Name: Kronik Salmonella Infected Fare Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-31T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Öğrenin, farelerde kronik Salmonella typhimurium enfeksiyon modeli kurma yöntemini. Streptomisin ön tedavisi ve gavage ile bağırsak kolonizasyonunu 27 haftaya kadar izleyin. Bu model, uzun süreli bakteri-konak etkileşimlerini ve patogenez mekanizmalarını incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma NIDDK KO1 DK075386 hibe ve Amerikan Kanser Derneği Haziran Sun RSG-09-075-01-MBC tarafından desteklenmiştir.

Bakteri kültürü, fare sonda ve Salmonella tespiti: Bu protokol, üç porsiyon içerir . 1. Salmonella büyüme durumdur. <ol><li> ° C gecede 37 inkübe Salmonella Luria Bertani suyu (LB) plaka hazırlayın. </li><li> LB plaka seçin ve bir klon, 7 ml LB, 12 ml tüp içine koyun ve 37 ° C'de yaklaşık 5 saat boyunca sallamak. </li><li> 37 ° C'de yaklaşık 18 saat sallayarak olmadan sabit bir faz kültür ve inkübe 0.05 ml, 50 ml LB inoküle edin. </li><li> HBSS bakteri oranı 100:3 (HBSS LB) kullanarak askıya alma, 10 dakika boyunca 6000 rpm ile oda sıcaklığında bir gecede bakteri kültürü dönerler. Örneğin: Her 50 ml LB kültür, 1.5 ml HBSS askıya alınacaktır. </li><li> Hayvan gavaj için 1:10 oranında daha fazla bakteri kültürü sulandırmak. Örneğin: Her 1.5 ml LB kültür 15 ml HBSS askıya alınacaktır. </li></ol> 2. Salmonella enfeksiyonu modeli *. <ol><li> Streptomisin çözüm hazırlayın. Her fare 100 ul HBSS 7.5 mg streptomisin verilecektir. Örneğin, 10 fareler için 1.2 ml HBSS toplam 90 mg streptomisin hazırlamak. Streptomisin çözümü hazırlarken her zaman bazı ekstra hacim var. </li><li> 4 saat ağızdan sonda ile tedavi öncesi su ve yiyecek çekin. </li><li> Streptomisin (100 kontrol fareler için HBSS ul), 7.5 mg streptomisin ile sonda fareler. Işaret parmağı ile baş ve boyun, yemek borusu düz yapmak için streç, fare omzunun üzerinden cilt başparmak ve orta parmağı ile sıkıca tut. Doğrudan çatı boyunca ağız ve yutak arka sağ tarafına doğru beslenme iğne ucu top, sonra yavaşça aşağı özofagus içine geçmesi ve 100 ul çözüm enjekte. Direnç hissedilir olmalıdır. </li><li> Streptomisin tedavisi, çekilen su ve bakteriler ile enfekte fareler daha önce yemek sonra 20 saat. </li><li> HBSS 100 ul süspansiyon her fare sonda veya ağızdan sonda ile steril HBSS (kontrol) ile tedavi. Gavaj prosedür streptomisin ile aynı) 2.3 sonda fareler. </li></ol> * Hayvan deneyleri, özel-patojen-free kadın C57BL / 6 farelerin önceden 1'de açıklandığı gibi, 6-7 hafta eski (Taconic, Hudson, NY) ile yapıldı . Protokol Hayvan Kaynakları (UÇAR) University of Rochester Üniversitesi Komitesi tarafından onaylandı. 3. Bağırsak Salmonella tespiti. <ol><li> (Yaklaşık 100 mg), fare fekal toplayın. </li><li> Fekal örnek şiddetle 1ml PBS ve vorteks ile 1.5 mikro santrifüj tüpüne aktarın. </li><li> 800 rpm'de 10 dakika santrifüj. Süpernatant temiz bir mikrofuge'de boru içine aktarın. </li><li> 5min için 6000 rpm santrifüj. Süpernatant atılır ve 200 mcL PBS pelet eklendi ve vortekslenmiş. </li><li> Salmonella tespit etmek için bir BBL CHROMagar plaka üzerinde bir tek hücre dağıtıcısı Streak 200 ul PBS Salmonella (mor gül, Şekil 1) leylak rengi görünür. 200 ul verim Eğer plaka üzerinde bir çok koloniler, 100 ul veya çizgi için 50 ul kullanın. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar. Protokol doğru yapıldığında, Salmonella typhimurium kolonizasyon 6 ay içinde farenin bağırsak tespit edilebilir. Salmonella 6 ay (Şekil 1) üzerine dışkı kültürü ile tespit edilebilir. Tipik bir çıkış bu model gelir kaybı ve ölüm gibi, vücut 4 hafta enfeksiyonu içinde meydana gelen tartın. Salmonella enfeksiyonu için kullanılan bağlı olarak, bazı fareler hiçbir 6 ay içinde yaşayabilir. <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Bağırsak Salmonella Salmonella seçilen kromojenler varlığı metabolik farklılıklar nedeniyle, renk (mor gül) leylak rengi görünür. Diğer bakteri ya inhibe veya mavi-yeşil renkli veya renksiz koloniler oluşturur. <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2. Salmonella mutant suşu PhoP c, PhoP c ile enfekte farelerde Survival oranlarda Avra-ve PhoP c AvrA-/AvrA + 4 hafta (28 gün) PhoP c Avra. Tablo 1: 4 hafta boyunca Salmonella ile enfekte farelerde vücut ağırlığı. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> 0 </td><td> 1 hafta </td><td> 2 hafta </td><td> 3 hafta </td><td> 4 hafta </td></tr><tr><td> kontrol </td><td> 16.78 ± 1.05 </td><td> 16,91 ± 1,28 </td><td> 18,26 ± 1,23 </td><td> 19.31 ± 1.26 </td><td> 20,26 ± 1,15 </td></tr><tr><td> PhoP c </td> 16.89 ± 1.03 <td> 17.14 ± 1.19 </td><td> 17.43 ± 1.63 * </td><td> 18.68 ± 1.78 </td><td> 20.05 ± 1.11 </td></tr><tr><td> PhoP c Avra- </td><td> 16,91 ± 1.12 </td><td> 16.96 ± 1.39 </td><td> 17.06 ± 2.14 ** </td><td> 18.71 ± 2.18 </td><td> 20.15 ± 1.56 </td></tr><tr><td> PhoP c AvrA-/AvrA + </td><td> 16,94 ± 0,96 </td><td> 17.17 ± 1.02 </td><td> 17.63 ± 1.42 * </td><td> 18,44 ± 2.03 </td><td> 20.09 ± 1.17 </td></tr></tbody></table> * Grup p &lt;0.05 kontrol etmek için karşılaştırıldığında ** Grup p &lt;0.01 kontrol ile karşılaştırıldığında Tablo 2'de bu çalışmada kullanılan Salmonella. <table border="1"><tbody><tr><td> Isim </td><td> Tanım </td><td> Referans veya kaynak </td></tr><tr><td> Salmonella 14028s </td><td> Wild-tip S. typhimurium </td><td> ATCC </td></tr><tr><td> PhoP c </td><td> Mutant patojen olmayan karmaşık regülatörü </td><td> Miller ve ark, 1990 </td></tr><tr><td> PhoP c Avra- </td><td> Avra-mutasyon </td><td> Collier-Hyams ve ark, 2002 </td></tr><tr><td> PhoP c AvrA-/AvrA + </td><td> PhoP c tamamlanmaktadır plazmid kodlama Avra Avra- </td><td> Collier-Hyams ve ark, 2002 </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Duan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((beta-Catenin+activity+negatively+regulates+bacteria-induced+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">beta-Catenin activity negatively regulates bacteria-induced inflammation.</a> Lab Invest. 87 (6), 613-624 (2007).</li>
<li>Barthel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretreatment+of+mice+with+streptomycin+provides+a+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+colitis+model+that+allows+analysis+of+both+pathogen+and+host%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Pretreatment of mice with streptomycin provides a Salmonella enterica serovar Typhimurium colitis model that allows analysis of both pathogen and host.</a> Infection and immunity. 71 (5), 2839-2858 (2003).</li>
<li>Miller, S. I., Mekalanos, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constitutive+expression+of+the+phoP+regulon+attenuates+Salmonella+virulence+and+survival+within+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+bacteriology%22%5BJournal%5D)">Constitutive expression of the phoP regulon attenuates Salmonella virulence and survival within macrophages.</a> Journal of bacteriology. 172 (5), 2485-2490 (1990).</li>
