Name: Hazırlanması Drosophila Işık Mikroskopi S2 hücreleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-03T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: Öğrenin Drosophila S2 hücrelerini ışık mikroskobisi için hazırlama yöntemini. Lectin kaplama, hücre yapışması ve immün boyama teknikleriyle gen fonksiyonlarını inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Ulusal Kanser Enstitüsü P30 CA23074, Amerikan Kanser Derneği Kurumsal Araştırma Bursu 74-001-31 ve Üniv tarafından desteklendi. Arizona GI SPOR (NCI / NIH CA9506O).

<ol><li>Schneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lines+derived+from+late+embryonic+stages+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Embryol+Exp+Morphol%22%5BJournal%5D)">Cell lines derived from late embryonic stages of Drosophila melanogaster.</a> J Embryol Exp Morphol. 27, 353-365 (1972).</li>
<li>Rogers, S. L., Rogers, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+Drosophila+S2+cells+and+their+use+for+RNAi-mediated+loss-of-function+studies+and+immunofluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Culture of Drosophila S2 cells and their use for RNAi-mediated loss-of-function studies and immunofluorescence microscopy.</a> Nat Protoc. 3, 606-611 (2008).</li>
<li>Rogers, S. L., Rogers, G. C., Sharp, D. J., Vale, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+EB1+is+important+for+proper+assembly%2C+dynamics%2C+and+positioning+of+the+mitotic+spindle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Drosophila EB1 is important for proper assembly, dynamics, and positioning of the mitotic spindle.</a> J Cell Biol. 158, 873-884 (2002).</li>
<li>Goshima, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+required+for+mitotic+spindle+assembly+in+Drosophila+S2+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Genes required for mitotic spindle assembly in Drosophila S2 cells.</a> Science. 316, 417-421 (2007).</li>
</ol>

Hücre biyolojisi alan için ideal bir sistem, kolay manipüle korumak için ucuz olacağını ve çeşitli teknikler için uygun. Drosophila S2 hücreleri bu gereksinimleri karşılamak ve böylece hızla büyüyen bir hücre sayısı için tercih edilen sistem haline gelmiştir biyoloji laboratuvarları. Biz yöntemleri mikroskopi için S2 hücreleri hazırlamak için kısa bir özetini sundu. Dikkate değer bir erdemdir S2 hücreler normal atmosfer ve oda sıcaklığında iyi büyür gerçeği, bu nedenle, herhangi bir...

<table><tbody><tr><td>S2 hücreleri</td><td>ATCC</td><td>CRL-1963</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.atcc.org/">http://www.atcc.org/&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>S2 hücreleri</td><td>DGRC</td><td>stok numarası 6</td><td>&lt;a href=&quot;https://dgrc.cgb.indiana.edu/">https://dgrc.cgb.indiana.edu/&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>S2 hücreleri</td><td>Invitrogen</td><td>R690-07</td><td></td></tr><tr><td>Sf900 II</td><td>Invitrogen</td><td>10902-096</td><td>serumsuz besiyeri</td></tr><tr><td>HyClone SFX-Insect</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>SH30278</td><td>serumsuz besiyeri</td></tr><tr><td>Insect-Xpress</td><td>BioWhittaker</td><td>12-730</td><td>serumsuz besiyeri</td></tr><tr><td>Schneider&amp;rsquo;s S2 besiyeri</td><td>Invitrogen</td><td>11720-034</td><td>Tam besiyeri hazırlamak için %10 (final) ısı ile inaktive edilmiş FBS ekleyin.</td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu</td><td>Invitrogen</td><td>10438026</td><td>ısı ile inaktive edilmiş</td></tr><tr><td>100x antibiyotik çözeltisi</td><td>MP Biomedicals</td><td>91674049</td><td>penisilin (10000 U/mL),&lt;br/&gt;streptomisin (10000 &amp;#x03BC;g/mL) ve&lt;br/&gt;amfoterisin B (25 &amp;#x03BC;g/mL) içerir</td></tr><tr><td>Konkanavalin A</td><td>MP Biomedicals</td><td>195283</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehit</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15714</td><td>%32 çözelti</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Mallinckrodt Baker Inc.</td><td>9049</td><td>susuz, ACS kalite</td></tr><tr><td>Moleküler elekler</td><td>Acros Organics</td><td>19724</td><td>tip 3A</td></tr></tbody></table>

