JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 4:45 dk. • April 30th, 2023
- İlk olarak, balık davranışını etkileyebilecek dış uyaranları en aza indirmek için test alanının etrafında üç taraflı bir muhafaza oluşturun. Su yüzeyi yansımalarını önlemek için dağınık tavan aydınlatması ayarlayın. Ardından, karanlık ve aydınlık bölgelere ayrılan arenayı 28 santigrat derecede tutulan habitat suyu ile doldurun.
Arenayı muhafazaya yerleştirin. Test edilecek balıkları içeren habitat tankını muhafazanın dışında tutun. Balıkların streslerini azaltmak için iklime alışmasına izin verin.
Şimdi, habitat tankından bir balığı nazikçe ağa bağlayın ve test tankına yerleştirin. Her iki bölgeye de sapmayı önlemek için balığı arenanın uzun kenarlarına dik olarak konumlandırın. Kayıt yazılımını kullanarak balığın davranışını gözlemleyin ve testi balığın geri kalanı için tekrarlayın. Her balığın aydınlık ve karanlık bölgelerde geçirdiği ortalama süreyi ölçün.
Zebra balığı endişeli olduklarında karanlık bölgede daha fazla zaman geçirme eğilimindedir. Örnek protokolde, etanol maruziyetinin zebra balığı davranışı üzerindeki etkisini gözlemlemek için bir aydınlık-karanlık testi yapacağız.
- Beyaz su geçirmez bir zemine sahip, 9 ve 1/2 santimetre genişliğinde, 55 santimetre uzunluğunda ve 9 ve 1/2 santimetre derinliğinde açık-karanlık bir arena elde edin. Arenanın yarısı beyaz, yarısı siyah kaplı olacak şekilde Velcro kullanarak arenanın iç duvarlarına beyaz ve siyah su geçirmez, yansıtıcı olmayan kağıt yapıştırın. Arenayı 25 ila 28 santigrat derece sıcaklıkta habitat suyu ile 5 santimetre derinliğe kadar doldurun. Test boyunca bu sıcaklığı koruyun.
Arenanın yerleştirilmesi için üç taraflı beyaz bir muhafaza inşa ederek dış görsel uyaranları en aza indirin. Test alanının, su yüzeyinde yansımalara neden olmayan, ancak hareket izleme yazılımı veya video görüntülerinden post hoc manuel niceleme için yeterince parlak olan dağınık tavan aydınlatmasına sahip olduğundan emin olun. Ardından, araştırma sorusuna bağlı olarak 5 ila 15 dakikalık bir deneme süresi ile davranış izleme yazılımının kayıt ve hareket analizi parametrelerini ayarlayın.
Test edilecek balık grubunu habitat tankındaki araştırma alanına taşıyın ve onları arena muhafazasının dışına yerleştirin. Balığın 10 dakika alışmasına izin verin. Uygun gruptan bir balığı nazikçe ağa bağlayın ve aydınlık-karanlık arenanın ortasına yerleştirin, balığın aydınlık veya karanlık bölgeye sapmasını önlemek için arenanın uzun eksenine paralel olarak konumlandırıldığında her balığı serbest bırakın.
Hayvan serbest bırakıldıktan hemen sonra davranışı kaydetmeye başlayın. Balıkların izlenmesi veya balıkların zıplaması veya donması ile ilgili herhangi bir yazılım sorunu olup olmadığına dikkat edin. Deneme sona erdikten sonra, balıkları arenadan bir bekletme tankına veya habitat tankına nazikçe ağ ile bağlayın ve çıkarın. Deneklerin yarısı test edildikten sonra arenayı 180 derece döndürün, arenanın hangi ucunun muhafazanın açık ucuna doğru yönlendirildiğinden kaynaklanan önyargılardan kaynaklanan karışıklıkları önlemek için.
Analize, aydınlık ve karanlık bölgelerde geçirilen süreyi inceleyerek başlayın. Her grup ve her balık için, aydınlık ve karanlık bölgelerde geçirilen göreceli süreyi elde edin ve grupların bir alanı diğerine göre önemli ölçüde tercih edip etmediğini belirlemek için tek bir örnek t-testi kullanarak analiz edin. Tercihleri karşılaştırmak için, aydınlık bölgede geçirilen süreyi karanlık bölgede geçirilen süreden çıkararak bir tercih indeksi hesaplayın ve t-testlerini kullanarak gruplar arasındaki farkları karşılaştırın. Gerektiğinde Tukey'in dürüst anlamlı fark post hoc testini kullanarak, tek yönlü bir varyans analizi ile birden fazla grubu karşılaştırın.