Name: Böcekler Tek Sensillum Kayıtlar Drosophila melanogaster Ve Anofel gambiae /em (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-02-17T14:25:00.000+00:00
Duration: 13 min 27 s
Description: Öğrenin tek sensillum kayıtları yöntemini Drosophila melanogaster ve Anopheles gambiae'de koku duyu nöronlarının elektrofizyolojik yanıtlarını ölçmek için. Bu teknik böcek nörobiyolojisinde koku işleme mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Koku dilüsyonları <ol><li> En koku parafin yağı çözünür. Ancak, DMSO veya etanol aynı zamanda özellikle kokuları için alternatif çözücüler olarak kullanılabilir. Cam şişe saf koku:: Uygun dilüsyonları (v v hacmi örneğin 01:10 hacmi) hazırlayın. Çoğu koku dilüsyonları oda sıcaklığında, ancak yüksek uçucu bileşikler için, bir haftalık çalışma dilüsyonları yapmak daha iyidir. Her sensillum farklı bir konsantrasyon aralığında farklı kokular yanıt verir. Drosophila, yararlı bir look-up tablosu için 6, 7, belirli bir sensillum kullanım için uygun konsantrasyonlarda bulunabilir . Drosophila ve Anofel için: (parafin yağı v 10 -7 v) ve 1-octen-3-ol: video deneme için, biz bir çözücü kontrolü ve metil asetat gibi parafin yağı kullanın (parafin yağı v 10 -6 v) sırasıyla kayıtları. </li><li> Makas kullanarak, Pasteur pipetler içine sığacak x 5 cm şeritler 3 mm kromatografi kağıdı kesti. </li><li> Pipet 30 filtre bir kağıt şerit üzerine istenilen koku mcL ve cam pipet içine yerleştirin. Kes ~ 3 cm hava hattı hortumu ve bir bağlayıcı ile kapatarak, pipet açık ucuna takın. Konektörü, deneme sırasında koku sunmak için zamanı geldiğinde, bir hava pompası, hava borusu eklenecektir pipet mühür için kullanılır. </li></ol> 2. Koku teslimat sistemi <ol><li> Küçük bir matkap kullanarak, 10 ml plastik Serolojik pipet (4 ml işareti) kesilmiş ve kokuları içeren pipetler tutmak için kullanılır olacak iki delik (örneğin -1.5 ml ve -0.5 mL işaretleri) oluşturmak. Dikenli kuplör 200 mcL pipet sokun ve 10 ml pipet künt ucunu bağlayıcı tanıtmak. Pipet koku için dağıtım sisteminin bir parçası olarak kullanılacaktır. </li><li> Bir pipet kelepçe ile bir manyetik standı pipet takın ve mikroskop yakın pozisyon. </li></ol> 3. Bileme elektrotlar <ol><li> Elektrotlar keskinleştirmek için, 0.5 M potasyum hidroksit çözeltisi (KOH) hazırlamak ve ince parçacıklar (örneğin bir 45 mikron filtre kullanarak) kaldırmak için filtre. 20 ml şırınga alın ve duvara yakın bir iğne ucu elektrik teli içine eklenir (ucundan ~ 1 cm), (Şekil 1A). Kullanarak küçük bir delik (~ 2 mm çapında) </li><li> 0.5 M KOH ile şırınga doldurun ve uç görüş alanı (Şekil 1B, C) yerleştirilir, böylece mikroskop altında bir stand bu kelepçe. Tel doğrudan şırınga girişinin önünde olmadığından emin olmak için, şırınga duvar (Şekil 1B) üzerinde küçük bir delik içine elektrik teli takın. Bir DC güç kaynağı (örn. Yaban Heerbrugg MTR32 yöntemleri bakınız) ya da bir AC güç kaynağı (örneğin Vahşi Heerbrugg-LEP 990.018) bir kutup katot bu tel bağlayın. Mikroskop sağ tarafında manuel mikromanipülatör üzerine elektrot tutucu mili takın ve bir timsah klibi ile elektrot tutucu milinin üssünde bir elektrik kablosu takmak. DC güç kaynağı veya AC güç kaynağı (Şekil 1A), diğer kutup anot bağlayın. </li><li> (~ 5 cm uzunluğunda) tungsten tel elektrot tutucu içine yerleştirin ve manipülatör elektrot tutucu mili ekleyin. 