Hedeflenen Karaciğer Ablasyonu: Transgenik Zebra Balığı Larvalarında Metronidazol ile Hepatosit Ölümünün İndüklenmesi

- Metronidazol'ü bir çözücü olan DMSO içeren yumurta suyunda çözün ve embriyolarda pigment oluşumunu önleyen feniltiüre ekleyin. Uygun yaştaki birkaç larvayı tedavi ve kontrol plaklarına aktarın. Daha sonra, istenen metronidazol çözeltisi konsantrasyonunu test plakasına ve DMSO içeren yumurta suyunu kontrol plakasına ekleyin.

Her iki plakadaki larvaların 28 santigrat derecede büyümesine izin verin. Transgenik larvalar sadece hepatositlerde nitroredüktaz üretir, bu da metronidazolü sitotoksik bir ilaca dönüştürür ve sadece hedeflenen hepatositlerin ölümüne neden olur. Tedaviden sonra, metronidazol çözeltisini tedavi plakasından çıkarın ve embriyoları yumurta suyu ile yıkayın.

Larvaları uyuşturmak için trikamid ekleyin ve şiddetli hepatosit ablasyonu (karaciğer hücrelerinin yok edilmesi) için epifloresan mikroskobu altında inceleyin. Tedavi edilen bireylerde, kontrol grubundaki bireylere göre çok daha küçük bir karaciğer gözlemleyeceksiniz. Örnek protokolde, karaciğer rejenerasyonunu incelemek için transgenik zebra balığı larvalarında hepatosit ablasyonu için metronidazol kullanacağız.

- 100'e kadar embriyoyu 25 mililitre yumurta suyu içeren 100 milimetrelik bir Petri kabına aktarın