Zebra Balığı Kaçınma ve Timotaksis Deneyi: Caydırıcı Görsel Uyarana Yanıt Olarak Larva Davranışını İncelemek İçin Yüksek Verimli Bir Yöntem

- Başlamak için, altı şeritli bir agaroz plakasının her şeridine beş larva yerleştirin. Fazladan yumurta suyu ekleyin, ancak şeritleri aşırı doldurmayın. Yumurta suyu, küf oluşumunu önleyen metilen mavisi içerir. Streslerini azaltmak için larvaların en az 10 dakika iklime alışmasına izin verin.

Şimdi kuyu plakasını bir dizüstü bilgisayar ekranının üzerindeki bir görüntüleme odasına yerleştirin. Kamerayı kuyu plakasına odaklayın. Şeridi tamamen yumurta suyu ile doldurun.

Ardından, hızlandırılmış görüntüler çekerek boş arka plan üzerine yerleştirilen larvaların davranışlarını kaydedin. Dizüstü bilgisayar ekranında hareketli bir kırmızı çubuk görüntüleyin ve hareketli kırmızı çubuğa yanıt olarak larvaların hızlandırılmış görüntülerini çekin.

Kırmızı şekil bir tehdit, caydırıcı bir uyaran olarak algılanır ve larvaların strese girmesine neden olur. Buna karşılık, çubuktan kaçınırlar ve pozitif timotaksis gösterirler. Pozitif timotaksi, balığın uyarana tepkisi, duvarla temas araması ve şeridin kenarında yüzmesidir.

Örnek protokolde, farmasötik bileşikler veya çevresel toksinlerle tedavi edilen zebra balığı larvalarının kaçınma ve timotaktik tepkilerini analiz edeceğiz.

- Görüntü yakalamaya başlamak için, larva stresini azaltmaya yardımcı olmak için larvaları Petri kabından agaroz şeridine dikkatlice taşıyın. Her şeride en fazla 20 larva yerleştirilebilir, ancak kulvar başına beş larva tipik olarak yüzme hızının en doğru şekilde izlenmesini kolaylaştırmak ve deney başına ihtiyaç duyulan larva sayısını azaltmak için kullanılır.

Deneye bağlı olarak, şeritleri farmasötik veya toksik maddeler olsun veya olmasın yumurta suyu ile doldurun. Taşmayı önlemek için görüntüleme kabinlerine yerleştirilene kadar şeritleri tamamen doldurmayın. Larvaların alışması için 10 dakika bekleyin. İklimlendirme periyodundan sonra, dört plakayı elinizle doğrudan dizüstü bilgisayar ekranının üzerine yerleştirin.

Şu anda, görüntülerdeki şeritlerin kenarlarındaki gölgeleri ortadan kaldırmak için şeritler, şeridin üst kısmı ile aynı hizada olacak şekilde yumurta suyu veya kimyasal işlemle doldurulabilir.

Bilgisayarı zaman atlamalı fotoğrafçılık için programlayın, deney başına toplam 300 görüntü için her altı saniyede bir fotoğraf çekin. Video hızında görüntüleme için kamerayı daha düşük bir çözünürlüğe ayarlayın. Daha düşük çözünürlük, kayıtları tek bir çok kuyulu plaka ile sınırlarken, video kayıtları hızlı yüzme olaylarını görüntülemek için uygundur.

Larvalar için caydırıcı bir uyaran olarak bir PowerPoint sunumu kullanın. Bu gösterimde, PowerPoint 15 dakika boyunca boş beyaz bir arka planla başlar, ardından plakanın üst yarısında 15 dakika boyunca hareketli kırmızı bir çubuk gelir. Agaroz şeritleri içindeki sıvının buharlaşmasını önlemek için, maksimum görüntüleme süresini bir saatin altında tutun.