Name: Eksik Pms2 ERCC1, Ku86 Kolon Kanseri ilerleme sırasında Alan Kusur CcOI (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-28T17:00:00.000+00:00
Duration: 28 min 15 s
Description: Öğrenin kolon kanseri ilerlemesinde alan kusurunu değerlendirmek için Pms2 ve ERCC1 DNA onarım proteinlerinin immünohistokimyasal analizini. Bu yöntem erken kanser belirteçlerini tanımlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Güney Arizona Savaş Gazileri İşleri Sağlık Bakım Sistemi VA Merit İnceleme hibe 0142 ve Arizona Biyomedikal Araştırma Komisyonu bursu 0803 tarafından sağlanmaktadır Finansman.

Dokular slaytlar üzerinde görülebilir hazırlanması <ol><li> Kolonoskop rektum aracılığıyla kolon içine aktarılabilir. Kolonoskop başında aydınlatma ve bir video kamera olan uzun bir tüp, yeteneği, kolon daha iyi görselleştirme izin uzun bir balon gibi havaya uçurmak için kolon içine hava geçmesi ve Can biyopsi forseps için bir geçiş bize bir biyopsi örneği vermek için iç yüzeyi "deri" ya da kolon mukoza tabakası 3-5 milimetre alan çimdik video kamera ötesine. Biyopsi forseps, aynı zamanda potansiyel olarak kolonda kanser öncesi polipler kaldırmak için kullanılabilir. </li><li> Bilgilendirilmiş onam, hastanın normal kolonik mukozal dokuların biyopsileri alındı. Bu hastalar gastrointestinal bir klinikte bir tarama kolonoskopi. Biyopsileri formalin kavanoz yerleştirilir. 4 saat sonra% 70 alkol, formalin tarafından değiştirildi. </li><li> 1 cm ve 10 cm uzakta ileri neoplazi ile kolon kanserleri veya adenomlar kolon rezeksiyonu alanları, ameliyat sırasında çıkarılan doku Benzer örnekleri alınmıştır. Bu doku örnekleri, aynı zamanda formalin yerleştirildi ve doku örnekleri büyük olsaydı, bazı formalin% 70 alkol konuyor önce uzun bir süre için tutuldu. </li><li> Doku örnekleri, işlenmiş ve parafin bloklar halinde konuyor histoloji laboratuvara alınır. </li><li> Parafin bloklar, onları daha kolay bir mikrotom tarafından kesilmiş yapmak için buzdolabında soğutulmuş. </li><li> 4 mikron kalınlığında doku kesitlerinde bir mikrotom kullanılarak doku blokları kesilmiş ve su üzerinde yüzen. </li><li> Kadar, her iki slaytlar üç doku bölümleri vardır Örneğin ERCC1 ve Pms2 için, iki proteinin ifade karşılaştırmak için, alternatif doku kesitlerinde, iki Slaytlarınıza kaldırdı olabilir. Örneğin, 1, 3 ve 5 bölümleri etiketli bir slayt ERCC1 ve bölüm 2, 4 ve 6 Pms2 etiketli bir slayt üzerine yerleştirilebilir yerleştirilebilir. Tek bir slaytta bir protein için üç doku kesitlerinde immunohistokimyasal bir crypt alışılmadık bir boyanma paterni, eserler bir slayt üzerinde birden fazla doku bölümünde tekrar olmazdı bu yana bir insan yapımı ya da gerçek olduğunu görmek için izin verebilirsiniz. Kolon kript bir crypt ile yaklaşık 15 doku bölümleri kesilmiş olabilir, ve aynı crypt slayt başına birden fazla doku kesitlerinde görülebilir ki, çapı yaklaşık 60 mikron. </li></ol> Doku bölümleri immün <ol><li> Slaytlar sonra immünohistokimyasal etiketleme prosedürü ile konur. Bu 8 saatlik bir işlemdir ve oldukça standarttır. Kullandığınız prosedürü standart olmayan parçalar, boyama Sequenza kapların kullanılması, ve "Keskin Nişancı" olarak adlandırılan arka plan boyama azaltmak için bir çözüm kullanın. "Sniper" çözüm Biocare Tıp, Concord CA tarafından özel bir formülü olarak satılmaktadır. </li><li> Bazı prosedürler adımları gösterilmiştir. </li><li> Bir örnek olarak, Pms2 immünohistokimya, slaytlar, 3, 2% 95 etanol içinde değişiklikler (2 dakika takip% 100 etanol (her biri 2 dakika) 2 değişiklik takip ksilen (her biri 3 dakika) koyarak ilk deparafinize her biri), 2 (her biri 2 dakika) distile su ile izledi. Bu prosedürler, deneyci buharına maruz kalmayacak şekilde negatif hava basıncı ile kimyasal kaputun altında yürütülmektedir. </li><li> Başlangıçta doku düzeltmek için kullanılan formalin, proteinlerin doku örneği parçaları, çapraz bağlı oldu. Şimdi