6 V güç kaynağı ayarlayın ve süreci (Şekil 1C) sırasında mikroskop altında ucu izlemek için dikkatli olmak, bilemek için art arda şırıngaya telin ucuna takın. Kayıt için ideal bir elektrot elde etmek için 1 dakika kadar çözüm süresini% 90 yerleştirin ve yavaşça çekin. Daha sonra 30 saniye daha ince ~ sadece% 50 elektrot eklemek ve bilenmiş (~ 10 kez) Telin ucu almak için bu işlemi tekrarlayın. Elektrot ucu kadar ince olmayan kayıtları sırasında (adım 6 ve 7) dokunduğu zaman bend sensillum girmek için yeterince ince, ama gerekmektedir. Diseksiyon mikroskobu altında elektrot ucu sivriltilmiş edilirken izlerken sadece kayıt mikroskop altında yüksek büyütmede bakarak, belirli bir elektrot kayıt için uygun olup olmadığı konusunda net bir fikir verecektir kalınlığı iyi bir gösterge olmasına rağmen. </li></ol> 4. Böcek hazırlık: Drosophila anten <ol><li> Bir sinek aspiratör oluşturun. (Yaklaşık 90 - 120 cm), boynunuza rahatça asmak için yeterince uzun hava hattı boru bir parça kesin. 200 mcL pipet ucu kesin ve tüpün bir ucunu takın. Diğer ucunu, pozisyon ~ 1.5 cm x fiziksel bir bariyer oluşturur ancak tüp dışarı akan hava engellemez böylece örgü 1,5 cm parçası. Mesh arasında engelleme, tüp açma 1 ml pipet ve konumunu daha geniş bir ipucu kesin. Bu bölümü, pick up ve yetişkin sirke sinekleri (Şekil 2) işlemek için kullanılacaktır. </li><li> Bir mikroskop lamı alın ve kabaca uzun kenarı ortasında diş balmumu bir parça yer. Bu positio üstündecam kapak na biraz balmumu doğrudan mikroskop altında sirke sineği görselleştirme önleyecek en üst parçası altında olmadığından emin olmak için, yukarı doğru (~ 30) yatırılabilir. Dikey çektirmesi ile cam elektrot çekin. Ucu ikinci ve üçüncü antennal segment arasına sığacak kadar ince ve esnek, ve kayıtları için anten sabit tutmak gerekir. Mum başka bir parça cam elektrot yerleştirin ve yeteri kadar ipucu alçaltılmış olduğunda kapağı cam (Şekil 3A) köşesine ulaşır, yan kapak cam üzerine yerleştirin. </li><li> İstenen genotip erişkin sineklerin bir şişe ya da şişeden çalışarak, yetişkin sirke sineği sinek aspiratör kullanarak bir pick up. Kadınlarda genellikle büyük boyutu nedeniyle kullanılmakla birlikte, erkeklerde de kullanılabilir. Sinek kaçmasını önlemek için, 1 ml ucu üstünde 200 mcL pipet yerleştirin. Sinek 200 mcL pipet ucu sonuna doğru itilir, böylece tüpe üfleyin. Pipet ucu jiletle sinek kendisinden birkaç milimetre uzaklıkta geniş sonunu kesin, daha sonra dışarı destek sinek önlemek için bazı mum yerleştirin. Mikroskop altında, hayvan zarar vermemeye dikkat ederek, sirke sineği başkanı yakınında yine kesti. Küçük bir pipet ile, gözleri yaklaşık yarısı ucu (Şekil 3B) a'ya böylece sinek kafası dışarı atmak için, balmumu itin. Bacaklarının yanı sıra gelmez, ya da kayıtları ile taşımak ve etkileşebilir bu emin olun. </li><li> Balmumu bir parça sinek Dağı başını yukarı bakacak ve kapak cam önünde slayt üzerine yerleştirin. Antenler genişletmek ve böylece cam dinlenmek, cam köşe baş hafifçe bastırın. Ikinci ve üçüncü antennal segment (Şekil 3B) arasında kılcal cam ucu indirin. </li><li> Anteni farklı bölgelerinde farklı sensilla türlerine erişim verecektir. Özellikle deneysel ihtiyaçlarına bağlı olarak, farklı sensilla türlerine erişimine izin vermek için farklı anten odaklı gerekecektir. Bizim örneğimizde olduğu gibi büyük basiconic sensilla kayıt için arista cam (Şekil 