Omurilik Elektrofizyoloji
18 Ocak 2010
Elektrofizyolojik çalışmalar için yenidoğan fare omurilik izolasyonu bir gösteri.
Tamam. Merhaba, benim adım Alan Meyer ve Salk Enstitüsü'ndeki faf Laboratuvarı'nda araştırma asistanıyım. Bugün size, bir farenin omuriliğini izole etmek için ventral laminektomi işleminin nasıl gerçekleştirileceğini ve ayrıca, nöral aktivitesini kaydetmek için omuriliğin bir elektroda nasıl bağlanacağını göstereceğim. Omurilik için iki solüsyon hazırlamanız gerekecektir; biri diseksiyon için, diğeri ise kayıt banyosu içindir.
İki çözelti arasındaki tek fark kalsiyum klorür konsantrasyonu olacaktır. Öncelikle 10 X-A-C-S-F çözeltisi hazırlamanız gerekecektir. Bu işlem için aşağıda listelenen reaktifler gereklidir.
İşleme, bir litrelik balon jojeye 100 mililitre 10 X-A-C-S-F ekleyerek başlayın. Ardından, taşma olmayacak şekilde boşluk bırakarak balon jojeyi su ile doldurun. Gazlandığında, çözeltiler %5CO2 ve %95O2 gaz konsantrasyonuna sahip olur.
pH değerini düşürmek ve çözeltiyi oksijenlendirmek için bir mililitre bir molar magnezyum sülfat ekleyin. Ardından, diseksiyon çözeltisine bir mililitre bir molar kalsiyum klorür çözeltisi ekleyin ve kayıt çözeltisine iki mililitre bir molar kalsiyum klorür ekleyin. Bu deneylerde E 16.5 ile P 4 yaşları arasındaki fareler kullanılabilir.
Fareyi önce keskin bir makasla hızlıca başını kopararak diseke etmeye başlayın. Ardından, kuyruğa ulaşana kadar ventral orta hat boyunca kesin. Daha sonra pens yardımıyla farenin iç organlarını çıkarın ve A CSF solüsyonu ile durulayın.
Diseksiyonu gerçekleştirmek için bir milimolar kalsiyum klorür A CSF kullanın. Fareyi diseksiyon kabına yerleştirin ve dört patisine ve kuyruk tabanına birer iğne saplayarak sabitleyin. Bu bölümdeki amacımız, kırmızı noktalı çizgi boyunca keserek omuriliği izole etmek ve omurga kolonunu omuriliği çevreleyen laminadan ayırmak olacaktır.
Bu işlem, omuriliğin açığa çıkarılmasını sağlayacaktır. Ardından, meningeleri ve spinal kökleri kesip çıkararak omuriliği serbest bırakmak için hat boyunca ilerleyin. Omurga kolonunu bulun; bir elinizdeki pensle omurga kolonunu sıkıca tutarken diğer elinizle küçük makas kullanın.
Omuriliği çıkarmak için makasları düşük bir açıda tutun. Omuriliğin makas uçlarıyla delinmesini önlemek için şimdi omuriliği diseke edeceğiz. Kırmızı hat boyunca ilerleyerek meningeleri ve spinal kökleri kesin.
Omuriliği çıkarmak için, kordun her iki yanından kesim yapabilir ve ardından ventral orta hat boyunca kesebilirsiniz. Omuriliği delmemek için makasın düşük bir açıda tutulması önemlidir. Kökleri omuriliğe çok yakın yerden kesmekten kaçınmak önemlidir.
Ardından, omuriliği kayıt banyosuna aktarın ve elektrotları spinal köklere bağlayın. Elektrodu kökün yakınına yerleştirin. Daha sonra vakum yardımıyla siniri nazikçe elektrodun içine çekin.
İzlediğiniz için teşekkür ederiz; bu videonun gelecekteki deneylerinizde faydalı olacağını umuyoruz.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu makale, elektrofizyolojik çalışmalar için neonatal fare omuriliğinin izole edilmesini göstermektedir. Prosedür, ventral laminektomi gerçekleştirilmesini ve nöral aktivite kaydı için omuriliğin bir elektroda bağlanmasını içerir.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- Nörobilim
- Elektrofizyoloji
Arka Plan
- Omuriliğin izole edilmesi, nöral aktivitenin incelenmesi için kritik öneme sahiptir.
- Elektrofizyolojik teknikler, nöral sinyallerin ölçülmesine olanak tanır.
- Kalsiyum klorür konsantrasyonu, diseksiyon ve kayıt çözeltileri için önemlidir.
Çalışmanın Amacı
- Yenidoğan fare omuriliğini izole etme tekniğini göstermek.
- Omuriliğin bir elektroda nasıl takılacağını göstermek.
- Nöral aktivite kaydını kolaylaştırmak.
Kullanılan Yöntemler
- Omurilik izolasyonu için ventral laminektomi prosedürü.
- Diseksiyon ve kayıt çözeltilerinin hazırlanması.
- Nöral aktivite kaydı için elektrotların kullanımı.