<li>Valdez, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nramp1+expression+by+dendritic+cells+modulates+inflammatory+responses+during+Salmonella+Typhimurium+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Nramp1 expression by dendritic cells modulates inflammatory responses during Salmonella Typhimurium infection.</a> Cell Microbiol. 10 (8), 1646-1661 (2008).</li>
<li>Woo, H., Okamoto, S., Guiney, D., Gunn, J. S., Fierer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+Salmonella+colitis+with+features+of+diarrhea+in+SLC11A1+wild-type+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A model of Salmonella colitis with features of diarrhea in SLC11A1 wild-type mice.</a> PLoS ONE. 3 (2), e1603-e1603 (2008).</li>
<li>Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+call-and-response%3A+how+Salmonella+learns+the+gospel+from+its+host%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Molecular call-and-response: how Salmonella learns the gospel from its host.</a> Trends Microbiol. 11 (6), 245-246 (2003).</li>
<li>Zaharik, M. L., Vallance, B. A., Puente, J. L., Gros, P., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-pathogen+interactions%3A+Host+resistance+factor+Nramp1+up-regulates+the+expression+of+Salmonella+pathogenicity+island-2+virulence+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Host-pathogen interactions: Host resistance factor Nramp1 up-regulates the expression of Salmonella pathogenicity island-2 virulence genes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99, 15705-15710 (2002).</li>
<li>Townsend, P., Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Animal+Care+Policies+and+Regulations%3A+United+Kingdom%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Laboratory Animal Care Policies and Regulations: United Kingdom.</a> ILAR J. 37 (2), 68-74 (1995).</li>
<li>Olfert, E. D., Godson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humane+endpoints+for+infectious+disease+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Humane endpoints for infectious disease animal models.</a> ILAR J. 41 (2), 99-104 (2000).</li>
<li>Ye, Z., Petrof, E. O., Boone, D., Claud, E. C., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonella+effector+AvrA+regulation+of+colonic+epithelial+cell+inflammation+by+deubiquitination%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Salmonella effector AvrA regulation of colonic epithelial cell inflammation by deubiquitination.</a> Am J Pathol. 171 (3), 882-892 (2007).</li>
<li>Grassl, G. A., Valdez, Y., Bergstrom, K. S., Vallance, B. A., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+enteric+salmonella+infection+in+mice+leads+to+severe+and+persiste+nt+intestinal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Chronic enteric salmonella infection in mice leads to severe and persiste nt intestinal fibrosis.</a> Gastroenterology. 134 (3), 768-780 (2008).</li>
<li>Sukupolvi, S., Edelstein, A., Rhen, M., Normark, S. J., Pfeifer, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+murine+model+of+chronic+Salmonella+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Development of a murine model of chronic Salmonella infection.</a> Infection and immunity. 65 (2), 838-842 (1997).</li>
<li>Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL). , Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention and National Institutes of Health. (2007).</li>
<li>Wu, S., Lu, R., Zhang, Y., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+effects+of+a+Salmonella+type+III+secretion+effector+protein+AvrA+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Chronic effects of a Salmonella type III secretion effector protein AvrA in vivo.</a> PLoS ONE. , Forthcoming (2010).</li>
</ol>