bir antikor ilgi protein tanıyabilir, böylece çapraz bağlantıları kesmek gerekir. Slaytlar, mikrodalga fırın kaynatın getiren bir tampon çözelti konur. Bu orta ayar 10 dakika, 20 dakika boyunca buz üzerinde soğutma izledi. Bu adım, iyi sonuçlar elde edilir kadar farklı mikrodalga test edilmiş ve ayarlanmış olması gerekiyor. CcOI veya Ku86 immün 9ml sitrik asit + 41mL sodyum sitrat, yaklaşık 6.0 pH ERCC1 için yaptığımız bir sitrat tamponu + 450ml H 2 O (sodyum iyonları da dahil olmak üzere bir tampon) ile yapılan bir sodyum sitrat tampon kullanılan 2.1g sitrik asit + 1 litre H 2 O + ~ 5ml pH 6.1 (asgari katma sodyum iyonları ile bir tampon) getirmek için sodyum hidroksit ve Pms2 için 5ml Antijen açığa çıkarılması bir çözüm (VEKTÖR) + 533mL ile yapılan bir çözüm H 2 O Farklı tamponlar, özel bir protein epitopu antikor etkileşimi artırmak için ihtiyaç vardır. </li><li> Slaytlar, 3 dakika, distile su ile temizleyin, durulayın ve 5 dakika fosfat tamponlu salin (PBS) ile yıkandı takip 20 dakika sonra% 3 hidrojen peroksit (metanol içinde seyreltilmiş) konur. </li><li> Slaytlar sonra Sequenza (Thermo Scientific Shandon Sequenza immün Sistemi) adı verilen düz dar boyama raflara yerleştirilir ve PBS ile durulanır. </li><li> ERCC1 veya Pms2 immunohistokimyasal slaytlar sonra 10 dakika maruzarka plan proteinlerin non-spesifik boyanması azaltmak için hareket eder Biocare elde edilen "Sniper" denilen özel bir çözüm, 3 damla ilave bir tedaviye maruz dakikalık bir iş. </li><li> 1 ml Tween + 100 ml 10x Tris + 900 ml distile su [10x Tris Trizma + 80 gram NaCl + 1.000 ml distile ve deiyonize su + konsantre HCl (24.2 gram olduğu bir tampon "TBST" slaytlar ile durulanır yaklaşık 15 ml), pH 7.6] çözüm getirmek. </li><li> Slaytlar sonra üç kez tamponu ile durulanır, ve DAKO 100 mikrolitre 1:100 dilüsyon (% 2 tampon TBST kadar yapılan sığır serum albumin) orta antikor biotinlenmiş slaytlara eklenir ve oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edilir. </li><li> Bu noktada, Vectastain ABC (Avidin Biotin Kompleksi) (Vektör Laboratories) reaktif, 2.5 ml PBS, 1 damla çözüm A, 1 damla B çözeltisi kullanılarak hazırlanan ve çözümü 30 dakika bekletildikten. </li><li> Slaytlar TBST tampon ile 3 kez durulanır. </li><li> Sonra Vectastain ABC reaktifin 3 damla eklenir ve slaytlar TBST ile 2 kez durulama ardından, 30 dakika oda sıcaklığında inkübe edilir. </li><li> Slaytlar yaklaşık 5 dakika sonra DAB (Diamino-benzamid) (2.9 ml DAB + 400 mikrolitre PBS + 250 mikrolitre hidrojen peroksit) batırılır. </li><li> Slaytlar sonra 2 kez distile, deiyonize su ile durulanır. </li><li> Counterstaining hematoksilen 10 saniye boyunca bir çözelti ile yapılır. Slaytlar, deiyonize su ile takip musluk suyu iyice durulanır. </li><li> Slaytlar sonra susuz 2 kez% 95 etanol içinde 2 dakika, 2 dakika ve 2 kez 2 dakika ksilen% 100 etanol içinde 2 kez. </li><li> Cytoseal XYL (Richard Allan Bilimsel) Birkaç damla, sonra slayt eklenir ve bir lamel uygulanır. </li><li> ERCC1, Ku86 ve CcOI immünohistokimyasal değerlendirme Pms2 için aynı protokolü kullanılarak yapılmaktadır, ancak ERCC1, Ku86 ve CcOI antikorlar ile Pms2 antikor yerine aşağıdaki tabloda açıklandığı. </li></ol> ERCC1, ifade eksikliği kript, Pms2, Ku86 ve CcOI için doku bölümleri değerlendirilmesi <ol><li> Biz kolon mukozasında kript Pms2 ve ERCC1 ifade Motic (DM-BA300) fotomikroskopla altında doku kesitlerinde ilk bakacağız. </li><li> Pms2 ve ERCC1 hem DNA onarım enzimleri ve DNA nerede bu yüzden kript hücrelerinin çekirdekleri, bulunmaktadır. Bu ERCC1 için boyama temsil eden kahverengi kolon, bir crypt hücrelerin çekirdekleri oluşur Şekil 1, belirtilir. Mikroskop ilk gösterisi normal crypt ERCC1 lekeli ve kahverengi leke ERCC1 yerini gösterir. Biz, "goblet hücrelerinin" crypt dış kenarında hücrelerin dibinde küçük bir bölgede çekirdekleri ile, biraz şarap cam gibi şekillenir kript ve balonlaşma bölümünü