Ana Sonuçlar
- Yenidoğan farelerden spinal kordun başarılı bir şekilde izole edilmesi.
- Spinal kordun elektrotlara etkili bir şekilde sabitlenmesi.
- Nöral aktivitenin kayıt altına alındığının gösterilmesi.
Sonuçlar
- Bu teknik, elektrofizyolojik çalışmalar için uygundur.
- Başarılı sonuçlar elde etmek için çözeltilerin hazırlanması kritik öneme sahiptir.
- Bu yöntem, çeşitli nörobilim araştırma bağlamlarında uygulanabilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Sektörel Uygulama ve Önem
Bu protokol, nöromüsküler bozuklukların hedef doğrulamasında mekanistik risklerin azaltılmasını desteklemek amacıyla, merkezi patern oluşturucu devrelerin elektrofizyolojik değerlendirmesi için neonatal fare omuriliğinin izolasyonunu sağlar. Yöntem, lokomotor ağ fonksiyonlarını sorgulamak ve bileşiklerin nöral sinyalizasyon üzerindeki etkilerini değerlendirmek için hastalığa özgü bir sistem sunar. Doğrulanmış bir preklinik modelden elektrofizyolojik çıktıların kantitatif ölçümüne olanak tanıyarak, erken keşif aşamasındaki öngörü güvenilirliğini artırır.
Biyofarma Ar-Ge'sinde Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Bilimsel Değer: Lokomotor devre gelişimi ve nöromüsküler hedef etkileşimi ile ilgili terapötik hipotezlerin sorgulanmasına olanak tanır.
- Operasyonel Değer: Tutarlı elektrofizyolojik kayıtlar için spinal kord dokusunun tekrarlanabilir bir hazırlığını sağlar.
Tarama ve Assay Geliştirme
- Bilimsel Değer: Kontrollü diseksiyon çözeltileri ve kayıt banyosu stabilitesi için belirlenmiş kalsiyum klorür konsantrasyonları aracılığıyla analiz standardizasyonunu destekler.
- Operasyonel Değer: Sonraki bileşik tarama ve sinyal tespit iş akışları için valide edilmiş biyolojik sistemlerin hazırlanmasını kolaylaştırır.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Bilimsel Değer: Preklinik modellerde lokomotor fenotiplerle uyumlu nöral aktivite değişikliklerini değerlendirmek için hastalıkla ilgili bir sistem sunar.
- Operasyonel Değer: Ölçülebilir elektrofizyolojik veriler sağlayarak keşif aşamasından preklinik doğrulamaya kadar süreklilik imkanı tanır.
İş Akışı ve Boru Hattı Entegrasyonu
Bu yöntem, nöromüsküler hedefler için hipotez testlerini ve yolak netleştirmelerini destekleyen izole omurilik preparatları sağlayarak erken keşif iş akışlarına entegre olur.
- Keşif Biyolojisi: Merkezi patern jeneratörü fonksiyonunun ve nöral devre modülasyonunun hipotez testlerini destekler.
- Tarama: Belirlenmiş iyonik kompozisyona sahip standartlaştırılmış diseksiyon ve kayıt çözümleri ile assay hazırlığına olanak tanır.
- Analitik: Deneysel koşulları karşılaştırmak için ventral sinir köklerinden kantitatif elektrofizyolojik ölçümler üretir.
- Translasyonel Araştırma: Lokomotorla ilgili hedef modülasyonu için ölçülebilir bir çıktı sağlayarak preklinik süreklilikle bağlantı kurar.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Birden fazla nöromüsküler keşif programı genelinde uygulanabilir, yeniden kullanılabilir bir nöral doku hazırlama platformu oluşturur.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Lokomotor devre fonksiyonundaki mekanistik belirsizliği azaltarak hedef doğrulamadaki öngörü güvenini artırır.
- Operasyonel Değer: Tanımlanmış çözelti hazırlama ve diseksiyon teknikleri aracılığıyla standardizasyon ve tekrarlanabilirlik sağlar.
- Stratejik Değer: Bileşiklerin nöral sinyalizasyon üzerindeki etkilerinin erken değerlendirilmesine olanak tanıyarak devam/durdur kararlarını iyileştirir.
- Portföy Etkisi: Elektrofizyolojik yanıt profillerine dayanarak nöromüsküler hedeflerin riske göre ayarlanmış önceliklendirmesini destekler.
Uygulama Hususları
- Yenidoğan fare diseksiyonu ve elektrofizyolojik kayıt tekniklerinde uzmanlık gerektirir.
- Vakum elektrot takılması ve nöral sinyal kazanımı için kullanılan enstrümantasyona bağımlıdır.
- Diseksiyon ve kayıt solüsyonu hazırlığının ekipler arasında standardize edilmesini gerektirir.
- Farklı gelişim aşamalarına veya hastalık modellerine uygulandığında adaptasyon değerlendirmeleri gerektirir.
- Kayıt sırasında doku canlılığını korumak için kalsiyum klorür konsantrasyonunun hassas kontrolü gerekliliği ile sınırlıdır.