Bu sistemi kullanabilmek için araştırmacının hayvanlara gavage (zorlu besleme) yapmayı öğrenmesi gerekmektedir. Bakteriyel kültür hazırlama ve farelere gavage uygulama yöntemini detaylandırıyoruz. Ayrıca, gastrointestinal (GI) kanaldaki Salmonella kalıcılığının nasıl izleneceğini gösteriyoruz. Bu protokoldeki kritik adımlar şunlardır: <ol> <li>Streptomisin ön işlemi: Streptomisin ön işlemi, bazı kommensal bağırsak florasını ortadan kaldırabilir ve fareleri Salmonella enfeksiyonuna duyarlı hale get...

<table><tbody><tr><td>HBSS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>ABCD1234</td><td></td></tr><tr><td>Luria-Bertani besiyeri</td><td>BD Biosciences</td><td>244610</td><td></td></tr><tr><td>Besleme iğnesi</td><td>Popper &amp;amp; Sons, Inc.</td><td>7920</td><td></td></tr><tr><td>Streptomisin</td><td>MP Biomedicals</td><td>100556</td><td></td></tr><tr><td>BBL CHROMagar &lt;em&gt;Salmonella&lt;/em&gt;</td><td>BD Biosciences</td><td>214983</td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık hücre yayma çubukları</td><td>Biologix Research Company</td><td>65-1010</td><td></td></tr></tbody></table>

kronik salmonella infected fare modeli

Chronic Salmonella Infected Mouse Model

Bakteri enfekte fare modelinde, enfeksiyon, enflamasyon, immünoloji, sinyal iletimi, ve tümörogenez gibi alanlarda çalışmak için güçlü bir model sistem. Birçok araştırmacı tarafından uyarılan kolit avantajı almış<em&gt; Salmonella</em&gt; Inflamasyon ve enfeksiyon erken faz çalışmaları için typhimurium. Ancak, sadece birkaç raporlar kronik enfeksiyon<em&gt; In vivo</em&gt;. Ile Fare<em&gt; Salmonella</em&gt; Gastrointestinal sistem kalıcı varlığını bize uzun vadeli ev sahibi-bakteriyel etkileşimi, sinyal iletimi, ve tümörogenez keşfetmek için izin verir. Biz bir kronik bakteriyel enfekte fare modeli kurduk<em&gt; Salmonella</em&gt; 6 ay içinde fare bağırsakta typhimurium kolonizasyon. Bu sistemi kullanmak için, araştırmacı bakteri kültürü hazırlamak ve hayvanların gavaj öğrenmek için gerekli. Hazırlamak bakteri kültürü ve sonda fareler için detay bir metodoloji. Biz de tespit etmek için nasıl<em&gt; Salmonella</em&gt; Gastrointestinal sistem sebat. Genel olarak, bu protokol, temelde önemli biyolojik ve mikrobiyolojik soruları yanıtlamak için bakteri enfekte fare modeli kullanılarak araştırmacılar yardımcı olacaktır.

Kalıcı kronik bakteriyel enfekte fare modelinin oluşturulması<em&gt; Salmonella</em&gt; 27 hafta boyunca bağırsak kolonizasyonu typhimurium.

Kronik Salmonella Infected Fare Modeli

Bakteriyel enfeksiyonlu fare modeli; enfeksiyon, inflamasyon, immünoloji, sinyal iletimi ve ... gibi alanların incelenmesi için güçlü bir model sistemidir.

