Name: Larvaların olarak izlenmesi Kalp Fonksiyonu Drosophila melanogaster Fizyolojik Çalışmaları (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-11-16T17:02:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Öğrenin Drosophila melanogaster larvalarında kalp fonksiyonu izleme yöntemlerini. Bu teknik, bütün ve disseke preparatlarla kalp hızı ölçümü, iyon kanalı mutasyonları ve farmakolojik müdahaleler için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biyoloji Bölümü, Kentucky Genç Araştırmacılar ve Lisans Eğitim-EuReKA G. Ribble Bursu tarafından sağlanan Finansman! Ofisi (KY Üniv).

GİRİŞ Hem böcekler ve omurgalılar için kalp fonksiyon hücresel mekanizmaları inanılmaz benzer Drosophila melanogaster insanlar (Bier ve Bodmer, 2004 de dahil olmak üzere diğer hayvanlarda hastalık durumları için sorumlu olan gen mutasyonlarının araştırılması için kullanılmaktadır. Peron ve ark, 2009). (Bier ve Bodmer, 2004;;. Ocorr ve ark, 2007a, b; Johnson ve ark, 1998; Ganetzky, 2000 Dowse ve ark, 1995) ve umuyoruz ki, Şimdi çeşitli hastalıklar bu uysal Genetik organizmada meydana ediliyor Zaman gen tedavisi normal işlev geri kazanmak için test edilebilir. Drosophila Buna ek olarak bir hücresel düzeyde fizyolojik fonksiyonu için iyi bir model olarak hizmet vermektedir. Drosophila kalp geçmiş çalışmaların çoğu, embriyonun gelişim yönlerini (Azpiazu ve Frasch 1993, Bodmer 1993, Bodmer ve ark 1990) hedef olmuştur . O ve Adler, 2001; Molina ve Cripps, 2001; Ponzielli ve ark, 2002; Sláma ve Farkas, 2005; fizyolojik fonksiyonu Birkaç çalışmalar ön-pupa, pupa veya yetişkin evrelerinde (Ashton ve ark, 2001 yılında meydana gelen Wessells ve Bodmer, 2004). Ancak pupa aşamada metamorfoz ve değişen hormonlar gibi dalgalanan çeşitli biyojen aminler biridir. Ayrıca kalp miyosit fizyolojisini araştıran değişkenler için kontrol etmek zor olduğu ispat yapısal dönüşüm geçirmekte (Dulcis ve ark 2005; Johnson ve ark 2002; Miller, 1997; Papaefthimiou ve Theophilidis, 2001). Larva aşamasında miyojenik olarak bilinen kalp gibi dolaşan hormonlar veya peptidlerin (Dowse ve arkadaşları 1995 gibi değişkenlerin bileşik sınırlamak için belirli bir fizyolojik tuzlu su ile yıkanıyor kolayca temizlenebilir veya in situ sol olabilir.. Johnson ve ark, 1997 Dasari ve Cooper, 2006; Feng ve ark 2004). Larva kalp miyojenik doğa banyo organlarda etkili olabilmesi için bir yön sıvı pompalamak için kalbin geri kalan sürücü Kalp pili olduğunu memeli kalp karşılaştırılabilir. Memeli kalp fonksiyonu için temel ilkeleri ve patolojik etkileri test etmek için hızlı bir aracı olarak hizmet yanı sıra bu yana Drosophila larva kalp kronotropik ve inotropik doğa ilgi gibi iyonik düzenleme gibi hücresel fizyoloji için karşılaştırmalı bir model geliştirmek için yardım kalp pili hücreleri. Johnson ve ark 1997, 2000;. Nichols ve ark 1999; Zornik ve ark larva kalp bağlı olarak besin kaynağı ya da bir hayvanın içsel durumu (Dasari ve Cooper, 2006 hemolimf değişir biyojenik aminler ve peptidler karşı son derece hassastır . 1999). Endojen veya eksojen bileşiklerin mekanistik kalbi nasıl etkilediğini Adresleme ilgi. Muhtemelen roman diğer canlılar üzerindeki etkileri daha az olan böcek, böcek fizyoloji ve farmakoloji bir anlayışa geliştirilebilir. Larva nörotransmitterlerin ve kalp modülatörleri eylem hücresel mekanizma iyonik akımlar ve larva kalp pacemaker aktivitesi düzenleyen ve katkıda bulunan kanal türleri yeterli anlayışı olmamıştır olarak bugüne kadar tanımlanmamıştır. Bildiğim kadarıyla biz farkında olarak, larva Drosophila modülatörlerin mekanik etkileri adresi iyonik akımlar değerlendirmek için miyositler ekstrasellüler ya da hücre içi kayıtları belgeleyen herhangi bir rapor vardır. Bu yazıda larva kalp kalp hızı ve fizyolojik özellikleri kaydetmek için çeşitli yöntemler sunuyoruz. YÖNTEM Bozulmamış larva: <ol><li> Sağlam bir dayak larva kalp görselleştirme iyi bir araç doğrudan mikroskop ile Bununla birlikte, larva hala kasılmaları saymak için yeterli kalmalıdır. Biz geliştirme yöntemleri larvaları gibi ölçülü larvalar, serbestçe hareket eden kalp hızı monitörü. Bağlı olanlar üzerinde deneysel soru bir yaklaşımı, diğerlerinden daha uygun olabilir. </li><li> Bu yaklaşımlar, bakım dehidratasyonu önlemek için kullanıldığı takdirde uzun bir süre içinde tek bir takip için kullanılabilir. Bu yöntemler aynı zamanda diyet tanıtıldı farmakolojik ajanların değerlendirmek veya mutasyon hatlarında geliştirme veya ısı şok genlerin indüksiyon ile çeşitli zamanlarda incelemek için kullanılabilir. </li><li> Ilk dizginlenmemiş yöntemi terim, &quot;Ant çiftlik&quot;. Bu teknik larvaları gıda ince bir tabaka tarafından arayla iki cam levha oluşur. Larvaları odak düzlemi içinde görüntülenmiştir. Bu teknik aynı zamanda larva elektriksel aktivite sirkadiyen hareketi (Cooper ve Cooper, 2004) izlemek için kullanılmıştır. (1 ile 1 dar aralıklı Bu teknik, iki cam plaka (75 x 25 mm J. Melvin Freed Marka mikroskop lamı) oluşur.Larvaların bir düzlem içinde odak görüntülenebilmekte mümkün olduğu kadar larvaları gıda ince bir tabaka (Lewis, 1960 örneğin nemli mısır yemek değiştirilmiş bir sürümü) dışında 5 mm). Jel electrophoreses plakalar için yaygın olarak kullanılan Rondela (mini jel Bio-Rad, Yaşam Bilimleri Araştırma, Hercules, CA 94.547, ABD), 1., 2. veya 3. instar larvaları karınca çiftliği prosedürleri kullanmak için kalınlığı değişen satın alınabilir bu yana çok iyi çalışmaz. Ayrıca bir seçenek, belirli bir kalınlıkta sağlam bir plastik kullanımı ve tarama alanı olarak kullanmak için bölgeyi kesip. </li><li> Istenilen kalınlıkta bir plastik kullanılan iki tabak, cam kenarlarından dışarı sürünerek larvaları önlemek için. 20 ila 45 derece hafifçe eğerek platform larvaları kalmasına neden olur, zamanın büyük bir çoğunluğu, kendi kafa ile aşağı çekti ve kuyruk, gıda yukarıda veya gıda tabakası hava geçişini içinde spiracles içeren. </li><li> Bu &quot;Ant Farm Tekniği&quot;, aynı zamanda gıda ile aynı kalınlıkta bir tek düzlem içinde video görüntüleme sağlar. Bu yapılandırmada larvaları gıda boyunca tarama değil eğilimindedir, ancak bunun yerine yemek ve kademeli olarak 2 boyutlu düzlemde dolaşmak. Beyaz ışık, kalp sözleşmeleri ise hareket kalp ya da iki trakea en iyi kontrast buna göre hareket ettirilebilir ve böylece bir ayna ile mikroskop aşamasında alt tahmin edilmektedir. A mikroskobu (ayarlanabilir zoom 0,67-4,5; Dünya Hassas Çalgı; Model 501.379) kullanılır. 