Hemaglütinasyon Testi kullanarak Reaktivite ve Serum Titre Belirlenmesi

Bir hemaglutinin testi kullanılarak serum için reaktivite ve titrenin belirlenmesi. Bir glüten ulusu, çözünür antikorlar ve partikül antijenler arasında meydana gelen bir reaksiyondur. Bunlar hücreleri içerebilir veya molekülleri taşıyabilir.

Taşıyıcının yüzeyindeki epitoplar, bir antikorun taşıyıcıyı birbirine bağlamasına ve çapraz bağlamasına izin verir, bu da antijen antikor kompleksi adı verilen karmaşık bir kafesin oluşumuna yol açar. Hem aglütinasyon, antikorların partikül antijen görevi gören kırmızı kan hücrelerine bağlandığı spesifik bir aglütinasyon şeklidir. Kırmızı kan hücreleri, her ikisi de hazır oldukları ve sonuçlar çıplak gözle kolayca görülebildiği için yararlı hedeflerdir.

Serum örnekleri seri olarak seyreltilir ve daha sonra 96 oyuklu bir ubo plakasına yerleştirilir. Daha sonra kırmızı kan hücrelerinin bir süspansiyonu Riva hücreleri eklenir. Antikorlar yüksek konsantrasyonda bulunduğunda, kırmızı kan hücrelerine bağlanma gerçekleşir ve büyük bir kafes oluşturur.

Bu kafes yerçekimi ile yerleşirken, ubo plakasının şekline uyar. Yukarıdan bakıldığında geniş bir kırmızı kan hücresi tabakası görülür. Bu pozitif bir hemaglutinin reaksiyonudur.

Antikor seviyeleri düşük olduğunda, hiçbir kafes oluşamaz ve kırmızı kan hücreleri UBO plakasının şekline uyar ve tabanda konsantre olarak küçük bir topak oluşturur. Bu negatif bir hem aglütinasyon reaksiyonudur. Bu diyagram olumlu bir reaksiyon göstermektedir.

Hücreler yerleştikçe bir kafes oluştururlar, U alt plakasının şekline uyarlar. Solda ve sağda, geniş bir kırmızı kan hücresi tabakasının görüldüğü üst görünümü görüyoruz. Orta miktarda antikor mevcutsa, bazı harf oluşumu gözlenecektir.

Hem aglütinasyon ayrıca farklı serum örneklerinin reaktivitesinin bilinen antijene karşı test edilmesine izin verir. Serum örneğinin titresi de belirlenebilir. Titre, pozitif bir reaksiyonun görüldüğü son seyreltmedir.

Normalde, serum örneğindeki antikor konsantrasyonu ne kadar yüksekse, titre o kadar yüksek olur. Bu diyagram negatif bir hem aglütinasyon reaksiyonunu göstermektedir. Kırmızı kan hücrelerini çapraz bağlamak için yetersiz antikor mevcut.

Hücreler yerçekimi ile yerleştikçe, kuyunun yanından aşağı kayarlar ve dipte sıkı bir pelet oluştururlar. Sağdaki diyagram yukarıdan bakıldığında kırmızı kan hücrelerini göstermektedir. Bu deney için 1 96 kuyulu U alt plakaya ihtiyacınız olacak.

Düz tabanlı plakalar, hücrelerin bir pelet haline gelmesine izin vermeyeceğinden, bir U alt plakanın kullanılması önemlidir, bu da yorumlamayı imkansız hale getirir. 50 mikrolitre test sağlayabilen bir evcil hayvan, serumu% 1'lik bir Riva hücresi süspansiyonu ve sıranın her bir oyuğuna bir kerelik veron tampon salin çözeltisini test eder. Birden 12'ye kadar, 50 mikrolitre roal tampon tuzlu su sağlar.

Bu, seyrelticiniz olarak kullanılır. Şimdi 50 mikrolitre serumu bir kuyuya koyun, Bir. Bu, iki seyreltmeden ilki.

Perpet'i kullanarak serum örneğinin iyice karıştığından emin olun. Karıştırdıktan sonra, A kuyusundan 50 mikrolitre çıkarın ve iki kuyusu A'ya aktarın. Bu, iki seyreltmeden ikincisidir ve size dört kat seyreltme sağlar.

Bu seyreltme serisine üç ila 11 arasındaki kuyuları kullanarak devam edin. 12'ye herhangi bir serum koymayın, çünkü bu sizin roal tampon salin negatif Kontrolünüzdür. Şimdi iyice karıştırılmış olan Riva hücrelerinin %1'lik Süspansiyonunu alın ve 50 mikrolitreyi bir kuyudan A 12 kuyusuna aktarın.

Hücreler eklendikten sonra, plakayı kapatın ve numunelerin ve hücrelerin karıştığından emin olmak için plakaya hafifçe vurun. Şimdi 37 derecede 60 dakika inkübe edin. Nemlendirilmiş bir inkübatör uygundur.

60 dakikalık kuluçka süresi boyunca antijen antikor etkileşimleri gerçekleşecek ve hücreler yerleşmeye başlayacaktır. İzlemekte olduğunuz video çekimi, 60 dakikalık sürenin tamamının hızlandırılmış bir fotoğrafıdır. Bu, beşten 10'a kadar olan kuyuların yakın çekimi.

Bu konudaki VBS kontrolünüz olan 12'yi zaten inceledik. Hücreler, tahlilin uygun şekilde çalıştığını gösteren sıkı bir pelet oluşturmuştu. Beşinci ve altıncı kuyular, pozitif hem aglütinasyonunun örnekleridir.

Yedi, bir ara aglütinasyon sonucuna bir örnektir, sekiz, dokuz ve 10 numaralı kuyular ise hem aglütinasyon için negatiftir. Bu sonuca dayanarak, titre, pozitif bir reaksiyonun gözlendiği son kuyu olduğu için yedi kuyu için seyreltmeye dayalı olarak belirlenecektir.