hücre türleri işaret crypt iç hücre kısmı beyaz musin granülleri ile dolu. Diğer iki tip hücre hem bizim boyanan kesitler görünmesi ve enterositler ve enteroendokrin hücreleri ve çekirdekleri hücrelerin dibinde, crypt dış kenarında da. Kolonik neoplazi hiç hasta, ya da herhangi bir site kadar kolon kanseri biyopsilerinde alınan biyopsiler, burada gösterildiği gibi, hemen hemen tüm kriptlerde çekirdekleri ERCC1 ifade normal yüksek seviyesini gösterir. </li><li> Yönlendirmek için hiçbir kolonik neoplazi olan hastalarda biyopsi alınan gözlemler, doku bölümleri normal kolon mukozasında Pms2 ifade düzeyleri, ERCC1, CcOI veya Ku86 görülmektedir. Biz yavaş yavaş bütün bir doku kript, interstisyel hücreler, slayt üzerinde herhangi bir lenf nodülleri ve muskularis dışarı bölüm ve nokta ile gitmek gibi (40x objektif lens ile, normal bir doku bölümünde tüm kript izleyebilirsiniz varsa biyopsi). </li><li> Ayrıca sadece birkaç hücreleri kök hücreler crypt üssünde olduğuna işaret. Bu kök hücreler tam crypt yaklaşık 2.000 hücreleri üretir. Bir mutasyon ya da bir epimutation ile bir kök hücre, kök hücre tamamını niş devralacak. Sonra bütün crypt CcOI yüksek ifade var kript sonraki CcOI eksik bütün kript gördüğünüz bu yeni bir slayt gösterisi olarak ilgi bir enzim (crypt dönüşüm) boyama değişmiş olabilir. </li><li> Sonra biz, kolon kanseri olan bir hasta ya da ileri neoplazi ile bir adenom bir slayt gösterisi. Bu slaytta, bazı kript ERCC1 normal yüksek düzeyde ifade var ve bazı düşük düzeyde ifade var. Tüm doku bölümü içinde kript 10x objektif lens ile düşük çözünürlükte çekildi, ve tüm doku bölümünde bir görüntü görülür, böylece görüntüler döşenir. Kript sonra numaralandırılmış. </li><li> Çok biyopsilerinde fro kript enzim yüksek bir ifade ile tipik kriptm herhangi bir kanser, seviye "4" boyama denir. Saptanabilir herhangi bir ifade varsa, zar zor algılanabilir ifade açıktır diğer seviyeler, "1" "0", "2" ifadesi mevcut olup olmadığını, ancak çok daha düşük bir seviye 4 daha düzeyi ve "3" az ifadesi ise 4 daha düşük bir seviyede mevcut, ama oldukça güçlü. Biz, 2 sarı, 3 yeşil turuncu ve kırmızı 0, 1, 4, düşük çözünürlüklü görüntü mavi her slayt nokta. Burada biyopsi 40x objektif lens kullanarak bir bölüm geçiyor göstermektedir. Biz düşük çözünürlüklü görüntü kript nokta. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1931/1931fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 kript hücrelerinin çekirdekleri ERCC1 yüksek ifade gösteren bir kolon crypt. Bu görüntüdeki tüm renkleri eşit Paint Shop Pro 5 kullanarak, kontrast ve doygunluk geliştirilmiştir. Temsilcisi Sonuçlar <ol><li> Ayrı slaytlar üzerinde alternatif doku kesitlerinde bize immünohistokimyasal olarak gösterilen iki farklı proteinin ifade ile, aynı kolon kript bakmak için izin verir. ERCC1 Pms2 için crypt boyanmış ve aynı crypt boyanmış görüntü komşu bilgisayar monitörleri ile bitişik mikroskoplar gösterilir. Bu bizim ortak eksikliği her sık ​​iken, bağımsız olarak ortaya çıkar, iki protein ya da proteinler her eksiklikleri olmadığını olup olmadığını belirlemek için izin verir. Biz bir protein ifadesinde herhangi bir belirgin eksikliği bir artefakt nedeniyle birden fazla bölüm eksik değil, kontrol edilebilir, böylece slayt başına üç doku bölümleri vardır. , Kansere yol açan bir kusur var kolon kanserleri, çevre dokulara ERCC1 ve Pms2 eksik kript yüksek bir frekans var. </li><li> Ayrıca Ku86 ve CcOI eksik kriptler frekansını bulmak için immünhistokimya kullanılır. Bu slaytta, Ku86 için immunohistokimyasal 40x objektif lens kullanarak, bütün bir doku bölüm üzerinden gitmek ve biz birkaç kript bu doku bölümü Ku86 için eksik olduğunu görebilirsiniz. </li><li> Benzer şekilde, bu slaytta, CcOI için immunohistokimyasal 40x objektif lens kullanarak, bütün bir doku bölüm üzerinden gidin ve sadece ılımlı bir kript CcOI için eksik olduğunu görebilirsiniz. </li></ol>

