görselleştirilir. Burada, borosilikat camdan yapılmış bir makro patch kayıt elektrodu kullanılacaktır. Elektrodun lümeni salin banyo ortamı ile doldurulur; floresan mikroskobu altında çalışarak, sinir terminalini uyarmak için makro patch kayıt elektrodunun lümeni doğrudan tek bir izole varikositenin üzerine yerleştirilir. Eksitatuar motor sinir, daha önce gösterildiği şekilde stimüle edilir.Elektrot lümeni nazikçe aşağı indirilerek ve üzerinden kaldırılarak, görselleştirilen varikoziteler boyunca hem spontan hem de uyarılmış kal responses kayıt altına alınabilir. Düşük stimülasyon frekansları kullanıldığında, her bir uyarılmış yanıt için her bir varikozitedeki kal olaylarının doğrudan sayımı mümkündür. Bir dizi yanıt için kal olaylarının sayısı belirlenebilir.Doğrudan sayımlara dayanarak ortalama qual içeriğini tahmin etmek için toplam qual olay sayıları hesaplanır. Ortalama qual içeriğini hesaplamanın bir yolu, stimülasyon sırasında uyarılan qual olay türlerinin toplam sayısını almak ve bunu aşağıdaki formülü kullanarak toplam stimülasyon denemesi sayısına bölmektir. Burada, 40 hertz hızında 30 pals stimülasyonun uygulandığı tekrarlayıcı denemeler seti gösterilmektedir.Her bir çalışma için kolaylaşmayı ve stimülasyon 60 hertz'e çıkarıldığında ortalama yanıtı not edin. Bir varisite üzerindeki fokal elektrotla kayıt yapıldığında ve bir hertz'de stimüle edildiğinde daha belirgin bir kolaylaşma gözlemlenir. Uyarılan qal yanıtları gözlemlenir.Size, kerevit açıcı kasının nasıl diseke edileceğini ve çeşitli stimülasyon paradigmaları ve teknikleri ile sinaptik yanıtların kaydedilmesi için nasıl kullanılacağını gösterdik. Bu prosedürleri uygularken, nöronlara dikkatli davranmanın, onları çok sert çekmemenin veya sıkıştırmamanın önemli olduğunu unutmayın. Ayrıca, fokal makro patch elektrodunu görselleştirilen varikositelerin üzerine yerleştirirken, elektrodu bu varikositelerin üzerine hafifçe yerleştirip ardından geri kaldırmaya özen gösterin.Hatırlanması gereken bir diğer nokta, hazırlığın cıva lambasına çok uzun süre maruz bırakılmaması gerektiğidir, çünkü bu durum sinir terminaline de zarar verebilir. İşte böyle. İzlediğiniz için teşekkürler ve deneylerinizde başarılar dilerim.

historical-view-physiology-demonstration-at-nmj-crayfish-opener

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu makale, sinaptik yanıtları elektrofizyolojik kayıtlar yapmak bir kerevit yürüyüş bacak ekstansör kas ve sinir terminalleri, yüksek ve düşük çıkış sinir terminallerine brüt morfolojik farklılıklar göstermektedir görselleştirildiği nasıl gösteriyor.

Kerevit Bacak ekstansör kas Yüksek ve Düşük Çıkış NMJs Fizyolojik Kayıtlar

Deneyleri, kas yapısı, sinaptik tepkiler, iyon gradyanlar ve membran potansiyelleri üzerine geçirgenlik etkilerini inceleyerek deneyim kazanmak için öğrenciler için kolay bir yaklaşım göstermektedir. Ayrıca, duyu-MSS-motor-kas devre nöronal devre bileşiklerin etkilerini test etmek için bir araç göstermek için sunulmuştur.

Membran Potansiyelleri, Synaptic Yanıtları, Sinir Devresi, Nöromodülasyon ve Kerevit kullanarak kas Histoloji: Öğrenci Laboratuvarı Egzersizler

Bu deneyin temel amacı, primer duyusal nöronlar bir hayvan için proprioseptif bilgi olarak eklem hareketleri ve pozisyonları bilgi iletmek nasıl anlamak için. Bu raporun ek bir amacı diseksiyon mikroskobu altında diseksiyon ve nöron inceleyen hazırlık anatomi mevcuttur.

Kerevit Karın kas Reseptör Organlar: Propriyoseptör Öğrenci Laboratuvar Egzersiz

Bu yazıda, kerevit hindgut biyoloji araştırmak için kullanılan teknikler göstermektedir. Biz bir kerevit karın incelemek ve ilgili anatomi, fizyoloji ve faaliyet modülasyonu çalışma göstermektedir. Kasılmaların peristaltik aktivite ve gücünü bir kuvvet dönüştürücü kullanarak ölçülür.

Kerevit Hindgut Fizyolojik Deney: Öğrenci Laboratuvar Egzersiz

Bu biyolojik membranlar elektrik modelleri kullanarak nasıl anlaşılabilir bir gösteri. Ayrıca öğrenci yönelik laboratuarlar için kerevit ventral sinir kordonundan aksiyon potansiyelleri kayıt prosedürleri göstermektedir.

Devre Biyolojik Membranlar Modelleme ve Aksonlar Elektrik Sinyalleri Ölçme: Öğrenci Laboratuvar Egzersizler

Fizyolojik ve anatomik teknikler kabuklu yürüme bacaklarda eklem proprioseptörlere ve kas gerginliği reseptörleri için işlevini ve yapısını ele gösterilmiştir.

Yengeç Parmak Propriyoseptör ve Gerilim reseptörleri: Öğrenci Laboratuvarı Egzersizler

Drosophila Larvaların NMJ Diseksiyon

Bu protokol disseke Drosophila larva immünohistokimya nasıl gerçekleştirileceği göstermektedir.

Drosophila Larvaların NMJ İmmünohistokimya

Burada Drosophila larva nöromüsküler kavşakta sinaptik iletim ölçmek için elektrofizyolojik yöntemler açıklanmaktadır. Uyarılmış serbest motor nöron aksonları uyararak yapay olarak başlatılan ve iletim yoluyla NMJ kas uyarılmış postsinaptik tepki ölçülebilir.

Drosophila Larva NMJ Synaptic Potansiyeller kayıt için Elektrofizyolojik Yöntemler

Bir doku hazırlanması, görselleştirme ve yaşam mikrosirkülasyon deneysel manipülasyon için tarif edilir. Anestezi erkek farelerde, ince, yüksek vaskülarize Cremaster'ın kas arteriol, kapiller ve venüllerde mikrovasküler ağları da dahil olmak üzere çalışma intravital mikroskopi için hazırlanmıştır. Bu preparat, sıçan ve hamster için kolayca adapte.

Mikrosirkülasyon intravital Görüntüleme Fare Cremaster&#39;ın kas Hazırlık

Öğrenin kerevit açıcı kasının diseksiyonunu ve sinaptik yanıtların elektrofizyolojik kaydını. Bu yöntem nöromusküler bağlantı fizyolojisi ve sinaptik plastisite araştırmaları için değerlidir.

Kerevit Açıcı Kas NMJ Tarihsel ve Fizyolojisi gösteri

Daha fazla video keşfet