2X temel amacı ve tüp hedefi 0.5x 0.5 cm dikdörtgen bir 1cm karşılamak için yeterli uzaysal çözünürlük ve büyütme elde etmek için kullanılır. Trinoküler montaj yoluyla monte edilmiş bir kamera (Dünya Precision Instrument Mintron, MTV) kullanılır. Ortam sıcaklığı 20 ° C&#39;de muhafaza <img src="/files/ftp_upload/1596/1596fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1, sağlam bir 3. instar larva Dorsal görünümü . Kalpten gelen ekleri çekerek nedeniyle trakea hareketi kalp atış hızını gözlemlemek için kullanılır. </li><li> Serbestçe hareket hayvan izlemek için bir seyreltilmiş gıda karışımı hayvanların başının üzerine birkaç damla yerleştirebilirsiniz. Bu iletilen ışık kalp tüp görselleştirmek için larva geçmesine böylece bir cam tabak içinde yapılmalıdır. Kalp atışı izlemek ve sayıları elde etmek için, yukarıda açıklandığı gibi ayarlayabilirsiniz aynı mikroskopi kullanılabilir. </li><li> Diğer bir yaklaşım, çift kaset sopa kullanarak bir bardak slayt ve teyp (Baker ve ark, 1999) larva ventral tarafında yerleştirerek bir konuma larva dizginlemek için . Larvaları besleme bant ıslanırsa Ancak bu yaklaşım iyi çalışmaz. Önlemek için ıslak bir elde bant Vazelin (larva tabanı etrafında ve bant kenarı etrafında küçük bir iğne dışarı enjekte) kullanabilirsiniz. Burada bir zaman içinde bir çanak üzerinde hareket ederken, odak düzlemi içine larva kovalamak veya kalmadan larva besleyebilir. Bir dilek larvaların serbest Eğer bant nemlendirilmiş ve hayvan bu yapışkanlık kaybeder olabilir. </li></ol> Bir deney için larva kurtararak ilgilenen değilse bir cam slayt yapıştırma hayvan larva frenleyici kalıcı bir yöntem kullanabilirsiniz. Süper yapıştırıcı yönteminin kullanımı ile, hayvanın yemek ve cam kapak slip yapıştırılır kalırken, nemli bir çözüm bile karşılanabilir. Bu prosedürler şunlardır: <ol><li> Temiz bir slayt atın ve bunun bir ucunda bir kapak kayma bir yer. </li><li> Superglue, kapak kayma bir köşesinde küçük bir dab koyun. </li><li> Drosophila larva bulun ve test tüpü çıkarın. </li><li> Petri kabı içerisinde larva yerleştirin ve herhangi bir aşırı gıda kaldırmak için küçük bir miktar su ile durulayın. </li><li> Köşesinde küçük bir doku ya da kağıt havlu ile gıda raybalama içinize çekin. </li><li> Cımbız ile hafifçe larva pick up ve kapak kayma zıt ucunda slayt üzerine yerleştirin. </li><li> Slayt mikroskop altında yerleştirin ve ayarlamak larva katıyor. Larva arkasına bakacak şekilde yukarı karnına alınmalıdır. Sırtlarını trakea iki &quot;Racing Stripes&quot; özelliği nedeniyle larva iki tarafı ayırt edebilirsiniz. Mide çok ince siyah kıllar ile birlikte çalışan soluk yatay oluk vardır. </li><li> Larva yanlış bir şekilde karşı karşıya ise, sadece cımbızla yavaşça ters çevirerek doğru yol açmak. </li><li> Cımbız bir dizi yeni özellikle yapıştırıcı için kullanılan kayma ve diğer ucunu köşesine yerleştirin açılan kapağı sonunda küçük bir dab ile. Tutkal Kesirli miktarda kullanmanız gerekir; cımbız baş örtüsü için yeterli. Ayrıca, yapıştırılmış kapattı olmazlar böylece cımbız ucu silin emin olun. </li><li> Mikroskop altında, çift larva hala doğru konumda olduğundan emin olmak için kontrol edin. Devretti, sekiz adıma bakın. </li><li> Şimdi, larva işlemek için kullanılan cımbız, larva, pick up vetutkal taze yama hafifçe yerleştirin. Siyah ağız kanca yakın veya kapak kayma kenarında bulunan ve kendilerinin ya da kahverengi spiracles ne yapıştırıcı ile temas halinde gelir emin olun. </li><li> Düzleştirmek için larva dikkatlice bastırın. </li><li> Şimdi larva yerinde olduğunu, onları test etmek istediğiniz maddeler yönetebilirsiniz. </li><li> Madde hazırlamak ve yemek için küçük dozlarda larva başkanı tarafından bir şırınga kullanıyorsanız, bu en iyi şekilde gerçekleştirilir. </li><li> Sonuç olarak, kalp hızı, bir dakika içinde spiracles bakliyat sayısını sayma görülebilir. </li></ol> In situ: Diseksiyon ve kalp hızı sayma: Preparatlar orta-ventral uzunlamasına ekseni boyunca yarık ve düz tutturulmuş. Hazırlık çanak bir tarafa yapıştırılır manyetik bant ile cam slayt (VWR) (En İyi perakende dışında izin Buys) oluşuyordu. Manyetik şerit merkezinde bir delik hazırlık iletilen ışık görülebilmesini sağlar. Diseksiyon pimleri (Güzel Bilimsel Araçlar, WA) eğildi ve ataç yapıştırılmış. Ataç kolayca fileto hazırlık yerinde tutmak için manyetik teyp manevra. Bu tür kayıt çanak sülük ventral sinir kablosu (Muller ve ark, 1981) izole ganglionlar bağlantılarını kullanımı için daha önce tarif edilmiştir . <ol><li> Diseksiyonu plaka sağlam 3. instar larva yerleştirin. Trakea manikür ile artık görünür olana kadar, ventral tarafta larva döndürün. </li><li> Sağlam larva dört iğne yerleştirin. Ağız kanca iki tarafında iki pin ve iki pin spiracles iki tarafına gitmek. </li><li> Tuzlu su ekleyin ve yatay bir kesi başkanı pimleri küçük bir mesafe, daha sonra yatay bir kesi ile uzunlamasına eksen uzunluğu aşağı devam etmektedir. </li><li> Gerçek kalp kısa bir mesafe kesme durdurma. Spiracles gerçek kalbin etrafında ve kenarı boyunca kesin. </li><li> Bir sırt pin kaldırın ve manikür altında kanca. Pin, vücut boşluğuna açık ve açık yaymak için kullanın. Kalan iğneler ile bu işlemi tekrarlayın. </li><li> Trakea veya kalp ya zarar vermemek için dikkatli olmak cesaret çıkarın. Bazı yapıların kalbe bağlı olan ve kaldırılır eğer zarar verebilir dikkat edilmelidir. Bunlar, birkaç yağ organları ve beyin içerir. Cesaret çıkarırken gergin olan