3B) aşağı doğru itilir. </li></ol> 5. Böcek hazırlık: Anofel maksiller palps <ol><li> Bir elektrikli aspiratör (Şekil 2E) kullanarak, küçük bir plastik kafesi (Şekil 2F) 40 ila 60 3-5 gün eski sivrisinek (karışık erkek ve kadın) toplamak. Sivrisinekler 25-28 bir böcek inkübatör veya insectary, yani normal şartlar altında yetiştirilen olması gerektiğini ° C% 70-80 nem. Soğuk anestezi kadar yaklaşık 15 dakika süreyle buz hayvanları ile küçük plastik kafes yerleştirin. , Hayvanların hareket durdurulduğunda, işlemleri sırasında buz üzerinde hayvanların geri kalanı tutmak, herhangi bir zamanda sahneye mikroskop altında sadece 4-6 hayvan transfer. Kadınlarda genellikle CO 2 duyarlılık nedeniyle kullanılmakla birlikte, erkeklerde de istihdam edilebilirler. Kendi anten yapısı (filament gibi kadın, erkek tüy gibi) tarafından bakarsak, kadın veya erkek sivrisinek seçin ve onları hareketsiz ince forseps ile kendi kanatları ve bacakları kaldırmak. Onları kuruttuktan önlemek için küçük bir plastik bardak, altındaki ıslak bir kağıt ile saklayın. </li><li> Merkezinde ve slayt cam kenarındaki çift taraflı bant (~ 1 cm arayla) birbirlerine paralel iki adet (~ 1 cm uzunluğunda), (Şekil 3C) koyun. Diseksiyon mikroskobu altında ince forseps kullanarak, bir sivrisinek merkezi bant yerleştirin ve yanlara doğru açın ve teyp gövdesi ve bir gözü sopa. Hem palps bant (Şekil 3B) paralel uzanan böylece maksiller palps konumunu ayarlayın. Üssünde ve palps (Şekil 3B) ucunda iki ince dizeleri (örneğin insan kılların) koyarak maksiller palps sabitleyin. Merkezi bant, her kayıt (Şekil 3C) sonra değiştirilmesi gerekir iken yan bant, ince dizeleri için bir depo olarak kullanılır. </li></ol> 6. Kayıt Drosophila melanogaster <ol><li> (Şekil 4A), düşük büyütme ve kabaca view (FOV) (Şekil 4B) alanın ortasındaki konumu anten mikroskop altında slayt yerleştirin. Yavaşça elektrot, referans elektrot, sinek ve kayıt elektrot anten yakın (Şekil 4C) göz yakınında bulunan böylece düşük. FOV (Şekil 4D) ortasında büyütme ve yeniden pozisyon anten artırın. </li><li> Anten işaret ederek, sineğin kafasına koku teslim cihaz yakın yerleştirin. </li><li> Düşük büyütme (Şekil 4C), referans elektrot sineğin göz içine yerleştirin. Yüzeyine dokunmadan anten üstüne kayıt elektrodu indirin. </li><li> Mikromanipülatör yüksek büyütme geçiş ile kayıt elektrodu kontrolü ve seçilen sensillum (Şekil 4D) yerleştirin. Sensillum uzunluğu boyunca herhangi bir noktada kayıt için iyidir. Sensillum içinde, elektrot daha uzağa itti olabilir (bazen tüm yol ile)daha iyi bir sinyal gürültü oranı elde etmek. Elektrot sensillum sonra, hücrelerin spontan aktivite tespit edilebilir. </li></ol> 7. Kayıt Anofel gambiae <ol><li> Mikroskop altında düşük büyütme (10x) ve kabaca ortasında FOV ve üst baş pozisyonu maksiller palps cam slayt yerleştirin (Şekil 4E). Palps bir kayıt elektrodu ile bir dik açı kadar sahne döndürün. </li><li> Referans elektrot sadece sivrisinek ve kayıt elektrot maksiller palps yakın göz üzerine yerleştirilmiş, böylece elektrotlar yüksekliği ayarlayın. </li><li> O kadar yakın palps mümkün böylece koku teslim cihazı yerleştirin. </li><li> Alt büyütme (10x) referans elektrot göz içine yerleştirin ve yüksek büyütme (100x) geçiş dokunaç (Şekil 4F) peg sensillum kayıt elektrodu takın. Elektrot sensillum sonra, hücrelerin spontan aktivite tespit