<ol><li>Slaughter, D. P., Southwick, H. W., Smejkal, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field+cancerization+in+oral+stratified+squamous+epithelium%3B+clinical+implications+of+multicentric+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Field cancerization in oral stratified squamous epithelium; clinical implications of multicentric origin.</a> Cancer. 6, 963-968 (1953).</li>
<li>Vauthey, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+field+cancerisation+in+clinical+oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Oncol%22%5BJournal%5D)">Importance of field cancerisation in clinical oncology.</a> Lancet Oncol. 1, 15-16 (2000).</li>
<li>Bernstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field+defects+in+progression+to+gastrointestinal+tract+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Field defects in progression to gastrointestinal tract cancers.</a> Cancer Lett. 260, 1-10 (2008).</li>
<li>Calabrese, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colorectal+pretumor+progression+before+and+after+loss+of+DNA+mismatch+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Colorectal pretumor progression before and after loss of DNA mismatch repair.</a> Am J Pathol. 164, 1447-1453 (2004).</li>
<li>Bernstein, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+Pms2+expression+in+non-neoplastic+flat+mucosa+from+patients+with+colon+cancer+correlates+with+reduced+apoptosis+competence%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Immunohistochem+Mol+Morphol%22%5BJournal%5D)">Reduced Pms2 expression in non-neoplastic flat mucosa from patients with colon cancer correlates with reduced apoptosis competence.</a> Appl Immunohistochem Mol Morphol. 14, 166-172 (2006).</li>
<li>Huang, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aldehyde+dehydrogenase+1+is+a+marker+for+normal+and+malignant+human+colonic+stem+cells+%28SC%29+and+tracks+SC+overpopulation+during+colon+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Aldehyde dehydrogenase 1 is a marker for normal and malignant human colonic stem cells (SC) and tracks SC overpopulation during colon tumorigenesis.</a> Cancer Res. 69, 3382-3389 (2009).</li>
<li>Kim, K. M., Shibata, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methylation+reveals+a+niche%3A+stem+cell+succession+in+human+colon+crypts%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Methylation reveals a niche: stem cell succession in human colon crypts.</a> Oncogene. 21, 5441-5449 (2002).</li>
<li>Greaves, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+DNA+mutations+are+established+in+human+colonic+stem+cells%2C+and+mutated+clones+expand+by+crypt+fission%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial DNA mutations are established in human colonic stem cells, and mutated clones expand by crypt fission.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 103, 714-719 (2006).</li>
<li>Nara, K., Nagashima, F., Yasui, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+elevated+ultraviolet-induced+mutation+frequency+in+isolated+Chinese+hamster+cell+lines+defective+in+nucleotide+excision+repair+and+mismatch+repair+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Highly elevated ultraviolet-induced mutation frequency in isolated Chinese hamster cell lines defective in nucleotide excision repair and mismatch repair proteins.</a> Cancer Res. 61, 50-52 (2001).</li>
<li>Payne, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deoxycholate+induces+mitochondrial+oxidative+stress+and+activates+NF-kB+through+multiple+mechanisms+in+HCT-116+colon+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Deoxycholate induces mitochondrial oxidative stress and activates NF-kB through multiple mechanisms in HCT-116 colon epithelial cells.</a> Carcinogenesis. 28, 215-222 (2007).</li>
<li>Lim, S. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+changes+induced+by+reactive+oxygen+species+in+hepatocellular+carcinoma%3A+methylation+of+the+E-cadherin+promoter%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Epigenetic changes induced by reactive oxygen species in hepatocellular carcinoma: methylation of the E-cadherin promoter.</a> Gastroenterology. 135, 2128-2140 (2008).</li>
<li>Bernstein, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+acids+as+carcinogens+in+human+gastrointestinal+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Mutat+Res%22%5BJournal%5D)">Bile acids as carcinogens in human gastrointestinal cancers.</a> Mutat Res. 589, 47-65 (2005).</li>
<li>Payne, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((hydrophobic+bile+acids%2C+genomic+instability%2C+Darwinian+selection%2C+and+colon+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">hydrophobic bile acids, genomic instability, Darwinian selection, and colon carcinogenesis.</a> Clinical and Experimental Gastroenterology. 1, 19-47 (2008).</li>
</ol>