kalp görebiliyorsanız, bu yapıyı kaldırmak için çalışırken hemen durdurun. </li></ol> Kalp şimdi açık ve deneysel koşullara maruz kalma için hazırdır. <img src="/files/ftp_upload/1596/1596fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2 kalp doğrudan 3. instar Ventral diseksiyonu. Diseksiyonu bozulmamış ya da merkezi sinir sistemi olmadan doğrudan kalp bileşikler uygulamak için kullanıldıktan sonra sırtında hayvan İğneleme. Küçük ok, kalp ve aorta (aşağıya bakın) transeksiyon dorsal damar çalışmaları için ayrılmış nerede gösterir. Tr, Trakea; Sp, Spiracles, H, Kalp, AO, Aort. Bu diseksiyon tekniği farmakolojik ajanların doğrudan kalbi Drosophila larvaları (Gu ve Singh, 1995) değerlendirmek için kullanılır olmuştur. Diseksiyonu süre 3-6 dk. Hazırlık diseksiyonu sonra 3-5 dakika HL3 tuzlu su ile yıkanan süre dinlenmek için izin verilir. HL3 serum fizyolojik pH 7,2 İK yüksek pH yavaşlatır ve düşük pH (Badre ve ark, 2005) hızlandırır dikkatle kontrol edildi. Gu ve Singh (1995), pH 7.0 kalp farmakolojik analizi için kullanılan ve aynı zamanda muhafaza canlılığı gösterdi. Bu çalışmalar sırasında serum fizyolojik bir behere 21-gauge bir iğne ile, arka arkaya tuzlu su enjekte yoluyla çözüm sallanarak gazlı kaldı. İK ölçmek ya doğrudan gözlemler kullanılabilir veya bir ekran VHS kasetleri veya oynatma için bir dijital kamera görüntüleri kaydedilmiş olabilir. Bir fotodiyot yöntemi (Dasari ve Cooper, 2006) tarif edilmiştir. Maruz kalınan ısı şoku: <ol><li> Larva teşrih. </li><li> Kapağındaki disseke hazırlık yerleştirin. </li><li> Isı su banyosu. </li><li> Bir kapak plakası üzerinde bir sıcaklık probu yüzen banyo sıcaklığı iç kontrol edin. </li><li> Sıcaklığı tatmin edici bir yer hazırlama ve banyo kapak plakası. </li><li> Bırakın ve bir zaman istenilen miktarda hazırlık bittiğinde kaldırmak. </li></ol> Bir her ısı nabız ve sıcaklık, deneyler için gerekli ne kullanabilirsiniz. Elektrikle hızda kalp sürücü: <ol><li> Açık ucuna eklenmiş ve mühürlü bir şırınga kullanarak ve elektrot içine salin (HL3) sinek oda sıcaklığında (21 ° C) çizim bir odak elektrot (çapı yaklaşık 20 mikron) doldurun. O inci, kontrol, manipülatör Mount elektrote tel elektrodun içinde tuzlu su ve stimülatör kapalıdır. </li><li> Diseksiyon mikroskobu, bir Drosophila larva 3. instar larva kalp disseke hazırlık koyun ve bir yere sabitleyin . Topraklama kablosu hazırlanması pimleri ve yanlar ile temasını engellemek için dikkatli hazırlanması tuzlu su içine koyun. </li><li> Mikroskop odak gerektiği şekilde ayarlayarak, kalp üstüne elektrodun ucunun manipülatör kullanın. Bunu başarmak için en iyi yolu, elektrot ucu aşağı doğru hareket ettirerek odaklanmak. </li><li> Ucu pozisyon olarak algılanan, stimülatörü (S9 modeli Çim Aletleri, Quincy, Massachusetts, ABD), 1 ms ve voltaj düşük ayarda 0.5, 2 Hz frekansta süresi açık olmalıdır. Gecikme ayarı 12 ve 14 arasında olmalıdır. </li><li> Kalp ritim gözlemleyerek, frekans yaklaşık 3 Hz açık olmalı ve görülen kalp ritmi stimülatör tarafından üretilen ritmine karşılık kadar gerilim yavaş yavaş artmıştır. Disseke sinek kalp Normalde uyarılmış ritim içsel hızından daha yüksek olduğunda, kalp görüleceği, yaklaşık 2 Hz frekansta atıyor, kalbin normalden daha hızlı bir oranda yenmek için görülecektir. Voltaj hazırlık gereksiz hale hücre hasarı, yüksek gerilim oluşabilir olarak yaklaşık 20 V geçmemek gerekir. Genellikle, bir mesafe ve kalp üzerinde yarattığı mühür bağlı olarak, 2 ve 8 V arasında kalp uyarabilir. </li><li> Maksimum gerilim ulaştı ve hiçbir etkisi görülürse, polarite ters olabilir. Bu da işe yaramazsa, prob, kalp üzerinde daha iyi bir bağlantı kurmak için hareket ettirilmelidir. </li><li> Stimülasyon odaklı bir ritim kurulduktan sonra, ritim, sıklığı ve süresi ayarlarını değiştirerek manipüle edilebilir. 4 Hz üstünde frekansları tetani kalp koyabilirsiniz, ancak bilinen yapılmış olmalıdır. Çeşitli alkoller ve farmakolojik ajanlar eklenebilir ve istenilen ritmi sağlandıktan sonra gap junction üzerindeki etkisi görülebilir. Engellenen gap junction bir akım yapmayın ve yayılır ritim sona erecek. <img src="/files/ftp_upload/1596/1596fig3.jpg" alt="Şekil 3"/> <img border="0" src="/files/ftp_upload/1596/1596fig4tmb.jpg" alt="Şekil 4"/> Lütfen , bu rakamın büyük bir halini görmek <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1596/1596fig4.jpg">için buraya</a> tıklayın . </li></ol> Alan potansiyelleri ölçün: <ol><li> Cam elektrotlar Kimax cam (dış çap: 1.5 mm) yapılır. Cam tüp çekilir ve 10 ila 20 mm arasında değişen iç çaplarda yama ipuçları üretmek için yangın cilalı. </li><li> Elektrot lümen banyo orta ile doludur. Amplifikatör ve kayıt bir bilgisayar satır aşağıda intrasellüler kayıtları için kullanılan aynı. </li><li> Bir &#39;makro-yama&#39; kayıt elektrot lümen (Stühmer ve ark, 1983), kalbin bir bölge üzerinde yer almaktadır . Kas liflerinin spontan pacing odak elektrot ile izlenebilir bir alan potansiyel üretir. </li><li> Bakım hafifçe lümen düşürücü ve kontrol edilmesi gereken kalp her bölge üzerinde yükselterek tarafından verilmesi gerekir. Potansiyelleri bir makro-yama elektrot ile kaydedilir. </li></ol> Doğrudan sayma, kalp hızı ve elektriksel olayların izlenmesi mümkündür. Bu potansiyelleri kayıt sırasında banyo medya değiştirme alanındaki potansiyeller üzerine etkileri eşek uygulanabilir. Intrasellüler potansiyelleri ölçün: 3 M KCl ile dolu keskin intrasellüler elektrot (20 ila 30 mOhm direnç) ile kalp bir bölge kazığa miyositler transmembran potansiyelleri izlemek için. Standart bir kafa sahne ve amplifikatör hücre içi kayıt için kullanılabilir; ancak biz (Moleküler Aygıtlar, Sunnyvale, CA, USA) bir model 2B Axonclamp amplifikatör ve 1 X LU baş sahne. Kalp kuyruk ucuna daha katıdır ve bu daralma bu bölgede zaman çoğunluğu (Badre ve ark, 2005 başlatır yılından beri kalp pili hücreleri ikamet ettiği anlaşılmaktadır; Dasari ve Cooper 2006; Dasari ve arkadaşları, 2007. .)