edilebilir. </li></ol> 8. Temsilcisi sonuçları Sensillum ve kayıt kalitesine bağlı olarak, tek bir iz içinde farklı sayıda olfaktör nöronların ayırt edebilir. Drosophila melanogaster büyük basiconic sensilla, örneğin, başak genlik farklı hücreleri 2 ila 4, 9, 10 kayıt sırasında görünmelidir . Drosophila ab2 sensillum video deneyde, iki hücre, bir hücre (Şekil 5, mavi sivri) ve B hücresi (Şekil 5, yeşil sivri). Ne hücre sadece bir hücre, metil asetat 10 -6 seyreltme (Şekil 5B) yanıt ise, parafin yağı (Şekil 5A) uygulanması sırasında devreye girer . Anofel gambiae maksiller dokunaç, yivli peg sensillum üç hücreleri içerir, ancak sadece iki kolayca ayrımcılık yapılmaktadır (Şekil 5C, mavi ve yeşil sivri). Video deneyde B hücresi (Şekil 5D) 1-octen-3-ol 10 -7 seyreltme nasıl tepki vereceğini göstermektedir. <img src="/files/ftp_upload/1725/1725fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Elektrot kalemtıraş Elektrot kalemtıraş aparat (A) genel görünümü (B) (C) şırınga açılış yanındaki elektrot ucu yakın elektrot (sağ) netleştirmek için kullanılan 0.5 M KOH (solda). Içeren şırınga. <img src="/files/ftp_upload/1725/1725fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2. Nasıl hazırlanacağı, bir sinek aspiratör ve sivrisinek aspiratör (A) malzeme Başlangıç:... Hava hattı plastik boru, iki kesim pipet uçları, ve örgü (B) sinek aspiratör tamamlandıktan sonra sirke sinekleri yakalamak için kullanılan sonunda Detay (C) (D) Detay sinek aspiratör diğer ucunu (E) elektrik aspiratör sivrisinek toplanması için bir ana gövde ve çıkarılabilir plastik kafes oluşur. sivrisinekler için (F) çıkarılabilir plastik kafes. <img src="/files/ftp_upload/1725/1725fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3. Kayıt için bir sirke sineği (Drosophila melanogaster) ve sıtma sivrisinek (Anopheles gambiae) hazırlanması (A) sirke resmi mikroskop altında yerleştirmeden önce slayt monte uçmak (B) (C) cam kapiller yerinde tutulan anten ile sirke sineği kafa kapatın. Sivrisinek resmi üzerine monte edilmiş Slayt (D) Yakın çekim kaset üzerine yapışmasını burnumun ve palps ile sivrisinek kafa. <img src="/files/ftp_upload/1725/1725fig4.jpg" alt="Şekil 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 4"> Şekil 4. Bir sirke sineği (Drosophila melanogaster) ve sıtma sivrisinek (Anopheles gambiae) kayıt (A) elektrofizyoloji kurulum (B) Yakın çekim sinek preparat mikroskop üzerine monte edilmiş. Sinek anten kayıt elektrodu (sol), koku dağıtım sistemi (orta pipet), ve kayıt elektrot (sağ) ilgili olarak durduğuna dikkat edin. (C) 10x hedefi altında sinek Image (D) Görüntü altında 100x amacı; kayıt için monte edilmiş bir sivrisinek-duyumsal olmayan kıllar (ok başları) arasında serpiştirilmiş büyük basiconic sensilla (oklar), (E) 10x görünümü sivrisinek dokunaç ve peg sensillum (ok) (F) Yüksek büyütme . . <img src="/files/ftp_upload/1725/1725fig5.jpg" alt="Şekil 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 5"> Şekil 5. Örnekler ve Drosophila melanogaster kayıtlarıAnofel gambiae (A) Drosophila melanogaster ab2 sensillum iki duyusal nöronlar evler;. A hücresi (mavi ani) ve B hücre (yeşil sivri) (B) 10 -6 metil asetat uygulaması sırasında A ve B hücreleri (C) Bir hücre (mavi ani) ve B hücre (yeşil sivri) (D) Uygulama 10 -7 peg sensillum 1-octen-3-ol; Anofel gambiae peg sensillum iki duyusal nöronlar evler.