hazırlanması drosophila işık mikroskopi s2 hücreleri

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Ideal bir deney sistemi, çeşitli teknikler için uygun bakımı için ucuz ve kolay olacağını ve geniş bir literatür ve genom dizisi veritabanı tarafından desteklenen olurdu. Kültüre Drosophila S2 hücreleri, ilişkisiz 20-24 saat eski embriyolar 1 ürün, bütün bu özelliklere sahip. Sonuç olarak, S2 hücreler moleküler sürecin bileşenleri veya ilgi mekanizması kodlayan genlerin keşfi de dahil olmak üzere hücresel süreçlerin analizi için son derece uygundur. Onların yardımcı programı en çok sorumlu olan S2 hücreleri canlı veya sabit olarak korunur kolaylığı, çift iplikli RNA-aracılı (ds) girişim (RNAi), kendine has duyarlılığı ve floresan mikroskopi için tractability hücreleri. S2 hücreleri, ucuz, piyasada bulunan, tam olarak tanımlanmış, serum ücretsiz medya 2 çok sayıda dahil olmak üzere, çeşitli medya yetiştirilebilir . Buna ek olarak, 21-24 ° C&#39;de en iyi ve hızlı bir şekilde büyür ve konteynerlerin çeşitli kültür olabilir. Memeli hücrelerinin aksine, S2 hücrelerinin düzenli bir atmosfer gerektirmez, ancak bunun yerine normal hava ile iyi ve hatta kapalı şişelerde muhafaza edilebilir. S2 hücreleri RNAi kolaylığı tamamlayan faz ya da sabit veya canlı hücrelerin floresan mikroskobu ile deneysel olarak indüklenmiş fenotipleri kolayca analiz yeteneği. S2 hücreleri tek tek tabaka olarak kültür yetişen ancak temas inhibisyonu gösterilecek. Bunun yerine, hücreler yoğun kültürlerde koloniler halinde büyürler. Düşük yoğunluklu, S2 kültürleri, yuvarlak ve gevşek bağlı cam veya doku kültürü ile tedavi edilen plastik yetişir. Ancak, S2 hücrelerinin sitoloji lektin, Concanavalin A (CONA) 3 ile kaplanmış bir yüzey üzerine kısaca kültür onlar tarafından yaygın bir biçimde düzleştirmek için onları teşvik ederek büyük ölçüde geliştirilmiş olabilir. S2 hücreleri de stabil bir şekilde etiket yapıları veya canlı ya da sabit hücrelerin ilgi organelleri floresan etiketli işaretleri ile transfekte olabilir. Bu nedenle, hücrelerin mikroskobik analizi için her zamanki senaryo şudur: Birincisi, S2 hücreleri (etiketli işaretleyicileri ifade transgenlerin sahip) bir hedef protein (ler) ortadan kaldırmak için RNAi tarafından tedavi edilir. RNAi tedavi süresi protein farklılıkların izin ayarlanabilir hedef protein canlılığı için önemli ise kinetiği ters çevirin ve hücre travma / ölümü en aza indirmek için. Daha sonra, tedavi edilen hücrelerin yaymak için hücreler neden ve sıkıca cama yapışır CONA önceden kaplı lamel içeren bir çanak aktarılır. Son olarak, hücreler araştırmacı mikroskopi modları seçimi ile görüntülü. S2 hücreler, bu hücrelerin, oda sıcaklığında ve normal atmosfer sağlıklı kalmak, canlı hücreleri, uzun görselleştirme gerektiren çalışmalar için özellikle iyi.

Drosophila Schneider (S2) hücreleri genlerin keşfi ve fonksiyonel analiz için giderek daha popüler bir sistem. Amacımız giderek daha önemli bir deneysel sistem S2 hücrelerin mikroskobik teknikler bazı tanımlamak için.

Hazırlanması Drosophila Işık Mikroskopi S2 hücreleri

İdeal deneysel sistem; ucuz ve bakımı kolay, çeşitli tekniklere uygun ve kapsamlı bir literatürle desteklenen bir sistem olacaktır...

Bu prosedürün genel amacı, Drosophila S2 hücrelerinin ışık mikroskopisi için hazırlanmasını açıklamaktır. Bu işlem, öncelikle cam tabanlı kültür kaplarının hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı, cam tabanın konvalektin ile kaplanmasıdır.A, S iki hücrelerinin adezyonunu ve yayılmasını teşvik etmek içindir. Prosedürün üçüncü adımı, kültür ortamının ve S iki hücrelerinin kültür kabına eklenmesidir. Prosedürün son adımı, kültür kabındaki S iki hücrelerinin fikse edilmesi ve immünboyanmasıdır.Nihayetinde, canlı veya fikse edilmiş S two hücrelerinin sırasıyla floresan mikroskobu ile incelenmesi sonucunda, fluoro four ile işaretlenmiş veya immün etiketlenmiş hedef proteinlerin lokalizasyonunu gösteren sonuçlar elde edilebilir. Merhaba, ben Arizona Üniversitesi Hücre Biyolojisi ve Anatomi Bölümü'ndeki Greg Rogers laboratuvarından Joey Club. Ben de Rogers Laboratuvarı'ndan John Nye.Ben de Dan Buster. Greg Rogers laboratuvarındayım. Bugün sizlere, Drosophila S2 hücrelerinin ışık mikroskobu için hazırlanma prosedürünü göstereceğiz.Laboratuvarımızda, önemli düzenleyici proteinlerin eliminasyonu veya aşırı ekspresyonunu takiben sentromer sayısındaki ve yapısındaki değişiklik

preparation-of-drosophila-s2-cells-for-light-microscopy

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Drosophila embriyolar canlı görüntüleme analizi hazırlama, basit, ucuz ve etkili bir yöntem sunulmuştur. Bizim protokol nem ve gaz değişimi sağlar ve Drosophila embriyo sıkıştırmak değil. Bu yöntem, GFP tabanlı bir stereomikroskopta ya da dik bileşik mikroskop kullanarak Drosophila embriyoların canlı görüntüleme için uygundur.