<ol><li>Ashton, K., Wagoner, A. P., Carrillo, R., Gibson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+trait+loci+for+the+monoamine-related+traits+heart+rate+and+headless+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Quantitative trait loci for the monoamine-related traits heart rate and headless behavior in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 157, 283-294 (2001).</li>
<li>Azpiazu, N., Frasch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tinman+and+Bagpipe%3A+Two+homeo+box+genes+that+determine+cell+fates+in+the+dorsal+mesoderm+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Tinman and Bagpipe: Two homeo box genes that determine cell fates in the dorsal mesoderm of Drosophila.</a> Genes & Development. 7, 1325-1340 (1993).</li>
<li>Badre, N. H., Martin, M. E., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physiological+and+behavioral+effects+of+carbon+dioxide+on+Drosophila+melanogaster+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Mol+Integr+Physiol%22%5BJournal%5D)">The physiological and behavioral effects of carbon dioxide on Drosophila melanogaster larvae.</a> Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 140, 363-376 (2005).</li>
<li>Baker, J. D., McNabb, S. L., Truman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hormonal+coordination+of+behavior+and+physiology+at+adult+ecdysis+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">The hormonal coordination of behavior and physiology at adult ecdysis in Drosophila melanogaster.</a> J. Exp. Biol. 202, 3037-3048 (1999).</li>
<li>Bier, E., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+an+emerging+model+for+cardiac+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Drosophila, an emerging model for cardiac disease.</a> Gene. 342, 1-11 (2004).</li>
<li>Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gene+tinman+is+required+for+specification+of+the+heart+and+visceral+muscles+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The gene tinman is required for specification of the heart and visceral muscles in Drosophila.</a> Development. 118, 719-729 (1993).</li>
<li>Bodmer, R., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+homeobox-containing+gene%2C+msh-2%2C+is+transiently+expressed+early+during+mesoderm+formation+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A new homeobox-containing gene, msh-2, is transiently expressed early during mesoderm formation of Drosophila.</a> Development. 110, 661-669 (1990).</li>
<li>Cooper, A. S., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+activity+of+Drosophila+larvae%3A+Impedance+%26+video+microscopy+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Drosophila+Information+Service%22%5BJournal%5D)">Monitoring activity of Drosophila larvae: Impedance & video microscopy measures.</a> Drosophila Information Service. 87, 85-87 (2004).</li>
<li>Dasari, S., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+influence+of+serotonin+on+the+larval+heart+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+B%22%5BJournal%5D)">Direct influence of serotonin on the larval heart of Drosophila melanogaster.</a> J. Comp. Physiol. B. 176, 349-357 (2006).</li>
<li>Dasari, S., Viele, K., Turner, A. C., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+p-CPA+and+MDMA+on+physiology%2C+development+and+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22European+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Influence of p-CPA and MDMA on physiology, development and behavior in Drosophila melanogaster.</a> European J. Neurosci. 26, 424-438 (2007).</li>
<li>Dowse, H., Ringo, J., Power, J., Johnson, E., Kinney, K., White, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+congenital+heart+defect+in+Drosophila+caused+by+an+action-potential+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">A congenital heart defect in Drosophila caused by an action-potential mutation.</a> J. Neurogenetics. 10, 153-168 (1995).</li>
<li>Dulcis, D., Levine, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamatergic+innervation+of+the+heart+initiates+retrograde+contractions+in+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glutamatergic innervation of the heart initiates retrograde contractions in adult Drosophila melanogaster.</a> J. Neurosci. 25, 271-280 (2005).</li>
<li>Feng, Y., Ueda, A., Wu, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+minimal+hemolymph-like+solution%2C+HL3.1%2C+for+physiological+recordings+at+the+neuromuscular+junctions+of+normal+and+mutant+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">A modified minimal hemolymph-like solution, HL3.1, for physiological recordings at the neuromuscular junctions of normal and mutant Drosophila larvae.</a> J. Neurogenetics. 18, 377-402 (2004).</li>
<li>Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+ion+channel+dysfunction+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of ion channel dysfunction in Drosophila.</a> Kidney International. 3, 766-771 (2000).</li>
<li>GG, G. u <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+analysis+of+heartbeat+in%5BTitle%5D)+AND+%22Drosophila.+J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Pharmacological analysis of heartbeat in.</a> Drosophila. J. Neurobiol. 28, 269-280 (1995).</li>
<li>He, B., Adler, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+mechanisms+in+the+development+of+the+Drosophila+arista%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">Cellular mechanisms in the development of the Drosophila arista.</a> Mechanisms of Development. 104, 69-78 (2001).</li>
<li>Johnson, E., Ringo, J., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+Drosophila+heartbeat+by+neurotransmitters%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+B%22%5BJournal%5D)">Modulation of Drosophila heartbeat by neurotransmitters.</a> J. Comp. Physiol. B. 167, 89-97 (1997).</li>
<li>Johnson, E., Ringo, J., Bray, N., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+pharmacological+identification+of+ion+channels+central+to+the+Drosophila+cardiac+pacemaker%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">Genetic and pharmacological identification of ion channels central to the Drosophila cardiac pacemaker.</a> J. Neurogenetics. 12, 1-24 (1998).</li>
<li>Johnson, E., Ringo, J., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Native+and+heterologous+neuropeptides+are+cardioactive+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Native and heterologous neuropeptides are cardioactive in Drosophila melanogaster.</a> J. Insect Physiol. 1, 1229-1236 (2000).</li>
<li>Johnson, E., Sherry, T., Ringo, J., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+the+cardiac+pacemaker+of+Drosophila%3A+cellular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+B%2C+Biochem.%2C+Systemic%2C+Environmental+Physiol%22%5BJournal%5D)">Modulation of the cardiac pacemaker of Drosophila: cellular mechanisms.</a> J. Comp. Physiol. B, Biochem., Systemic, Environmental Physiol. 172, 227-236 (2002).</li>
<li>Lewis, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+standard+food+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Drosophila+Inform.+Serv%22%5BJournal%5D)">A new standard food medium.</a> Drosophila Inform. Serv. 34, 117-117 (1960).</li>
<li>Miller, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+circulation+in+insects%5BTitle%5D)+AND+%22General+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Control of circulation in insects.</a> General Pharmacol. 29, 23-38 (1997).</li>
<li>Molina, M. R., Cripps, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ostia%2C+the+inflow+tracts+of+the+Drosophila+heart%2C+develop+from+a+genetically+distinct+subset+of+cardial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">Ostia, the inflow tracts of the Drosophila heart, develop from a genetically distinct subset of cardial cells.</a> Mechanisms of Development. 118, 51-59 (2001).</li>
<li>Muller, K. J., Nicholls, J. G., Stent, G. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMuller%2C+KJ+%22Neurobiology+of+the+Leech%22">Neurobiology of the Leech</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. 254-254 (1981).</li>
<li>Nichols, R., Kaminski, S., Walling, E., Zornik, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulating+the+activity+of+a+cardioacceleratory+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Regulating the activity of a cardioacceleratory peptide.</a> Peptides. 20, 1153-1158 (1999).</li>
<li>Ocorr, K., Akasaka, T., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+cardiac+disease+model+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Ageing+and+Development%22%5BJournal%5D)">Age-related cardiac disease model of Drosophila.</a> Mechanisms of Ageing and Development. 128, 112-116 (2007a).</li>
<li>Ocorr, K. A., Crawley, T., Gibson, G., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+variation+for+cardiac+dysfunction+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Genetic variation for cardiac dysfunction in Drosophila.</a> PLoS ONE. 2, e601-e601 (2007).</li>
<li>Papaefthmiou, C., Theophilidis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+method+for+recording+the+electrical+activity+of+the+isolated+heart+of+the+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Developmental+Biol.+Animal%22%5BJournal%5D)">An in vitro method for recording the electrical activity of the isolated heart of the adult Drosophila melanogaster.</a> In Vitro Cellular & Developmental Biol. Animal. 37, 445-449 (2001).</li>
<li>Peron, S., Zordan, M. A., Magnabosco, A., Reggiani, C., Megighian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+action+potential+to+contraction%3A+Neural+control+and+excitation-contraction+coupling+in+larval+muscles+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.Physiol.+A%3A+Molecular+%26+Integrative+Physiol%22%5BJournal%5D)">From action potential to contraction: Neural control and excitation-contraction coupling in larval muscles of Drosophila.</a> Comp. Biochem.Physiol. A: Molecular & Integrative Physiol. 154, 173-183 (2009).</li>
<li>Ponzielli, R., Astier, M., Chartier, A., Gallet, A., Therond, P., Semeriva, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+tube+patterning+in+Drosophila+requires+integration+of+axial+and+segmental+information+provided+by+the+Bithorax+Complex+genes+and+hedgehog+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Develop%22%5BJournal%5D)">Heart tube patterning in Drosophila requires integration of axial and segmental information provided by the Bithorax Complex genes and hedgehog signaling.</a> Develop. 129, 4509-4521 (2002).</li>
<li>Sl ma, K., Farkas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heartbeat+patterns+during+the+postembryonic+development+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Heartbeat patterns during the postembryonic development of Drosophila melanogaster.</a> J. Insect Physiol. 51, 489-503 (2005).</li>
<li>St hmer, W., Roberts, W. S., Almers, W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSt+hmer%2C+W+%22Single+channel+recordings%22">Single channel recordings</a>. Sakmann, B., Neher, E. The loose patch clamp, Plenum Press. New York. 123-132 (1983).</li>
<li>Wessells, R. J., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+assays+for+heart+function+mutants+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Screening assays for heart function mutants in Drosophila.</a> Biotechniques. 37, 58-66 (2004).</li>
<li>Zornik, E., Paisley, K., Nichols, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+transmitters+and+a+peptide+modulate+Drosophila+heart+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Neural transmitters and a peptide modulate Drosophila heart rate.</a> Peptides. 20, 45-51 (1999).</li>
</ol>