<ol><li>Boeckh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elektrophysiologische+Untersuchungen+an+einzelnen+Geruchsrezeptoren+auf+der+Antenne+des+TotengrAbers+%28Necrophorus+Coleoptera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Z.+Vergl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Elektrophysiologische Untersuchungen an einzelnen Geruchsrezeptoren auf der Antenne des TotengrAbers (Necrophorus Coleoptera).</a> Z. Vergl. Physiol. 46, 212-248 (1962).</li>
<li>Schneider, D., Hecker, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zur+Elektrophysiologic+der+Antenne+des+Seidenspinners+Bombyx+mori+bei+Reizung+mit+angereicherten+Extrakten+des+Sexuallockstoffes%5BTitle%5D)+AND+%22Z.+Naturforschg%22%5BJournal%5D)">Zur Elektrophysiologic der Antenne des Seidenspinners Bombyx mori bei Reizung mit angereicherten Extrakten des Sexuallockstoffes.</a> Z. Naturforschg. 11b, 121-124 (1956).</li>
<li>Touhara, K., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensing+odorants+and+pheromones+with+chemosensory+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Sensing odorants and pheromones with chemosensory receptors.</a> Annu Rev Physiol. 71, 307-332 (2009).</li>
<li>Sato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insect+olfactory+receptors+are+heteromeric+ligand-gated+ion+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Insect olfactory receptors are heteromeric ligand-gated ion channels.</a> Nature. 452, 1002-1006 (2008).</li>
<li>Wicher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+odorant+receptors+are+both+ligand-gated+and+cyclic-nucleotide-activated+cation+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Drosophila odorant receptors are both ligand-gated and cyclic-nucleotide-activated cation channels.</a> Nature. 452, 1007-1011 (2008).</li>
<li>Hallem, E. A., Ho, M. G., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+basis+of+odor+coding+in+the+Drosophila+antenna%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The molecular basis of odor coding in the Drosophila antenna.</a> Cell. 117, 965-979 (2004).</li>
<li>Hallem, E. A., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coding+of+odors+by+a+receptor+repertoire%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Coding of odors by a receptor repertoire.</a> Cell. 125, 143-160 (2006).</li>
<li>Boeckh, J., Kaissling, K. E., Schneider, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insect+olfactory+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Symp+Quant+Biol%22%5BJournal%5D)">Insect olfactory receptors.</a> Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 30, 263-280 (1965).</li>
<li>de Bruyne, M., Foster, K., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor+coding+in+the+Drosophila+antenna%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Odor coding in the Drosophila antenna.</a> Neuron. 30, 537-552 (2001).</li>
<li>Lu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor+coding+in+the+maxillary+palp+of+the+malaria+vector+mosquito+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Odor coding in the maxillary palp of the malaria vector mosquito Anopheles gambiae.</a> Curr Biol. 17, 1533-1544 (2007).</li>
<li>Hallem, E. A., Fox, A. N., Zwiebel, L. J., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfaction%3A+mosquito+receptor+for+human-sweat+odorant%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Olfaction: mosquito receptor for human-sweat odorant.</a> Nature. 427, 212-213 (2004).</li>
<li>Couto, A., Alenius, M., Dickson, B. J. M. olecular <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((anatomical%2C+and+functional+organization+of+the+Drosophila+olfactory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">anatomical, and functional organization of the Drosophila olfactory system.</a> Curr. Biol. 15, 1535-1547 (2005).</li>
<li>Fishilevich, E., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+functional+subdivision+of+the+Drosophila+antennal+lobe%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Genetic and functional subdivision of the Drosophila antennal lobe.</a> Curr Biol. 15, 1548-1553 (2005).</li>
</ol>