<ol><li> Bu, slayt başına 3 doku kesitlerinde sahip olmak çok önemlidir. Antikor taşıyan medya uygularken Bubbles kript bazı kript veya bölümlerini bir kabarcık, doku bölümü ile reaksiyona antikor önledi sırf yeterince lekeli olmayabilir, böylece oluşabilir. Crypts çapı 60 mikron doku kesitlerinde 4 mikron kalınlığında, böylece aynı crypt üzerinden 15 olarak doku bölümleri vardır olabilir. Bir slayt üzerinde birden fazla doku kesitlerinde, bir kılavuz olarak kullanarak, aynı crypt crypt morfolojisi bulmak genellikle mümkün. </li><li> Bizim son çalışmalar, büyük doku örnekleri, bir Sequenza boyama doku iyi antikor kapsama vermek olmayabilir. Bu durumlarda, bir medya antikor içeren bir damla, her doku örneği üzerinden elle yerleştirilen doku el boyama, kullanmayı tercih edebilirsiniz. </li><li> Açıkça ifade ile immunohistokimyasal protein ve bilgisayar monitörü nükleer DNA gösteren mavi boyanma gösteren kahverengi lekelere, Motic fotomikroskopla yazılımı aşağıdaki gibi ayarlanır: Kazanç 0 0 Ofset, Gama 1.00, 0, 0, 255 geliştirin Netlik 1, Renk Düzeltme 7, R, G, B Kazanç 1.00 ve R, G, B Parlaklık 0. 1024 x 768 çözünürlük ve Beyaz Dengesi etkindir. </li><li> Bizim yöntemi proteinler kolon kanseri ilerlemesinde önemli olduğu düşüncesi ile, eksikliği sıklığını değerlendirmek için kullanılan ya da muhtemelen aşırı ekspresyonu, kolon kanserleri veya adenomlar ileri neoplazi çevreleyen alanı defektleri olabilir </li><li> Alan hataları kansere ilerleme bir parçası olan "Alan kanserizasyonu" terimi ilk Slaughter ve ark tarafından kullanılan şekilde kanser gelişimi için doğru zemin hazırlayabilir için büyük ölçüde bilinmeyen işlemler (zaman) tarafından koşullanan olmuştur epitelin bir alanda veya "alan" 1953 1 tanımlamak için. İlk kullanımdan oral kanserlerin bağlamında oldu. O zamandan beri, "saha kanserizasyonu" ve "alanı defekti" yeni kanserlerin ortaya çıkması daha olası olduğu herhangi bir pre-malign doku tanımlamak için daha yaygın olarak kullanılan, ve klinik onkoloji alanında kanserizasyonu kavramı giderek artan bir ilgi 2 aldı . Yakın zamanda 3 gastrointestinal kanser alanı defektleri için kanıt inceledik. Kolon alanı defektleri kanıt sağlayan bir düzine çalışmaların sonuçları bu yorum dahildir. Kolon mukozasında alanı defektleri, muhtemelen tek bir kök hücre niş arkaya 4 hayatta mutant hücreler veya epigenetically değiştirilmiş hücreler kök hücreler arasında böyle bir crypt doğal seleksiyon yoluyla ortaya çıkar. Genetik instabilite veya DNA nükleotid eksizyon onarımı ya da DNA uyuşmazlığı onarım azalma nedeniyle, belki de bir Mutator fenotip, bu süreci hızlandırmak (ve Pms2 sık görülen bir kusur kolon kanserleri 5 çevreleyen bölgelerde daha önce rapor edilmiştir). Kolon mukozasında kök hücrelerin normal bir nüfus, bir hücre veya bir epimutation bir mutasyon yoluyla selektif bir avantaj elde ederse, komşu kök hücreler pahasına klonal genişletmek eğiliminde olacaktır. Kolon mukozasında, kök hücre niş sonra (yaklaşık 2.000) crypt hücreleri doğuran ≤ 5 hücre 6 tarafından işgal edilmiştir. "Crypt dönüşüm" 7 ya da epigenetically değiştirilmiş bir mutant hücre tipi kök hücre nişinin üzerinde . Crypt fisyon 8 kolon epiteli mutasyona uğramış klonlar yayılması (dönüştürülür kript) en sık ortaya çıkabilir. Crypt fisyon bir örnek Şekil 2'de gösterilmiştir. Bu şekilde bir yama anormal doku ortaya çıkar. Böyle bir yama içinde, ikinci bir mutasyonun belirli bir crypt yama içindeki diğer kript göre bir avantaj kazanır ve bu crypt orijinal yama içinde klonal ikincil bir yama oluşturan genişletmek böylece ortaya çıkabilir. Malign bir kök hücre