<ol><li> Diseksiyon araçları: Güzel # 5 cımbız ve (Güzel Bilim Araçları (USA), Inc, 373-G Vintage Park Drive, Foster City, CA 94.404-1139 elde edilen) ince makas </li><li> Diseksiyon ve kalp hızı sayma zoom fonksiyonu ile mikroskop Diseksiyon. Bu kalp odak uyarılması için de gereklidir. </li><li> Ekstrasellüler ve intrasellüler kayıtları için dik hedefleri (4 x ve 20X) ile bileşik mikroskop kullanılır. Standart hücre içi amplifikatör ve A / D kurulu bir bilgisayar line kayıt için. Elektrik sinyalleri, bir PowerLab/4s arayüzü (ADInstruments Avustralya) satır kaydedilir. Grafik veya Kapsam adlı ADInstruments standart yazılım kullanın. </li><li> Kimyasallar: Tüm tuzlu su kimyasalları, Sigma kimya şirketi (St. Louis, MO) elde edilir. </li><li> Intrasellüler kayıtları için cam kapiller tüp (katalog # 30-31-0 FHC, Brunswick, ME, 04011, USA) ve odak macropatch kayıt ve biz Kimax-51 kullanan uyarıcı elektrotlar, Kimble Ürünler Sanat kullanın. 100mm No 34.502, ID 0.8-1.1mm, uzunluk. Intrasellüler elektrot 20 ila 30 mOhm arasında bir direnç olmalıdır. Macropatch elektrot sonra ince uçlu bir elektrot çektirmenin yapıldı cam ucu kopan tarafından yaptırılmıştır. Kırık kapalı ucu çapı 20μM hakkında bir temiz dik sonu olması gerekir. Ucu sonra odak ekstraselüler kayıt için 10μM iç çapı cilalı ısı. Kalp sürücü için uyarıcı elektrot çapı 20-50 hakkında mcM son bir ucu kullanın. Elektrot mili aşamalı bir bend ile yaklaşık 45 derecelik viraj neden bir gözü üzerinde çalışır. Bu hazırlık için başka bir 45 derece üretecek mikro-manipülatör ile açı olarak kalp tüpü üzerinde düz veya dik elektrot lümen üretir. </li></ol>