Olfaktör ipuçları yiyecek kaynakları, potansiyel arkadaşları ve yırtıcılar tanımlamak için organizmalar tarafından kullanılır. Olfaktör duyusal nöronları (OSNs), dış uyaranlara ve beynin bilgi ileri işlenmiş yüksek merkezleri arasındaki ilk aktarma merkezi. Drosophila melanogaster ve Anofel gambiae, OSNs kolayca erişilebilir ve koku ponponları tarafından uyarılır, elektriksel aktivitenin izlendiği olabilir. Tek sensillum kayıt (SSR) tekniği, yaygın OSNs kayıt ve koku 6...

<table><tbody><tr><td>Parafin yağı</td><td>Kokular</td><td>Fluka</td><td>76235</td><td></td></tr><tr><td>Yüksek saflıkta kokular (&amp;gt;98%)</td><td>Kokular</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>Metil asetat&lt;br/&gt;#296996&lt;br/&gt;1-okten-3-ol&lt;br/&gt;#74950&lt;br/&gt;</td></tr><tr><td>Filtre kağıdı şeritleri</td><td>Kokular</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-714-1</td><td>Kromatografi kağıdı</td></tr><tr><td>Konnektörler</td><td>Kokular</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-06365-40</td><td>1/16x1/8&quot;</td></tr><tr><td>Cam şişeler</td><td>Kokular</td><td>Agilent Technologies</td><td>5182-0556</td><td></td></tr><tr><td>Hava hattı plastik tüp</td><td>Koku İletimi</td><td>Python Products</td><td>500PAL</td><td></td></tr><tr><td>1 serolojik pipet</td><td>Koku İletimi</td><td>Corning</td><td>4101</td><td>10 mL</td></tr><tr><td>Plastik tüp</td><td>Koku İletimi</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-06418-0</td><td>0.050&quot;x0.090&quot;OD</td></tr><tr><td>Tek kullanımlık borosilikat cam Pasteur pipetleri</td><td>Koku İletimi</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20A</td><td>5-3/4 inç</td></tr><tr><td>Programlanabilir stimülasyon kontrolörü</td><td>Koku İletimi</td><td>Syntech</td><td>CS-55</td><td></td></tr><tr><td>Anti-vibrasyon masası</td><td>Elektrofizyoloji Ekipmanları</td><td>TMC</td><td>63533</td><td>36&amp;#8221;Wx30&amp;#8221;Dx29&amp;#8221;H</td></tr><tr><td>Faraday kafesi</td><td>Elektrofizyoloji Ekipmanları</td><td>TMC</td><td>MI8133303</td><td></td></tr><tr><td>Ters mikroskop</td><td>Elektrofizyoloji Ekipmanları</td><td>Nikon Instruments</td><td>E600FN ECLIPSE</td><td>Kayıt mikroskobu</td></tr><tr><td>10x ve 100x objektifler</td><td>Elektrofizyoloji Ekipmanları</td><td>Nikon Instruments</td><td>10x Plan Fluor 100x L Plan</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td>Elektrofizyoloji Ekipmanları</td><td>Nikon Instruments</td><td>EZ645</td><td>elektrot bileme/böcek hazırlama mikroskobu</td></tr><tr><td>Manyetik standlar</td><td>Elektrofizyoloji Ekipmanları</td><td>Newport Corp.</td><td>MODEL 150</td><td></td></tr><tr><td>IDAC</td><td>Elektrofizyoloji Ekipmanları</td><td>Syntech</td><td>IDAC-4</td><td></td></tr><tr><td>Veri toplama yazılımı</td><td>Elektrofizyoloji Ekipmanları</td><td>Syntech</td><td>Autospike</td><td></td></tr><tr><td>1 makromanipülatör</td><td>Elektrofizyoloji Ekipmanları</td><td>Narishige International</td><td>MN-151</td><td>Joystick manipülatör&lt;br/&gt;Referans elektrodu konumlandırmak için kullanılır</td></tr><tr><td>1 mikromanipülatör</td><td>Elektrofizyoloji Ekipmanları</td><td>EXFO</td><td>PCS-6000</td><td>Kayıt elektrodunu konumlandırmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Timsah klips</td><td>Elektrofizyoloji Ekipmanları</td><td>Pomona</td><td>AL-B-12-0</td><td></td></tr><tr><td>Elektrik kablosu</td><td>Elektrofizyoloji Ekipmanları</td><td>Pomona</td><td>B-36-0</td><td>Test Kablo Düzenleği</td></tr><tr><td>2 elektrot tutucu</td><td>Elektrofizyoloji Ekipmanları</td><td>Syntech</td><td>N/A</td><td>Tungsten tel elektrot için elektrot tutucular (2'li set)</td></tr><tr><td>AC probu</td><td>Elektrofizyoloji Ekipmanları</td><td>Syntech</td><td>N/A</td><td>Evrensel tek uçlu prob (10xAC)</td></tr><tr><td>Tungsten elektrotlar</td><td>Elektrofizyoloji Ekipmanları</td><td>Microprobes</td><td>M210</td><td>düz tungsten çubuklar, 0.005x3</td></tr><tr><td>Potasyum hidroksit</td><td>Elektrofizyoloji Ekipmanları</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221473</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga</td><td>Elektrofizyoloji Ekipmanları</td><td>BD Biosciences</td><td>301625</td><td>20 mL</td></tr><tr><td>Güç kaynağı</td><td>Elektrofizyoloji Ekipmanları</td><td>Wild Heerbrugg</td><td>ör. MTR32</td><td></td></tr><tr><td>Dikey çekici (puller)</td><td>Böcek hazırlama</td><td>Narishige International</td><td>PB-7</td><td></td></tr><tr><td>Jilet</td><td>Böcek hazırlama</td><td>VWR international</td><td>55411-050</td><td></td></tr><tr><td>Dental mum</td><td>Böcek hazırlama</td><td>Patterson</td><td>091-1503</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop lamı</td><td>Böcek hazırlama</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550A</td><td></td></tr><tr><td>Lameli</td><td>Böcek hazırlama</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-541A</td><td>18X18 #1.5</td></tr><tr><td>Polipropilen ağ</td><td>Böcek hazırlama</td><td>Small Parts, Inc.</td><td>CMP-0500-B</td><td></td></tr><tr><td>Cam elektrot</td><td>Böcek hazırlama</td><td>Frederick Haer and Co.</td><td>27-32-0-075</td><td>Borosilikat kapiler tüp 1.5mm OD x 1.12mm ID x 75 mm</td></tr><tr><td>Çift taraflı bant (3M)</td><td>Böcek hazırlama</td><td>3M</td><td>MMM6652P3436</td><td>Çift taraflı bant (3M)</td></tr><tr><td>Pens</td><td>Böcek hazırlama</td><td>Fine Science Tools</td><td>021x0053</td><td>Dumont #5 Ayna Bitişli Pens</td></tr><tr><td>Küçük plastik kap</td><td>Böcek hazırlama</td><td>VWR international</td><td>89009-662</td><td>7 x 5.7 (23/4 x 21/4)</td></tr><tr><td>Elektrikli aspiratör</td><td>Böcek hazırlama</td><td>Gempler&amp;rsquo;s</td><td>RHM200</td><td></td></tr></tbody></table>