Bu prosedürün genel amacı, kronik salmonella enfeksiyonu olan bir fare modeli oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle bir salmonella solüsyonu hazırlanarak gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı ise farelere streptomisin ardından salmonella veya sadece streptomisin şeklinde gavage uygulanmasıdır.Prosedürün üçüncü adımı, fare dışkısından salmonella izole etmek ve BL chroma plakları kullanarak fare bağırsağındaki salmonella enfeksiyonunu tespit etmektir. Prosedürün son adımı ise farenin vücut kütlesini gözlemleyip kaydetmek ve salmonella enfeksiyonu sonrası canlılıktaki değişiklikleri not etmektir. Nihayetinde, salmonella gavajı yapılan farelerin bağırsağında salmonella enfeksiyonunun oluşabildiğini gösteren sonuçlar elde edilebilir.Merhaba, ben Rochester Üniversitesi Tıp Bölümü'ndeki Dr. Johnson'ın laboratuvarından Michelle P. Ben de Sun Laboratuvarı'ndanım ve ben de Sun Laboratuvarı'ndan Y. Bugün size Alytic Lennar enfekte kütle modelinin oluşturulması prosedürünü göstereceğiz.Laboratuvarımızda konak bakteri etkileşimi sinyal iletimini ve tümör oluşumunu incelemek için bu prosedürü kullanıyoruz. Öyleyse başlayalım. Deneyden önce, her Salmonella suşu için ve deney boyunca kullanmak üzere yeterli miktarda luria, berti veya LB besiyeri plakları hazırlayın.Plakalar soğutulabilir ve birkaç ay boyunca saklanabilir. Ardından, salmonella kültürü hazırlayın. -80 °C'de dondurulmuş bir stok salmonella tüpünü çıkarın ve salmonella ekimi yapabilmek için tezgah üzerinde çözülmeye bırakın.Bir ekim özesini bek ve bek burner'da sterilize edin ve çözülmüş bakteri stokuna daldırın. Özeyle LB plağının üst üçte birlik kısmına zig-zaglar çizerek ekim yapın. Özeyle tekrar alevle sterilizasyon yapın ve plağı döndürün.Önceki çizgileri kesecek şekilde özi döngüsel hareketlerle (zigzag çizerek) bakteri kolonilerini plağın ikinci üçte birlik kısmına yayın. İşlemi bir kez daha tekrarlayın. Öziyi tekrar alevle sterilize edin.Özen ekinin agara batmamasına dikkat edin. Plakaları bir gece boyunca 37 °C'lik bir inkübatörde saklayarak kolonilerin büyümesini sağlayın. İşlem doğru yapıldıysa, salmonella plağının en az bir bölümünde tekil koloniler oluşmalıdır.Ertesi gün. Steril bir kürdan veya bakteri özesi kullanarak LB plakasından bir klon seçin ve 12 ml'lik bir tüp içindeki 7 ml LB'ye aktarın. Tüpü 37 °C'de yaklaşık beş saat boyunca çalkalayın.İnokülasyon için bu kültürden 0.05 milliliters kullanın. Bir Falcon tüpündeki 50 milliliters LB'ye ekleyin. Yaklaşık 18 saat boyunca 37 degrees Celsius'ta çalkalamadan inkübe edin.50 mililitre bakteriyel gece boyu kültürü oda sıcaklığında 5.000 RPM'de 10 dakika boyunca santrifüjleyin ve süpernatantı atın. Ardından, bakterileri yeniden süspanse etmek için tüpe 1,5 mililitre Hank's tamponlu tuz çözeltisi veya HBSS ekleyin ya da 100 birim LB'ye 3 birim HBSS ekleyin. Daha sonra, HBSS ile toplam hacmi 15 mililitreye tamamlayın veya LB ile HBSS oranını 1'e 10 yapın.Her bir fare için, gavage işlemine başlamadan önce 100 µL seyreltilmiş salmonella kültürü veya 1 × 10⁶ ile 1 × 10⁸ arası koloni oluşturan birim gereklidir; farelerin su ve yem erişimi deneyden dört saat önce kesilmelidir. Ardından, 7,5 mg toz streptomisini 100 µL HBSS içinde seyrelterek gavage işleminden hemen önce bir streptomisin çözeltisi hazırlayın. Enjekte edilen her fare için, gavage öncesindeki kayıpları telafi etmek amacıyla bir miktar fazla hacim hazırladığınızdan emin olun.İlk olarak, bir besleme iğnesini 100 µL streptomisin çözeltisi ile hazırlayın. Sondaj yapılacak ilk fareyi kafesten çıkarın ve fareyi tezgah üstüne doğru bakacak şekilde tutun. Fare omuz üzerindeki deriyi baş ve boyun bölgesini işaret parmağıyla gererek, özofagusu düzleştirmek için baş ve orta parmakla sıkıca kavrayın.Besleme iğnesinin küresel ucunu ağız tavanı boyunca farinksin arka kısmının sağ tarafına doğru yönlendirin. Ardından, ucu nazikçe özofagusa indirin ve 100 µL streptomisin solüsyonunu enjekte edin. Herhangi bir direnç hissedilmemelidir.Bu işlemi, deneye tabi tutulan tüm deneysel ve kontrol fareleri için tekrarlayın. Streptomisin ve gentamisin gavajından yaklaşık 20 saat sonra ve salmonella gavajından dört saat önce, oral yolla salmonella gavajı yapılacak farelerin su ve yemini geri çekin. Her fareye, HBSS içinde 100 µL salmonella çözeltisi kullanarak daha önce olduğu şekilde gavaj uygulayın.Gavage işleminden sonra, dışkı toplamaya başlamak için her fareyi yeni bir kafese aktarın. Gavage'dan yaklaşık sekiz saat sonra başlayarak, dışkı maddelerini kafese düştükleri anda hemen alın. Deneysel örnek olarak 100 mg fare dışkısı toplayın.Fekal madde salmonella analizi için, çalışma süresine bağlı olarak günlük veya haftalık örnekler toplayın. Fekal örneği, 1 mL PBS içeren 1,5 mL'lik bir mikro santrifüj tüpüne aktarın ve kuvvetlice vorteksledikten sonra 800 RPM'de 10 dakika boyunca santrifüjleyin. Süpernatanı temiz bir 1,5 mL'lik tüpe aktarın ve 6.000 RPM'de beş dakika boyunca santrifüjleyin.Süpernatantı atın ve peletleri yeniden süspanse etmek için üzerine 200 µL PBS ekleyip vorteksleyin. Ardından, BB l roag plakası ile salmonella tespiti yapın. Bölüm ikide gösterildiği gibi, plaka başına 10 ile 100 µL dışkı çözeltisi kullanın ve plaka üzerine yayın.Seçilmiş kromojenlerin varlığındaki metabolik farklılıklar nedeniyle salmonella türleri bordo renkte görünür. Bireysel fareler arasındaki enfeksiyon seviyesini karşılaştırmak için plaka üzerindeki salmonella kolonilerini sayın. Bu deneysel prosedürde, altı ila yedi haftalık, spesifik patojen içermeyen dişi C 57 black six fareler kullandık.Fareler salmonella ve streptomycin artı HBSS ile enfekte edildi. Kontrol grubu farelere sadece streptomycin ile gavage uygulandı. Kullanılan salmonella suşları arasında salmonella typhimurium vahşi tip suşu, A TCC 1 4 0 2 8 S FP C, patojenik olmayan salmonella mutant suşu ve Dr. James Madera'nın laboratuvarından, düşük kopya plazmid olan PSKW 29 içinde virülansla ilişkili AAV R age geni taşıyan üç FPC suşu yer almaktadır. Bu protokol kullanılarak, fare bağırsağında salmonella tyrian kolonizasyonu tespit edilebilir.Kronik salmonella enfeksiyonu, dışkı analizi ile ölçülmüş; immunofloresan boyama için vücut ağırlığı ve bağırsak doku örnekleri toplanmıştır. Genellikle enfeksiyon sonrası dört hafta içinde vücut ağırlığında kayıp ve ölüm meydana gelir. Enfeksiyon sonrası dördüncü haftadaki sağkalım oranları burada gösterilmiştir.Fareler enfeksiyondan sonraki dört haftayı atlattıktan sonra vücut ağırlıkları artar ve kalan 23 hafta boyunca ölüm vakaları azalır. Genel olarak, salmonella suşları FSY fsy, A VRA null veya fsy. A VRA heterozigot ile enfekte olan farelerin %65'inden fazlası, bağırsakta kalıcı salmonella enfeksiyonu ile altı aydan fazla yaşayabilir.Akut enfeksiyondan sonra, hayatta kalanlar halen salmonella taşıyordu ve bu durum, enfeksiyondan altı ay sonra bu protokolde açıklanan yöntem kullanılarak tespit edilebildi. Fare bağırsağından alınan doku örneklerinin immünofloresan analizi, enfeksiyondan 27 hafta sonra bağırsak mukozasında salmonella invazyonunu göstermektedir. Bu görüntüde, çekirdekler maviye boyanmış ve salmonella enfeksiyonu olan bölgeler yeşil renkte gösterilmiştir.Kontrol grubunda görüldüğü üzere, salmonella kolonizasyonu olmadığını gösteren herhangi bir parlak yeşil boyanma yoktur. Buna karşın, enfeksiyondan 27 hafta sonra salmonella ile enfekte edilen farelerde, intestinal mukozada parlak yeşil boyanma mevcuttur. Bu durum, streptomisin ile ön işlem görmüş farede salmonella enfeksiyonunun kalıcılığını göstermektedir.Fare modelinde kronik enfeksiyonun nasıl indükleneceğini size göstermiş olduk. Bu prosedürü uygularken, bazı kültürlerin taze olarak hazırlanması gerektiğini, doğru pasajlama becerilerini kullanmayı ve deney modelinizin çalıştığından emin olmak için ANA varlığını tespit etmeyi hatırlamak önemlidir. Hepsi bu kadar.İzlediğiniz için teşekkür ederiz, deneylerinizde başarılar dileriz.

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Kaynak: Lo, B. C. ve diğerleri. Kronik Salmonella enfeksiyonu bağırsak fibrozisine neden olmuştur. J. Vis. Exp. (2019)Video, streptomisin dirençli Salmonella typhimurium ile kronik enfeksiyonun fare modelinde bakteriyel yükün nicelendirilmesini gösteriyor. Ötenazi ve steril diseksiyondan sonra, çek ve dalak dokuları toplanır, bakteriler salınmak için çelik boncuklarla homojenleştirilir ve seri olarak seyreltilir. Sulandırmalar seçici agar'da kaplanır ve görünür koloniler sayılır; böylece...

Kronik bağırsak enfeksiyonu fare modelinde doku bakteriyel yükünün nicelendirilmesi

Kaynak: Lenhard, A. ve diğerleri. Streptococcus pneumoniae'nin viral eş-enfeksiyon sonrası kolonizerden patojene geçişi için fare modeli, yaşa bağlı hastalığı özetliyor. J. Vis. Exp. (2022)Bu video, patojenik bir bakteri ve bir virüsle birlikte enfekte olan bir farenin akciğerlerinin işlenmesini gösteriyor. Akciğer dokusunun doğranması, homojenleştirilmesi ve kaplaması, bakteri yükünün nicelendirilmesini sağlar; bu da bakterilerin akciğerlere yayılmasını ve hastalığın şiddetini gösterir.

Fare Ortak Enfeksiyon Modelinde Bakteriyel Sayımı İçin Enfekte Dokuların İşlemi

Citrobacter rodentium enfeksiyonu enterik bakteriyel enfeksiyonlar çalışma yanı sıra farelerde bağışıklık yanıtları ve kolit barındırmak için değerli bir model sunar. Bu protokol bariyer bütünlüğünü, patojen yük ve murin infeksiyöz kolit patojen ve konak katkıların tam karakterizasyonu izin histolojik hasar ölçümü özetliyor.

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mouse Model: Bulaşıcı Kolit için çalışılması Patojen ve Host Katılımlar

Bu kağıt kullanılarak farenin oral enfeksiyonu için yeni bir yöntemi...

Sözlü İletim<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Kirlenmiş Gıda Yutma ile Farelerde

Hayvan modelleri kronik inflamasyon gelişimine katkıda konak ve patojen spesifik mekanizmaları tanımlarken paha biçilmez araçlardır olduğu kanıtlanmıştır. Burada, lokal ve sistemik inflamasyon bölgelerinde ilerlemesini değerlendirmek için insan patojeni Porphyromonas gingivalis ve detay metodolojileri ile ağızdan enfeksiyondan bir fare modeli tarif eder.

Lokal ve sistemik Yer de patojen kaynaklı kronik enflamasyon Fare Modeli

Bu protokol klinik olarak ilgili ve genetik uysal gerginlik, R20291 kullanarak Clostridium difficile enfeksiyonu (CDI) sefoperazon fare modeli özetliyor. Klinik hastalık izleme, C. difficile bakteriyel numaralandırma, toksin sitotoksisite ve bir fare modelinde CDI genelinde histopatolojik değişikliklere vurgu protokolde ayrıntılı olarak verilmiştir.

ve Cefoperazone-tedavi edilmiş fare modeli klinik olarak ilgili<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; Gerilme R20291

Bu iletişim kuralı kurmak ve 7 günlük eski farelerde neonatal sepsis değerlendirmek için gerekli adımları sağlar.

Yenidoğan Polymicrobial Sepsis için kontrollü fare modeli

Bu protokol, transmural inflamasyon ve fibrozis de dahil olmak üzere Crohn hastalığının önemli patolojik işaretleri benzer Salmonella tahrikli bağırsak fibrozis bir fare modeli açıklar. Bu yöntem, C57Bl/6 genetik arka planda tutulan mutant fareler kullanılarak fibrotik sonuçları değiştiren konak faktörlerinin değerlendirilmesi için kullanılabilir.

Kronik Salmonella EnfeksiyonuNa Bağlı Bağırsak Fibrozisi

Bu protokol, bir fare modeli sisteminde Gram-negatif monobakteriyel sepsisin indüksiyonunu açıklar. Model, sepsis sırasında inflamatuar ve ölümcül konakçı yanıtlarının araştırılmasında yararlıdır.

Farelerde Salmonella Typhimurium ile İndüklenen Septik Peritonitin Karakterizasyonu

Bu yazıda, viral enfeksiyon sırasında pnömokokların asemptomatik bir kolonizatörden hastalığa neden olan bir patojene geçişi için yeni bir fare modeli açıklanmaktadır. Bu model, hastalık progresyonunun farklı aşamalarında ve çeşitli konakçılarda polimikrobiyal ve konakçı-patojen etkileşimlerini incelemek için kolayca uyarlanabilir.

Streptococcus pneumoniae'nin Viral Ko-Enfeksiyon Üzerine Kolonizatörden Patojene Geçişi İçin Bir Fare Modeli, Yaşın Şiddetlendirdiği Hastalıkları Özetler

Öğrenin, farelerde kronik Salmonella typhimurium enfeksiyon modeli kurma yöntemini. Streptomisin ön tedavisi ve gavage ile bağırsak kolonizasyonunu 27 haftaya kadar izleyin. Bu model, uzun süreli bakteri-konak etkileşimlerini ve patogenez mekanizmalarını incelemek için kullanılır.

Kronik Salmonella Infected Fare Modeli

Daha fazla video keşfet