klonal bir kanser genişliyor ortaya çıkana kadar, bu yeni yama içinde, bu süreç, belki de on yıl içinde çok daha fazla zaman tekrar olabilir. Sporadik kolon adenokarsinomların ortaya çıktığı genel süreç ise, daha sonra kolon adenokarsinomların ile ilişkili olmalıdır ve anormallik alanları, öncesinde. Böylece, dönüştürülmüş kript bir yama ileri neoplazi bir adenom çevreleyen veya kolon kanseri çevreleyen bölgede saptanabilir kusurları var beklenebilir. Pre-tümör progresyonu bu model, bir kansere ilerleme olasılığı kolon neoplastik lezyonları çevreleyen alanları non-neoplastik kolon mukozası alınan doku örnekleri arasında okul öncesi tümör progresyonu ile ilgili genetik veya epigenetik değişiklikler bulmak için beklediğiniz . Özellikle, genomik instabilite artırarak, DNA onarım enzimleri veya apoptozis için gerekli proteinlerin kusurları ilerlemesine katkıda olacak ve arızalı bir alanda bulunan beklenebilir. </li><li> Hücreleri d Pms2 eksikliği seçimiERCC1 için eficient ve DNA zararlı madde tabi Nara ve ark. 9 25 Çin hamsteri over hücrelerinin kültürleri 43-3B, DNA tamir geni inaktive ERCC1 mutasyonu ile büyüdü, kültürleri ve DNA zararlı madde ile muamele, MNNG. DNA hasarı tedavi hayatta kalan hücreler arasında, tek bir hücre, her kültürden izole ve bir klon oluşturmak için izin. Izole tüm klonlar ebeveyn gerginlik daha MNNG öldürülmesi için yaklaşık 10 kat daha dayanıklı. Izole edilen klon DNA uyumsuzluğu onarım (MMR), 22 kusurlu olduğu kanıtlandı. Bu 22 klonları Beş sıralama tarafından test edilmiş ve üç beş Pms2 için eksik. Pms2 kusur Bu seçim Pms2 eksikliği apoptozise direnci neden çünkü muhtemelen, ERCC1 yoktu hücreleri kalan eklenen DNA hasarı hayatta nedenle yeteneği. (Normalde, Pms2 duyuları DNA hasar düzeyleri ve DNA hasarı aşırı apoptozis geçmesi hücreleri neden olur.) Böylece, Pms2 bir eksikliği ERCC1 eksikliği hücreleri DNA hasarı maruz kaldıklarında için seçilir. Ebeveyn hücreler daha UV ile ışınlanmış ERCC1 ve Pms2 hem de kusurlu Klonlar 500 ila 1000 kat daha fazla mutasyon oranı ile ilgili olduğu gösterilmiştir. </li><li> Safra asitleri, oksidatif strese neden olan DNA zarar ajanlar ve kolon kanseri ilerlemesinde önemli Deoxycholic asit, safra asidi, mitokondri 10 zarar da dahil olmak üzere çoklu süreçleri, reaktif oksijen türleri (ROS) üretimi ile oksidatif stres artar. ROS epigenetik değişikliklerin neden 11 ve en az 15 çalışma, yüksek yağlı diyet ile birlikte artan konsantrasyonlarda, safra asitleri, DNA hasarı 12 neden olduğunu göstermiştir son kanıt yoktur. Bernstein ve arkadaşları tarafından yorumlanan 12, diyetsel yağ tüketimi ve kolon kanseri insidansı arasında pozitif bir ilişki vardır. Safra asitleri, diyet yağ yanıt bağırsak içine salgılanan ve safra asitleri, deterjan, yağ sindirime yardımcı olarak hareket. Böylece, yüksek yağlı diyet artan safra asit salgılanması ile ilişkilidir. Fekal safra asidi, kolon kanseri insidansının yüksek olduğu popülasyonlarda yüksek, safra asitleri aşırı maruz kalma ve 13 karsinogenez kolon için önemli bir risk faktörü olarak kabul edilir. Safra asitleri kolon alanı defektleri nedeni olabilir. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1931/1931fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2, 3 kript içine kolon crypt fissioning . Sonuç Biz kolon kanserleri çevresindeki geniş alanı defektleri DNA tamir genleri ERCC1 ve Pms2 (Pms2 apoptozis için de gereklidir) eksik kript yüksek frekanslı bulundu. Yetersizlikleri ERCC1 ve Pms2 (epigenetik değişimler veya mutasyonlar, nedeniyle), kolon kanseri ilerleme merkezi genetik bir istikrarsızlık erken adımlar olabilir.