larvaların olarak izlenmesi kalp fonksiyonu drosophila melanogaster fizyolojik Çalışmaları

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

Biz larva kardiyak fonksiyonu kaydetmek için çeşitli yöntemler mevcut<em&gt; Drosophila</em&gt;. Yaklaşımlar, kalp hızı dizginlenmemiş ve ölçülü bütün larva ölçülecek izin verir. Kalp çevresi doğrudan kontrolü için başka bir yaklaşım disseke larvaları ve iç organların çıkarılması istenilen bileşikler kalp banyo için kullanır. Maruz kalan kalp de membran potansiyelleri miyositler ve kalp tüpü boyunca elektrik iletimi için oluşturulan iyonik akımların fikir verebilir izlenebilir sağlar. Bu yaklaşımlar tartışılmıştır gelecek deneyler için çeşitli avantaj ve dezavantajları var. Larva kalp hazırlık yanı sıra ek bir model sunar<em&gt; Drosophila</em&gt; Iskelet NMJ hücresel fonksiyonları, hücre içi kalsiyum yönetmelik rolünü araştırmak. Öğrenme, çeşitli türlerde miyositler eylem potansiyelleri şekillendiren altta yatan iyonik akımlar hakkında memelilerin çeşitli hastalıklar için sorumlu olan spesifik genlerin ilişkili bilinen iyonik işlev bozuklukları ele almak için umut olabilir.

Larva kalp fonksiyonları izlemek için çeşitli yollar mevcut<em&gt; Drosophila</em&gt; Gap junction, iyon kanal mutasyonlar, pacemaker aktivitesi modülasyonu ve farmakolojik çalışmalar fonksiyonu ile ilgili sorular değerlendirmek için.

Larvaların olarak izlenmesi Kalp Fonksiyonu Drosophila melanogaster Fizyolojik Çalışmaları

Larva Drosophila'da kardiyak fonksiyonları kaydetmek için çeşitli yöntemler sunuyoruz. Bu yaklaşımlar, kısıtlanmamış ve ... durumlarındaki kalp hızının ölçülmesine olanak tanır.