böcekler tek sensillum kayıtlar drosophila melanogaster ve anofel gambiae</em

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Koku alma duygusu, gıdalar, arkadaşları, predatör ve bulmak için siteler 3 yöntemlerinin koloni böcekler için esastır . Böcek koku alma duyu nöronları (OSNs) koku alma organlarının yüzeyini kaplayan sensilla denilen duyu kılları, içine alınır. Her sensillum yüzey koku üzerinden geçmek ve belirli bir sensillum ev sahipliği OSNs duyusal dendritler banyoları sensillum lenf adı verilen bir sıvı içinde çözülür, küçük gözenekler ile kaplıdır. OSN dendritler odorant reseptör (OR) proteinleri ifade, hangi böceklerin koku-kapılı iyon kanalları 4, 5 olarak fonksiyon. OR ya artırır koku etkileşimi veya OSN bazal atış hızı azalır. Aksiyon potansiyelleri şeklinde Bu nöronal aktivitenin ilk temsili kalitesi, yoğunluğu ve odorant 6, 7 zamansal özellikleri bünyesinde barındırıyor. Bu duyu kılları kolay erişim göz önüne alındığında, referans elektrot böceğin göz ya da vücudun lenf alınırken, sensillum lenf bir kayıt elektrodu getirerek tek OSNs ekstraselüler kayıtlar yapmak mümkün. Drosophila, bir ile dört OSNs arasında sensilla ev, ama her OSN genellikle karakteristik bir başak genlik görüntüler. Spike sıralama teknikleri, bireysel OSNs spike yanıtları atamak mümkün kılmaktadır. Bu tek sensillum kayıt (SSR) tekniği sensillum lenf ve OSNs 1, 2, 8 reseptör aktivitesi tarafından üretilen elektrik ani olarak referans elektrot arasındaki potansiyel farkı izler. Odorant yanıt ani sayısı değişiklikler, böcekler içinde koku kodlama hücresel temeli temsil eder. Burada, şu anda Drosophila melanogaster ve Anofel gambiae SSR gerçekleştirmek için laboratuarda kullanılan hazırlama yöntemi tarif ve sensillum özel bir şekilde koku ile indüklenen temsilcisi izleri .

Koku için koku alma duyu nöronlarının elektrofizyolojik yanıtlar tek sensillum kayıtları kullanarak böcekleri ölçülebilir. Bu video makalede, sirke sineği antenler tek sensillum kayıtları nasıl gerçekleştirileceği gösterecektir (<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt;) Ve sıtma sivrisinek maksiller palps (<em&gt; Anofel gambiae</em&gt;).

Böcekler Tek Sensillum Kayıtlar Drosophila melanogaster Ve Anofel gambiae</em

Koku alma duyusu; böceklerin besinleri, eşleri, avcıları ve yumurtlama bölgelerini bulmaları için temel öneme sahiptir3. Böcek koku alma duyusal nöronları (OSN'ler) ... ile çevrilidir...

Bu video, Drosophila melanogaster'da tekil syn kayıtlarının nasıl gerçekleştirileceğini göstermektedir; hazırlanan kokular kağıt şeritlerin üzerine pipetlenmiş ve ardından pastör pipetlerine yerleştirilmiştir. Koku alma organlarını sabitlemek için canlı böcekler monte edilir. Böcek bir mikroskobun altına yerleştirilir ve böceğin gözüne bir referans elektrodu yerleştirilir.Ardından kayıt elektrodu bir olfaktor sentumuna yerleştirilir. Pipetten sentuma bir koku püskürtülür ve nöronal aktivite kaydedilir. Merhaba, ben Rockefeller Üniversitesi Vasal Laboratuvarı'ndan Leslie Vasal ve ben de yine Vasal laboratuvarından Mariza Pellegrino.Bugün size sirke sineği *Drosophila melanogaster* ve sıtma sivrisineği *Anopheles gambiae*'nin olfaktör duyusal nöronlarından kayıt alma prosedürünü göstereceğiz. Böceklerde koku alma duyusunun nasıl çalıştığını ve nöronların uçucu kimyasallara nasıl tepki verdiğini incelemek için laboratuvarımızda bu prosedürü kullanıyoruz. Hadi başlayalım.Bu prosedüre, kayıtlar için kullanılacak elektrotları sivrilterek başlayın. Bir matkap kullanarak, 20 litrelik bir şırınganın gövdesine, ucundan bir santimetre uzaklıkta, yaklaşık iki milimetre çapında küçük bir delik

single-sensillum-recordings-insects-drosophila-melanogaster-anopheles

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Böcek koku alma sistemleri electroantennograms (EAG) ve anteni bulunan tüm odorant reseptör nöronları (ORNs) ve bireysel ev sahipliği bu yanıtları toplanır tek sensillum kayıtları (SSR), formları kayıt odorant indüklenen yanıtları için eşsiz fırsatlar sunmaya sırasıyla sensilla.

Güve Koku Sistemi Elektrofizyolojik Ölçümler

Bu videoda, canlı bir Drosophila sineği elektrofizyolojik çalışmalar için bir tüpe monte edilmiştir. Elektrotlar, sineğin koku alma reseptör nöronları ile feromonlara spesifik nöronal tepkileri kaydetmek için sensillumun tabanına yerleştirilir.

