JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 2:52 dk. • April 30th, 2023
- Başlamak için, embriyoları 3 Petri kabında büyütün. Birincisi, Hank'in çözeltisini içeren bir kontrol plakası - dengeli bir tuz çözeltisi. İkinci ve üçüncü plakalar, farklı konsantrasyonlarda potansiyel olarak nörotoksik bir bileşik içeren Hank'in çözeltisine sahiptir.
Maruz kalma solüsyonundaki nörotoksik bileşik, pasif difüzyon yoluyla embriyoların dış zarına nüfuz eder ve sinir sisteminin dikkat, koordinasyon ve kas aktivitesi gibi süreçlerini değiştirir. Embriyolar uygun yaştaki larvalara dönüştüğünde, her larvayı 48 oyuklu bir plakanın ayrı bir kuyucuğuna aktarın. Her hayvan için tedavi durumunu takip edin.
Kuyu plakasını bir kayıt platformuna aktarın ve kapağı aşağı çekin. Larvaların 10 dakika alışmasına izin verin. Yazılımı kullanarak alternatif aydınlık ve karanlık dönem döngülerini ayarlayın.
Zebra balığı larvaları normalde karanlıkta daha fazla, ışıkta daha az hareket gösterir. Her periyotta kontrolün larvaları ve maruziyet grupları tarafından kat edilen toplam mesafeyi kaydedin. Bileşik nörotoksik ise, larvalar karanlıkta ve ışıkta kontrol hayvanlarından daha fazla hareket gösterir.
Aşağıdaki protokolde, nörotoksik bileşiklere maruz kalan zebra balığı larvaları üzerinde davranışsal testler yapacağız.
- Bir deney yapmadan en az 2 saat önce, oda sıcaklığını 28 santigrat dereceye ayarlayın ve 48 oyuklu bir mikroplakanın her bir oyuğuna 800 mikrolitre maruz kalma çözeltisi ekleyin. Daha sonra, bir hareket ve yol açısı deneyine hazırlık olarak, 200 mikrolitre maruz kalma çözeltisinde bir larvayı mikroplakanın her bir oyuğuna aktarmak için modifiye edilmiş bir uca sahip 1 mililitrelik bir pipet kullanın.
Tüm parametreler ayarlandığında, test odasındaki aydınlatmayı kısın ve larvaların 10 dakika boyunca sisteme alışmasına izin verin. Alışma süresinin sonunda, Deney ve Yürüt'e tıklayın ve deney dosyalarının kaydedileceği klasörü oluşturun. Ardından sonuç adını girin ve Arka Plan ve Başlat'a tıklayın.
Denemenin sonunda, Deneme ve Durdur'u tıklayın. Daha sonra 48 kuyulu mikroplakayı sonraki deneyler için ışık inkübatöre geri koyun.