<table><tbody><tr><td>PMS2 antikoru</td><td>BD Biosciences</td><td>556415</td><td></td></tr><tr><td>ERCC1 antikoru</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>MS-671-P1</td><td></td></tr><tr><td>Ku86 antikoru</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>SC-9034</td><td></td></tr><tr><td>CcO1 antikoru</td><td>Invitrogen</td><td>459600</td><td></td></tr><tr><td>Biotinile sekonder antikor</td><td>Dako</td><td>E0413</td><td></td></tr><tr><td>22% BSA</td><td>Informagen, Inc.</td><td>2327</td><td></td></tr><tr><td>Sniper</td><td>Biocare Medical</td><td>BS966</td><td></td></tr><tr><td>Vectastain ABC</td><td>Vector Laboratories</td><td>PK-6100</td><td></td></tr><tr><td>DAB</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>34001</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>USB Corp., Affymetrix</td><td>20605</td><td></td></tr><tr><td>Cytoseal XYL</td><td>VWR international</td><td>48212-196</td><td></td></tr><tr><td>Trizma</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td></td></tr></tbody></table>

eksik pms2 ercc1, ku86 kolon kanseri ilerleme sırasında alan kusur ccoi

Deficient Pms2, ERCC1, Ku86, CcOI in Field Defects During Progression to Colon Cancer

Karsinogenez, &quot;alanı defekti&quot; kurtulanların Yakın bir yerde sık sık aynı doku tipi, diğer malignitelerin geliştirmek için bazı kanserlerin yüksek eğilimi nedeniyle klinik olarak kabul edilmektedir. Bu alanı defektleri, kolon kanseri belirtilmiştir. Kolonda bir alanı defekti sorumlu moleküler anormallikleri, yüksek frekansta bir kolon adenokarsinomu çevreleyen veya ileri neoplazi (kolon kanseri yolda) ile bir adenom çevreleyen histolojik olarak normal doku algılanabilir, ama düşük frekanslı kolonik neoplazi olmayan hastalarda kolon mukozasında. Immünohistokimya kullanarak, kolon adenokarsinomların veya ileri düzey kolon neoplaziler her tarafında 10 cm içinde tüm kript iki DNA onarım proteinler, Pms2 ve / veya ERCC1 için sık sık azaltılmış veya ifade yok olduğu tespit edildi. Pms2 ikili bir rolü protein, DNA uyumsuzluğu onarım yanı sıra aşırı DNA hasarı ile hücrelerin apoptozis gerektiği gibi aktif. DNA nükleotid eksizyon tamir ERCC1 aktiftir. ERCC1 ve Pms2 hem de düşük ya da hiç bir ifade, hayatta kalmak için yüksek yeteneği (apoptozis direnci) ve değişkenliktir artan düzeyde hem hücreleri yaratacak. ERCC1 ve Pms2 hem de düşük ya da hiç bir ifade, büyük olasılıkla, kolon kanseri ilerleme erken bir adımdır. DNA tamir geni Ku86 (DNA aktif homolog olmayan katılmadan sonu) ve Sitokrom c oksidaz Altbirim (apoptozis dahil) her kolon kanserleri yakın mukozal alanlarda ifade azalma olduğu bildirilmiştir vardı. Ancak, ifade düzeylerinin yetersiz olması, kolon kanseri çevreleyen ya da ileri kolonik neoplazi çevreleyen alanı defekti ifade kript mütevazı frekansları immünohistokimyasal değerlendirme sadece düşük gösterdi. Biz burada, show, ERCC1, Pms2, Ku86 ve CcOI ifade kript değerlendirilmesi yöntem. Sıklığı Ku86 eksikliği kriptler kript% 2 ve frekans medyan değeri vardır, biz Pms2 için tüm eksik kript bu frekans ve ERCC1 genellikle 20 cm kolonik neoplazi çevreleyen uzun alanlarda% 70% 95 gibi büyük CcOI eksikliği, bu alanlarda% 16, medyan değeri vardır. Tüm kolon, 150 cm uzunluğunda (yaklaşık 5 metre) ve mukoza tabakası, yaklaşık 10 milyon kript vardır. Kolon kanseri çevreleyen Pms2 ve ERCC1 kusur böylece 1 milyon kript içerebilir. Kolon kanserinin ortaya çıktığı bir arızalı crypt.

Pms2 ve / veya bütün kript olarak ERCC1 Küçültülmüş / eksik ifade kolon adenokarsinomların, muhtemelen yüksek değişkenliktir ve kanser ilerleme alanı defekti temelinde her iki tarafında 10 cm içinde sık rastlanan bir olaydır. Ku86 veya CcOI eksikliği, bu alanı defektleri çok daha az sık.