Hazırlanması Drosophila</emAsma Bırak Protokolü kullanarak Canlı Görüntüleme> Embriyolar

Biz fiksasyon, gömme, kesit, bir süreç tarif etmek, ve geç dönem...

Elektron Mikroskobu için embriyo Hazırlık Drosophila Embriyonik kalp tüpü

Geliştirilmesi ve Yetişkin hazırlanması Drosophila Brain ve Canlı Görüntüleme için Retinae

Biz sahnelenen hazırlamak için prosedürü...

Tüm montaj Embriyonik Sinir Sistemi Görselleştirme Drosophila Embriyolar

Yetişkin hazırlamak için standart bir...

Yetişkin hazırlanması Drosophila Gözler İnce Kesit ve Mikroskobik Analizi

Drosophila S2 hücreleri ve kültürlenmiş nöronların in vivo olarak motor tahrikli bir organel taşıma görüntüleme için büyük sistemlerdir. Burada, her iki hücre kültür tipleri için, görüntüleme ve taşıma analiz protokolleri ayrıntılı tarif etmektedir.

Kültürlü organel Ulaşım Drosophila Hücreler: S2 Hücre Hattı ve İlköğretim Nöronlar.

Bu çalışma, geç evre-16 Drosophila melanogaster embriyolarının motor nöron projeksiyonlarını görselleştirmek için standart bir immünohistokimya yöntemini ayrıntılarıyla anlatıyor . FasII antikoru ile lekelenmiş sabit embriyoların filleted hazırlığı, motor akson yol bulma ve sinirsel gelişim sırasında hedef tanıma için gerekli genlerin karakterize edilmesi için güçlü bir araç sağlar.

Embriyonik Motor Nöronlarının Aksonal Projeksiyon Paterninin Görselleştirilmesi<em&gt; Drosophila</em

SEM analiz tür kimlik ya da fenotipik ayrımcılık yardım etmek için etkili bir yöntemdir. Bu iletişim kuralı organizmalar üç temsilcisi tür özel morfolojik detayları inceleyerek yöntemlerini açıklar ve birçok organizma özelliklerinin incelenmesi için genel olarak geçerli olacaktır ve doku türleri.

Elektron mikroskobu (SEM) tarama morfolojik analiz için kimyasal kurutma kullanarak prokaryotik ve ökaryotik organizmaların hazırlanması

Burada sunulan mikroenjekte etmek ve aynı anda görüntü birden fazla Drosophila embriyoembriyonik gelişim sırasında bir plaka tabanlı, yüksek içerik görüntüleyici kullanarak bir protokoldür.

Drosophila Embriyo Hazırlama ve Canlı Hücre Mikroskopisi Için Mikroenjeksiyon Otomatik Yüksek İçerik Analizörü Kullanılarak Gerçekleştirildi

Işık tabakası bazlı floresan mikroskopisi gelişim biyolojisinde en değerli araçtır. Karşılaştırmalı çalışmalarda önemli bir konu ortam değişkenliğidir. Protokolümüz, birden fazla örneğin eşzamanlı canlı görüntülenmesi için deneysel bir çerçeveyi açıklar ve bu nedenle bu sorunu pro-aktif olarak ele alıp gidermektedir.

Örnek Oda Bazlı Işık Tabakası Floresan Mikroskoplarında Birden Fazla Böcek Embriyosunun EşZamanlı Canlı Görüntülenmesi

Burada, konvansiyonel lazer taramalı konfokal mikroskop kullanılarak süper çözünürlüklü görüntüleme elde etmek için erken Drosophila embriyolarında genişleme mikroskobunun uygulanması için bir protokol sunulmaktadır.

Süper Çözünürlüklü Görüntüleme için Tam Montajlı Drosophila Embriyolarını Fiziksel Olarak Büyütmek için Genişleme Mikroskobunun Kullanılması

Öğrenin Drosophila S2 hücrelerini ışık mikroskobisi için hazırlama yöntemini. Lectin kaplama, hücre yapışması ve immün boyama teknikleriyle gen fonksiyonlarını inceleyin.

Hazırlanması Drosophila Işık Mikroskopi S2 hücreleri

Daha fazla video keşfet