JoVE Encyclopedia of Experiments
Biyoloji
0 görüntüleme • 2:54 dk • April 30th, 2023
- Başlamak için, birkaç embriyoyu embriyo ortamı içeren bir Petri kabına nazikçe aktarın. Şimdi koryonu forseps ile tutun ve başka bir forseps ile yırtın.
Ardından, embriyoyu yavaşça yırtılmadan itin. Koryonun embriyodan çıkarılması büyümesini ve hareketini hızlandırır. Enkazdan kurtulmak için, embriyoları bir Pasteur pipeti kullanarak embriyo ortamı içeren başka bir Petri kabına aktarın.
Petri kabını bir inkübatöre yerleştirin ve embriyoların 28 santigrat derecede büyümesine izin verin. Larva davranışında sıcaklıkla ilgili herhangi bir sapmayı önlemek için deneyden önce aydınlatılmış su dolu bir mikroskop aşamasını 28 santigrat dereceye ayarlayın.
Petri kabını sahneye yerleştirin ve kabın üzerindeki kameraya monte edin. Ardından, embriyoyu kameranın görüş alanında ortalayın. Şimdi embriyoya künt bir iğne ile hafifçe dokunun ve larva tepkisini video kamera kayıt yazılımına kaydedin.
Uyaran üzerine, embriyo güçlü bir kaçış tepkisi sergiler - keskin dönüşlerle birlikte bir patlama yüzmesi. Dokunma ile larvaların kaçışı sırasındaki en yüksek ivmesi arasındaki süreyi ölçün.
Örnek protokolde zebra balığı larvalarının dış uyaranlara verdiği tepkiyi gözlemleyeceğiz.
- Testi gerçekleştirmek için, yaklaşık 25 mililitre embriyo ortamı ile doldurulmuş bir Petri kabını, yaklaşık 28 santigrat dereceye ayarlanmış ışıklı, sıcaklık kontrollü bir aşamaya yerleştirin. Yüksek hızlı kamerayı çanağın üzerine monte edin. Video kayıt yazılımını başlatın ve yüksek yüzme hızlarının yakalanabilmesini sağlamak için yakalama hızını saniyede 1.000 kareye ayarlayın.
Embriyoyu Petri kabının ortasına, görüş alanında açıkça görülebilecek şekilde yerleştirin. Kayda basın ve ardından embriyoya başın üstünde künt bir iğne ile hafifçe dokunarak mekanosensoriyel bir uyaran verin.
Embriyo görüş alanından çıktığında veya dinlenmeye geri döndüğünde kaydı durdurun.
- Aynı larvaların tekrar tekrar test edilmesi, bazı hastalık modellerinde alışmaya yol açabilir veya kas güçsüzlüğünü teşvik edebilir, bu da dokunsal uyarana yanıtın azalmasına neden olabilir. Bu nedenle, her embriyo sadece bir kez test edilmelidir.