JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 2:57 dk. • April 30th, 2023
- Anestezi uygulanmış yetişkin bir balığı bir yığın emici kağıda yerleştirerek işleme başlayın. Şimdi kuyruk yüzgecini kesmek için steril bir tıraş bıçağı kullanın ve balığı geri kazanım için hızlı bir şekilde tatlı su içeren bir tanka aktarın. Kuyruk klipsini bir lizis tamponu içeren temiz bir tüpe aktarın. Lizis tamponu, plazma zarını ve bir hücrenin çekirdek zarını çözündüren iyonik olmayan deterjanlar içerir. Tampon ayrıca proteinleri parçalayan ve DNA'nın lizata salınmasını sağlayan proteinaz K adı verilen bir enzim içerir. Aynı zamanda nükleazları parçalayarak DNA'yı nükleaz sindiriminden korur.
Şimdi, sürekli rotasyonla dokuyu 55 santigrat derecede tamamen parçalamak için kuyruk klipsli tüpleri gece boyunca bir inkübatörde bırakın. Daha sonra, proteinaz K'yi inaktive etmek için tüpü 15 dakika boyunca 95 santigrat derecede ısıtın. Tüpü sindirilmemiş materyali peletlemek için santrifüjleyin ve süpernatan içeren DNA'yı başka bir tüpe aktarın. DNA'yı çökeltmek için alkol ekleyin ve DNA'yı bir topakta toplamak için tekrar santrifüjleyin. Aşağıdaki protokolde, yetişkin bir zebra balığının kuyruk klipsinden ve bütün bir embriyodan DNA'yı izole edeceğiz.
- DNA hazırlığının yapıldığı
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin