Name: Flaş Dondurma ve E12.5 Fare Beyin Cryosectioning (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 28 min 32 s
Description: Öğrenin fare embriyonik beyin dokusunun flaş dondurma ve kriyoseksiyon tekniklerini. OCT kullanımı, kriyostat ayarları ve yaygın sorunların çözümü ile kaliteli doku kesitleri elde edin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li> Istenilen zaman için PBS içinde% 4 paraformaldehid doku sabitleyin. </li><li> Sakkaroz demlenmeye doku (cryoprotection) <ol><li> 2059 tüp PBS w / v% 30 sakaroz çözeltisini olun. </li><li> PBS içinde doku 3x sallanan ile durulayın (~ 5 dk). </li><li> % 30 sukroz solüsyonu yerleştirin doku. Doku lavabo olmaz. </li><li> Batırdı, 4 ° C gecede kadar veya doku yerleştirin. </li></ol></li><li> Etiket uygun boyutu, bilgi ve yönlendirme ile cryomold. </li><li> (Baloncuklar önlemek) OCT ile cryomold doldurun. </li><li> Ekim banyo ve OCT ile kat doku transferi </li><li> Cryomold OCT doku aktarın. </li><li> Orient mikroskop altında doku. </li><li> Plastik Petri kabı içine sıvı nitrojen dökün. </li><li> Hızlı ve dikkatli bir şekilde azot içine cryomold doku düşüktür. (Üst cryomold daldırın.) </li><li> OCT beyaz katı olduğunda, -80 ° C derin dondurucu saklama için dondurulmuş doku içine yerleştirin. </li><li> ~ 20 ° C arası en az 30 dakika süreyle doku dengelenmesi. önce kesit. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Tissue-Tek Cryomold</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27181</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T.</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27050</td><td></td></tr><tr><td>Sükroz çözeltisi</td><td></td><td></td><td>PBS içinde %30'luk w/v sükroz çözeltisi</td></tr><tr><td>paraformaldehit</td><td></td><td></td><td>PBS içinde %4'lük paraformaldehit</td></tr></tbody></table>

flaş dondurma ve e12.5 fare beyin cryosectioning

Flash Freezing and Cryosectioning E12.5 Mouse Brain

<p class="jove_content">Bu video flaş fare embriyonik beyin dokusu dondurma ve kesit alma teknikleri vardır gösterdi. Ortaya çıkan doku bölümleri çatlak ve diğer çarpıtmalar olduğundan emin olmak için kesim sırasında kullanılabilir sorun giderme yöntemleri de dahil olmak üzere, Kriyostat kullanmak için yararlı ipuçları verilmiştir.</p>

Flaş Dondurma ve E12.5 Fare Beyin Cryosectioning

<p>Merhaba, ben Kaliforniya Üniversitesi Irvine kampüsünden ve Ed Maki Laboratuvarı'ndan Spencer Curley; size kriyoseksiyonlama işleminin nasıl yapılacağını göstereceğim. Bunun için öncelikle yaygın olarak kullanılan şu reaktifleri kullanıyorum. Kullandığım gömme bileşiği veya gömme ortamı, optimal kesme sıcaklığı anlamına gelen OCT'dir.</p><p>Berrak, oldukça yoğun ve viskoz bir çözeltidir; dokuyu yönlendirmeniz sırasında iyi bir şekilde tutar ve ardından donar; nihayetinde suda çözünür olduğu için her türlü boyama prosedürü sırasında kolayca uzaklaştırılabilir. Dokuyu bir kalıba gömüyorum. Bu kriyokalıp biyopsi kapları çeşitli boyutlarda bulunmaktadır.</p><p>Fare embriyonik dokusu çalıştığım için burada daha küçük olan bu kalıbı kullanacağım. Dokularımızı sıvı azot ile şok donduruyoruz. Bu yüzden önce, koruyucu vakumlu matrayı buradaki tankımızdan aldığım sıvı azot ile dolduracağım.</p><p>Dokuyu şok dondurmadan önce, dokunun kriyoproteksiyonu adı verilen işlemi gerçekleştirmeniz gerekir; aksi takdirde dondurma işleminin kendisi dokuya zarar verecektir. Bunun için dokuyu gece boyunca %30'luk bir sükroz çözeltisine batırın. Eğer bu işlem daha uzun sürerse sorun değil, yeter ki doku dibe çöksün.</p><p>Gördüğünüz g</p>

flash-freezing-and-cryosectioning-e125-mouse-brain

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video, tümör dokularından ayrı anatomik alanları veya belirli hücre popülasyonlarını izole etmek için bir farenin beyninin dondurularak saklanmasını göstermektedir. Bu teknik, sonraki analizler için beyin dokusu morfolojisinin optimal optik çözünürlüğünün elde edilmesinde kritik öneme sahiptir.

Murin Beyninin Çırpıda Dondurma ile Dondurularak Saklanması: Histolojik Analiz için Tüm Fare Beyni Örneğini Hızla Dondurma Tekniği

Bu videoda, donmuş bir fare beyin tümörü dokusunun bir kriyostat kullanılarak kesitini gösteriyoruz. Bu şekilde elde edilen donmuş beyin dokusu bölümleri, daha fazla analize kadar düşük sıcaklıklarda saklanır.

Donmuş Fare Beyin Dokusu Kesiti: Donmuş Murin Beyin Dokusundan İnce Donmuş Doku Kesitleri Elde Etme Prosedürü

Bu videoda, aşağı akış analizleri için donmuş fare beyin dokusu kesitlerinin hazırlanmasına yönelik ayrıntılı bir adım adım protokol gösterilmektedir.

Aşağı akış analizi için bir fare beyninin işlenmesi

Burada, donma ve beyin dokusu birden çok hayvanlardan tek beyin işleme için zaman kazandıran bir alternatif olarak bölüm için bir protokol mevcut. Bu immünhistokimya sırasında boyama değişkenliği azaltır ve zaman cryosectioning ve görüntüleme azaltır.

Birden çok kemirgen beyin aynı anda Cryosectioning

Bu prosedür, ucuz ve yaygın olarak kullanılabilir araçları kullanarak yüksek kaliteli protein ve RNA elde etmek için ayrık dondurulmuş beyin bölgelerinin toplanmasını açıklar.

Downstream Analizleri için Dondurulmuş Kemirgen Beyin Bölgeleri Koleksiyonu

Bu protokol, çok etiketli FISH ve floresan IHC sinyali elde etmek amacıyla hem taze dondurulmuş hem de sabit fare beyin bölümlerinde floresan in situ hibridizasyon (FISH) ve floresan immünohistokimyasını (IHC) birleştirmek için bir yöntemi açıklar. IHC, sitoplazmik ve membrana bağlı proteinleri hedefledi.

Multipleks Floresan <em>In Situ</em> Hibridizasyonun Floresan İmmünohistokimya ile Taze Dondurulmuş veya Sabit Fare Beyin Kesitlerinde Birleştirilmesi

Fare merkezi sinir sisteminin histolojik analizi için uygun bir yerçekimi beslemeli perfüzyon yöntemi sunulmaktadır. Fosforile α-sinükleinin immünofloresan tespiti, Parkinson hastalığının bir fare modelinde gösterilmiştir. Bu çalışma aynı zamanda transkardiyal perfüzyon, diseksiyon, doku dondurma/gömme ve dondurulmuş kesit adımlarını kapsamlı bir şekilde tanımlamaktadır.

Fare Merkezi Sinir Sisteminin Histolojik Analizi için Yerçekimi Beslemeli Transkardiyal Perfüzyon Yöntemi

Mevcut protokol, boyalar ve donmuş kesitler kullanarak viral izleme yapmadan önce stereotaksik enjeksiyon koordinatlarının doğrulama adımını hızlandırmak için pratik bir stratejiyi açıklamaktadır.

Kriyoseksiyon Yoluyla Stereotaksik Enjeksiyon Koordinatlarının Ön Doğrulaması

Bu çalışma, dekapitasyon, fiksasyon, kriyoseksiyon, floresan boyama, immün boyama ve görüntülemeyi içeren, konfokal ve multifoton görüntülemeye genişletilebilen basitleştirilmiş bir doku işleme protokolü sunmaktadır. Yöntem, gelişmiş motor becerilere olan ihtiyacı atlayarak karmaşık diseksiyonlarla karşılaştırılabilir etkinliği korur. Kantitatif görüntü analizi, kapsamlı bir araştırma potansiyeli sağlar.

Gelişmiş beyin floresan boyaması ve immün boyama için <em>Drosophila</em> kafalarının doğrudan kriyoseksiyonu

Retina, laminer yapısı boyunca karmaşık uzamsal organizasyon sergiler. Modern mekansal transkriptomik ve dizileme teknikleri, 20 μm kalınlığında doku kesitleri &lt; gerektirir ve bu da retinal araştırma uygulanabilirliklerini sınırlar. Bu taze dondurulmuş kriyoseksiyon yöntemi, düzlemsel uzamsal ilişkileri korurken fare retinasının ince yüz kesitlerini üretir ve laminalar arasında kapsamlı moleküler haritalama sağlar.

<em>En yüz</em> Yüksek Boyutlu Mekansal Moleküler Analiz için Fare Retinasının Kriyoseksiyonu

Bu protokol, kalın dokular için kriyo-elektron tomografisini (kriyo-ET) standartlaştırır; yüksek basınçlı dondurma (HPF) ile waffle yöntemi, kriyojenik odaklı ion ışını (kriyo-FIB) kaldırma ve doz-simetrik, paralel alım ile entegre edilir; böylece fare hipokampusunda tekrarlanabilir in situ analizi için uniform ince lameller ve vitrifikasyon örnekler elde edilir.

Fare Hipokampusunda Kalın Dokular İçin Kriyo-Elektron Tomografi İş Akışı Gösterildi

Öğrenin fare embriyonik beyin dokusunun flaş dondurma ve kriyoseksiyon tekniklerini. OCT kullanımı, kriyostat ayarları ve yaygın sorunların çözümü ile kaliteli doku kesitleri elde edin.

Flaş Dondurma ve E12.5 Fare Beyin Cryosectioning

Daha fazla video keşfet