Drosophila, kalp gelişimi, fonksiyonu ve temel pacemaker aktivitesinin incelenmesi açısından genetik olarak caziptir. Bu prosedür, hem sağlam hem de diseke edilmiş larva preparatlarının nasıl hazırlanacağını ve kalp hızının nasıl izleneceğini göstermektedir. Diseke edilmiş preparat, iyon kanalı fonksiyonlarına daha fazla erişmek için hücre dışı veya hücre içi potansiyel kayıtlarının alınmasına da olanak tanır.Merhaba, ben Kentucky Üniversitesi Biyoloji Bölümü'nden öğretim üyesi Robin Cooper. Bugün öğrencilerim Ann Cooper, Kyla Ryman, Matt Ward ve Easter Boku, Drosophila larvalarında kalp hızını izlemek için kullanılan çeşitli prosedürleri size gösterecekler. Aşağıdaki kısıtlanmamış yönteme, larvaların tek bir odak düzleminde görüntülendiği için karınca çiftliği adı verilmektedir.Larvaların en iyi şekilde görselleştirilmesi için, 1 cm x 0,5 cm'lik bir dikdörtgen alan üzerinde en iyi uzamsal çözünürlük ve büyütmeyi elde etmek amacıyla 2x taban objektifli ve 0,5x tüp objektifli bir diseksiyon mikroskobu kullanın. Fotoğraflar ve videolar, oküler aparatına takılı bir kamera aracılığıyla kaydedilebilir. Bu yönteme başlamak için, bir larvayı ince bir yem tabakasıyla birlikte iki lam arasında sıkıştırın.Lamlar, dört yanındaki plastik ara parçalarıyla 1 ila 1,5 milimetre mesafe ile tutulur. Larvanın başının aşağıya doğru bakmasını sağlamak için preparatı birkaç dakika boyunca 20 ile 45 derece arasında eğik tutun. Kalbin atışını izlemek için, kalbin veya iki trakeanın en iyi kontrastını sağlayacak şekilde mikroskop aynasını ayarlayın.Yapıştırıcı yöntemi, larvaları bir lam üzerinde sabitlemek için kullanılan kalıcı bir mount yöntemidir. Yapıştırıcı yöntemine başlamak için, temiz bir lamel camı bir lamın üzerine yerleştirin. Lamel camının bir köşesine küçük bir damla hızlı yapıştırıcı sürün.Ardından, larvaları suyla durulayın. Fazla yemi uzaklaştırmak için sıvıyı bir peçete veya kağıt havlu köşesiyle emdirin. Larva tamamen durulandıktan sonra, temiz bir pensle nazikçe alın ve mikroskop altında lam üzerine, örtü camından uzağa, karnı üzerine gelecek şekilde yerleştirin.Midenin üzerinde ince siyah kıllarla birlikte seyrek yatay oluklar bulunacaktır. Larvaların sırtı yukarı bakmalıdır ve trakealar olan iki paralel şerit şeklinde belirgin hatlar içerir. Yalnızca yapıştırıcıyı tutmak için ayrılmış ikinci bir pens seti kullanarak, lamın ucundaki damladan küçük bir miktar alın ve bunu karşı taraftaki köşeye yerleştirin.Cımbızın ucunu kapatmaya yetecek kadar küçük bir miktar kullanın. Hayvanı alın ve karnı siyah ağza bakacak şekilde yapıştırıcının üzerine yerleştirerek sabit kaldığından emin olun.Kancalar, lamın kenarında veya kenarına yakın olmalı, ağız kancaları ve kahverengi spiral glüye temas etmemelidir. Larvayı düzleştirmek için üzerine hafifçe bastırın.Bir test maddesi uygulamak için, bir şırınga yardımıyla larvaların başının yakınına küçük damlacıklar damlatmak en uygun yöntemdir. Spiral yapıların bir dakika içindeki atım sayısını sayarak kalp hızını gözlemleyin. Daha uzun süreli gözlemler için larvaları bulundukları yerde besleyebilir ve dehidrasyonu önlemek için nemlendirebilirsiniz; mikroskop altında kullanılabilir bir diseksiyon plakası hazırlamak için, bir manyetik bant parçasının merkezine skalpel ile iki santimetre çapında bir delik açın ve bunu bir lam üzerine yapıştırın.Daha kolay iğneleme yapmak için, bükülüp ataçlara yapıştırılmış diseksiyon iğneleri kullanın. Diseksiyon sırasında, sağlam bir üçüncü instar larvayı diseksiyon plakasına yerleştirin. Sırt kısmı yukarı bakacak şekilde yerleştirildiğinde, trakealar kütikülden görünür olmalıdır.Larvaların ağız kancalarının her iki yanına iki iğne ve spirallerin her iki yanına diğer iki iğneyi yerleştirin. Ardından, larvaları nemli tutmak için salin ekleyin. Daha sonra, kodle ucunun yanından yatay bir insizyon yapın ve bunu, hayvanın başına doğru spirallerin yanından devam eden boylamsal bir kesikle takip edin.Bir dorsal pini kaldırın ve kütikülün altına geçirin. Yaymak için pini kullanın. Vücut boşluğunu açın.Diğer üç iğne ile işlemi tekrarlayın. Hayvan iğnelenerek açıldıktan sonra, trakeaya veya kalbe zarar vermemeye dikkat ederek iç organları çıkarın. Beyin ve bazı yağ cisimcikleri dahil bazı yapılar kalbe bağlıdır ve çıkarıldıklarında kalbe zarar verebilirler.Diseksiyondan sonra preparatın HL three salin banyosunda üç ila beş dakika boyunca dinlenmesine izin verin; hücre içi ve alan kayıtları, farmakolojik ajanlar doğrudan kalbe uygulanırken bu preparatta gerçekleştirilir. Bu disseksiyon adımının toplam süresi üç ila altı dakikadır. Elektriksel stimülasyon (pacing) gerçekleştirmek için öncelikle fokal elektrotlar hazırlanmalıdır; fokal bir elektrot oluşturmak için cam bir elektrodu, uç kısmını ateşle parlatmak (fire polish) amacıyla bir ısıtıcı eleman üzerinden geçirin ve yaklaşık 45 derecelik kademeli bir büküm yapın, ardından oda sıcaklığındaki HL three salin ile doldurulmuş fokal elektrodu, ucu aşağı bakacak şekilde manipülatöre monte edin.Stimülatör telinin elektrot içindeki saline temas ettiğinden ve stimülatörün kapalı olduğundan emin olun. Mikroskop üzerine yeni bir kalp diseksiyon preparatı sabitleyin. Topraklama telini saline yerleştirin.Pinlere dokunmamaya veya preparasyonu bozmamaya dikkat edin. Manipülatörü kullanarak elektrodu salin çözeltisinin içine indirirken odağınızı elektrot üzerinde tutun. Salin çözeltisinin içine girdikten sonra, elektrot ucunu lümeni kalbe düz olacak şekilde konumlandırın ve kalbe hafifçe temas ettirin.Elektrot yerleştirildikten sonra, stimülatör frekansını iki hertz'e, voltajı ise en düşük ayara getirin. Stimülatörü açın. Frekansı yaklaşık üç hertz'e ayarlayın ve kalp atışı hızı stimülatörün ritmiyle eşleşene kadar voltajı yavaşça artırın.Ritim artık stimülatör aracılığıyla manipüle edilebilir. Kontraksiyonu veya elektriksel iletiyi etkileyip etkilemediklerini görmek için bileşikler eklenebilir. Alan potansiyeli kayıtları gerçekleştirmek için, bir makro patch kayıt elektrodunu banyo ortamıyla doldurun ve bunu bileşik bir mikroskop üzerindeki bir manipülatöre monte edin.Elektrodu bir amplifikatöre ve kayıt düzeneğine bağlayın. Mikroskoba sabitlenmiş bir diseksiyon preparatının kalbi üzerine, elektrodun lümenini indirmek için manipülatörü kullanın. Elektrot ucuyla kalbe çok hafifçe dokunun.Kalbin başka bir bölgesinden alan potansiyellerini kaydetmek için artık alan kayıtları yapılabilir. Elektrot ucunu nazikçe kaldırın ve manipülatör ile yeni bir bölgeye taşıyın, ardından uç alan potansiyeli kayıtlarını tekrarlayın. Larval miyositlerin transmembran potansiyellerini ölçmek için kalpteki elektriksel sinyallerin hızının ve süresinin hassas şekilde izlenmesine izin verin.Öncelikle, üç molar potasyum klorür ile doldurulmuş keskin bir elektrodun lümeninin, dikeyden yaklaşık 45 derecelik bir açıyla kalbe karşı düz olduğundan emin olun. Doğru şekilde konumlandırıldıktan sonra, elektrodun ucuyla kalbe nazikçe dokunun ve ucu bir hücreye doğru hafifçe vurun. Elektrot kırılmamışsa tekrar kullanılabilir.Hücre içi kayıtlar, aksiyon potansiyelinin iyonik temelini ve potansiyellerin karakteristik şekillerini ölçerek iyon kanalı mutasyonlarının veya kanal modülatörlerinin etkilerini incelemeye olanak tanır. Böylece size kalp kayıtlarının nasıl yapılacağını, ayrıca hücre içi ve alan potansiyellerinin nasıl alınacağını göstermiş olduk. Bu teknikleri, farmakolojik manipülasyonların ve gen değişikliklerinin yanı sıra kalp değişimlerini incelemek için kullanabilirsiniz.Bu prosedür uygulanırken, kalbe bağlı olan ilgili bir yapının çekilmemesi ve odak elektrodu ile çok sert bastırılmaması önemlidir. Ayrıca yapıştırma yönteminde, ağzın veya kürenin yapışarak kapanmamasına dikkat edin. İşlem bu şekildedir.İzlediğiniz için teşekkür eder, deneylerinizde başarılar dileriz.