Eksik Pms2 ERCC1, Ku86 Kolon Kanseri ilerleme sırasında Alan Kusur CcOI

Karsinojenezde "alan defekti", belirli kanser türlerinden kurtulan kişilerin diğer kanserleri geliştirme eğiliminin yüksek olması nedeniyle klinik olarak tanınmaktadır...

deficient-pms2-ercc1-ku86-ccoi-field-defects-during-progression-to

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Primer fare kolon tümörü organoid kurmak için basit bir yöntem açıklanmıştır. Bu yöntem kolon tümör hücreleri hayatta kalmak ve epitel normal bir kolon yok ise, sınırlı büyüme faktörleri içeren ortamlarda organoids içine büyümeye bu özelliği kullanır.

Birincil Fare Colon Tümörler in vitro organoid Kültür

Farelerin potansiyel DNA zarar verici ajanlara maruz kalmasından sonra somatik kolonik kök hücre mutasyonlarının tekrarlanabilir ölçümü için önemli gelişmeler bildiriyoruz.

Kolon Kök Hücre Mutasyonların Kantitasyonu

Segmental adeno-cre enfeksiyonu ile genetik olarak tasarlanmış kolorektal kanserli fare modeli kurulması ve yüksek çözünürlüklü kolonoskopi ile gözlemlenmesi için bir protokol sunulmuştur.

Sporadik Kolorektal Kanserin Genetik Olarak Geliştirilmiş Fare Modeli

Sunulan tanısal FL-DNA kiti kolorektal kanser lezyonlarının varlığı güvenilir olasılığını belirlemek için zaman kazandıran ve kullanıcı dostu bir yöntemdir.

Kolorektal Kanser Riski ve Yaygınlığının Dışkı DNA Bütünlüğü Saptanması ile Değerlendirilmesi

Bu protokol, Caco2 kolon adenokarsinom hücrelerinden üç boyutlu küreseller üretmek ve yetiştirmek için yeni, sağlam ve tekrarlanabilir bir kültür sistemi sunar. Sonuçlar, kemoterapiye yanıt da dahil olmak üzere kanser kök hücre biyolojisini incelemek için bu yaklaşımın uygunluğu için ilk kavram kanıtını sağlar.

Kolon Kanseri Kök Hücrelerini İncelemek İçin Üç Boyutlu Bir Küresel Model

Çalışma, ameliyat sonrası çoklu primer kolorektal kanser (MPCC) hastalarında erkek cinsiyet, zayıf tümör derecesi ve ileri Tümör Nodu Metastazı evresinin daha kötü kansere özgü sağkalım (CSS) ile ilişkili olduğunu buldu. MPCC hastalarının CSS'sini tahmin etmek ve klinik tedavi karar verme sürecine katkıda bulunmak için bir nomogram geliştirdik.

Ameliyat Sonrası Çoklu Primer Kolorektal Kanser Hastalarında Kansere Özgü Sağkalımı Tahmin Etmek için Rekabet Riski Nomogramı

Sunumun Amaç, kıkırdak defektleri, MR görüntüleme ile görüntülendi olabilir matris ilişkili kök hücre implantları üretmek için son derece tekrarlanabilir bir yöntem göstermektir. Kök hücreler, agaroz ile karışık FDA onaylı Ferumoxides, kıkırdak hasarlarının içine implante edilerek 7T MR tarayıcı ile görüntülü olarak etiketlenir.

Ferumoxides implantasyonu Kıkırdak Kusur İnsan Mezenkimal Kök Hücreler Etiketli

Bu protokol, egzersiz ve spor bilimleri odaklanan araştırmacılar egzersizleri büyük bir çeşitlilik sırasında toplam enerji harcaması için üç farklı enerji sistemlerinin göreceli katkısı belirlemenize olanak sağlar.

Egzersiz sırasında Enerji Sistemlerinin Katkısı Belirlenmesi

Kazanç ya da kayıp fonksiyon-arabuluculuk lentivirüs kullanarak bir saç kökü yenilenme modeli Doku özgü analizi.

Saç Rejenerasyon sırasında epitelyal-mezenkimal Sinyal Rapid Genetik Analizi

Burada apoptotik hücre boşluk dinamikleri eğitim için etkili bir yöntem...

Apoptotik hücresi Temizliği görüntülenmesi sırasında Canlı<em&gt; Drosophila</em&gt; Embriyo

Öğrenin kolon kanseri ilerlemesinde alan kusurunu değerlendirmek için Pms2 ve ERCC1 DNA onarım proteinlerinin immünohistokimyasal analizini. Bu yöntem erken kanser belirteçlerini tanımlamaya yardımcı olur.

Eksik Pms2 ERCC1, Ku86 Kolon Kanseri ilerleme sırasında Alan Kusur CcOI

Daha fazla video keşfet