Drosophila Sensilla'dan Uçucu Koku Maddelerine Yanıt Olarak Elektrofizyolojik Kayıtlar

Bu protokol Drosophila labellar tat nöronlar tarafından ateş aksiyon potansiyel yanıtları hücre dışı kayıt açıklar.

Elektrofizyolojik Kayıt<em&gt; Drosophila</em&gt; Labellar Sensilla Taste

Elektrofizyolojik inceleme ile belirlendiği zaman Aedes aegypti büyük tat uzantıları gen ekspresyonunu değerlendirmek için iki yöntem kullanılarak,, varsayım olarak, acı ve itici bileşikler, nöronal yanıtları altında yatan genlerin dizi belirledik.

Fizyolojik Kayıtlar ve Sarı-ateş Sivrisinek Tat Çıkıntılara RNA Sıralama Aedes aegypti

Tahtakuruları, ortamdaki semiyokimyasalları tespit etmek için anten koku alma duyularında bulunan koku alma reseptörü nöronlarına güvenir. Tek sensillum kaydını kullanarak, tahtakurusunun semiokimyasallara tepkisini değerlendirmek ve ilgili kodlama sürecini keşfetmek için bir yöntem gösteriyoruz.

Semiokimyasallar için yatak hataların Koku Nöron Cevapları Algılama Tek Sensillum Kaydı Kullanma

Drosophila'nın ön ayakları ve hortumu, tat alma duyusal nöronlarının zengin bir repertuarını içerir. Burada, canlı sineklerin ön bacak ve hortumundaki duyusal nöronlardan gelen fizyolojik tepkileri ölçmek için kalsiyum görüntüleme kullanan bir yöntem sunuyoruz.

Fizyolojik Yanıtları Ölçüm<em&gt; Drosophila</em&gt; Canlı Kalsiyum Görüntüleme kullanma Lipit Feromonlar Sensory Nöronlar

Keskin mikroelektrotlar, canlı Drosophila'da fotoreseptörün ve görsel internöron çıkışının doğru elektrofizyolojik karakterizasyonunu sağlar. Burada, tek tek hücrelerin kontrollü ışık stimülasyonuna yüksek kaliteli voltaj tepkilerini kaydetmek için bu yöntemin nasıl kullanılacağını gösteriyoruz. Bu yöntem, böcek bileşik gözlerinde nöral bilgi işlemeyi incelemek için idealdir.

Recording Hücre içi Gerilim Yanıtları için Elektrofizyolojik Yöntem<em&gt; Drosophila</em&gt; Işık Uyaranların için Fotoreseptörler ve internöronlar<em&gt; İn Vivo</em

Bu protokolün genel amacı, uzun zincirli kütiküler feromonlara tepki gösteren Drosophila olfaktör reseptör nöronlarından tek duyarlılık kaydı için düşük uçuculukta odorantları nasıl göstereceğini göstermektir.

Elektrofizyolojik Kayıt<em&gt; Drosophila</em&gt; Düşük Volatilite Kokularına Karşı Trikoid Sensilla

Bu kağıt sensilla basiconica tek sensillum kayıtları için detaylı ve son derece etkili iletişim kuralı böcek ağız dokunacı üzerinde açıklar.

Tek Sensillum kayıtları Locust Palp Sensilla Basiconica için

Bu iletişim kuralı maliyet-etkin ve uygun farmakolojik ajanları, sinirsel proteinlerin genetik mutasyonlar test etkinleştirmek için Drosophila melanogaster merkezi sinir sistemi azalan elektriksel aktivitesinin kaydetmek için bir yöntem açıklar, ve/veya keşfedilmemiş fizyolojik yolları rolü.

Üçüncü-biçim Drosophila Melanogaster merkezi sinir sisteminin etkinliğinin elektrofizyolojik kayıt

Nadiren kullanılan bir elektrofizyolojik kayıt yöntemi olan temel kayıt, geleneksel kayıt yöntemleriyle incelenemeyen tat kodlama özelliklerinin analizine olanak tanır. Temel kayıt, geleneksel elektrofizyolojik yöntemler kullanılarak incelenemeyen hidrofobik uyaranlara verilen tat tepkilerinin analizine de izin verir.

Temel Kayıt: Drosophila'da Tat Nöronlarının Tepkilerini Analiz Etmek İçin Bir Teknik

Öğrenin tek sensillum kayıtları yöntemini Drosophila melanogaster ve Anopheles gambiae'de koku duyu nöronlarının elektrofizyolojik yanıtlarını ölçmek için. Bu teknik böcek nörobiyolojisinde koku işleme mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

Böcekler Tek Sensillum Kayıtlar Drosophila melanogaster Ve Anofel gambiae

Daha fazla video keşfet