monitoring-heart-function-larval-drosophila-melanogaster-for

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Yetişkin Drosophila melanogaster Locomotion Yüksek Çözünürlüklü Video Takip

Elektrofizyolojik Kayıt Drosophila Embriyo

Larva ve yetişkin kalpte görüntülenmesi için gerekli...

Dayak Kalp görselleştirme Drosophila</em

Biz yüksek hızlı optik kayıtları analiz etmek için geliştirilen bir Yarı-otomatik Optik Heartbeat Analiz yöntemi...

Küçük Kalpler Yarı-otomatik Optik Heartbeat Analizi

Bu rapor, TriKinetics Drosophila Activity Monitor kullanılarak Drosophila larva aktivitesini ölçmek için bir yöntemi açıklar. Cihaz, 16 adede kadar bireysel hayvanın hareketlerini algılamak için kızılötesi ışınlar kullanır. Veriler, oranlar ve hayvanların tahlil odaları içindeki konumları dahil olmak üzere hareket parametrelerini temsil etmek için analiz edilebilir.

Larvaların Faaliyet Ölçümü<em&gt; Drosophila</em&gt; Activity Monitor

Burada, Drosophila'yı farklı gelişim aşamalarında hazırlamak ve özel bir optik tutarlılık mikroskobu (OCM) sistemi kullanarak Drosophila kalp atışlarının uzunlamasına optik görüntülemesini gerçekleştirmek için deneysel protokoller açıklanmaktadır. Kardiyak morfolojik ve dinamik değişiklikler, OCM görüntülerinden kalbin yapısal ve fonksiyonel parametrelerinin analiz edilmesiyle kantitatif olarak karakterize edilebilir.

Drosophila Hazırlama ve Optik Koherens Mikroskobu Kullanımı In Vivo Kalp Fonksiyonu Boyuna Görüntüleme (OCM)

Hipoksi normal atmosferik oksijen düzeyleri altında karşılaşan Drosophila melanogaster larva tanımlamak için basit bir tahlil protokolünü açıklar. Bu iletişim kuralı tembellik veya yavaş büyüme gibi örtüşen fenotipleri göstermek başka mutantlar dan ayırt edici olmak hipoksik larva sağlar.

Bir oyuk/tünel tahlil için algılama hipoksi Drosophila melanogaster larva içinde

Bu iletişim kuralı maliyet-etkin ve uygun farmakolojik ajanları, sinirsel proteinlerin genetik mutasyonlar test etkinleştirmek için Drosophila melanogaster merkezi sinir sistemi azalan elektriksel aktivitesinin kaydetmek için bir yöntem açıklar, ve/veya keşfedilmemiş fizyolojik yolları rolü.

Üçüncü-biçim Drosophila Melanogaster merkezi sinir sisteminin etkinliğinin elektrofizyolojik kayıt

Mevcut protokol, OCT görüntüleme ve optogenetik kalp pacing için kalpte eNpHR2.0 veya ReaChR opsinlerini eksprese eden Drosophila melanogaster'in oluşumunu tanımlamaktadır. Farklı gelişim aşamalarında canlı hayvanlarda restore edilebilir kalp durması, bradikardi ve taşikardi simülasyonu da dahil olmak üzere Drosophila OCT görüntüleme ve kalp atışı modülasyonu için ayrıntılı talimatlar bildirilmiştir.

Kardiyak Fonksiyonun Görüntülenmesi ve Optogenetik Kontrolü için Drosophila melanogaster Modellerinin Geliştirilmesi

Protokol, geleneksel memeli modellerine bir alternatif olarak lokomotor disfonksiyonun nicelleştirilmesi yoluyla meyve sineğindeki nörotoksisiteyi değerlendirmek için yüksek verimli, uygun maliyetli bir yöntem sunar. Farmasötik bileşiklerin, çevresel ajanların veya genetik modifikasyonların nörotoksik etkilerini hassas, tekrarlanabilir ve etik açıdan uygun bir model kullanarak değerlendirmeyi amaçlar.

Drosophila melanogaster'de Lokomotor Disfonksiyonun Nörotoksisite için Bir Okuma Olarak Davranışsal Analizi

Bu protokol, Drosophila melanogaster'de stres kaynaklı davranış değişikliklerini değerlendirmek için bir çerçeve sağlar. Tamamlayıcı testlerin birleştirilmesi, bireysel sinekler için aktivite, keşif ve karar verme süreçlerinin nicelendirilmesini sağlar. Yaklaşım esnektir ve stres biyolojisi, metabolizması ve nörodavranışsal fonksiyonları inceleyen geniş bir çalışma yelpazesine uyarlanabilir.

Drosophila melanogaster'de Stres Kaynaklı Depresyona Benzer Durumların Çok Modlu Davranışsal Fenotiplenmesi

Öğrenin Drosophila melanogaster larvalarında kalp fonksiyonu izleme yöntemlerini. Bu teknik, bütün ve disseke preparatlarla kalp hızı ölçümü, iyon kanalı mutasyonları ve farmakolojik müdahaleler için kullanılır.

Larvaların olarak izlenmesi Kalp Fonksiyonu Drosophila melanogaster Fizyolojik Çalışmaları

Daha fazla video keşfet