JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 3:24 dk. • April 30th, 2023
- İlgilenilen embriyoları, döllenmeden 24 saat sonra başlayan pigment oluşumunu engellemek için fenil tiyoüre, PTU, Ringer çözeltisine yerleştirin. Bu, bu prosedür için gerekli olan gelişmekte olan anatomiyi daha görünür hale getirir. Triklike anestezi uygulanmış bir embriyoyu bir görüntüleme odasına aktarın. Üstüne bir cam slayt yerleştirin ve mikroskobunuzun altında görüntüleyin. Transgenetik olarak GFP'yi ifade ettiği için 488 nanometre lazer altında görülebilen yaralanacak aksona odaklanın.
Sitenin önceki görüntüsünü alın. Ardından, GFP'nin kırmızı floresan vermesine neden olan 910 nanometre lazerle aksonu görüntüleyin. Çevredeki dokuyu etkilemeden hedef bölgeyi yaralamak için bu lazerin yoğunluğunu artırın. Bu işleme aksotomi denir. Dağınık döküntü olarak görünen aksotomiyi doğrulamak için ilk lazerle yeni bir görüntü çekin. Aşağıdaki protokolde, iki fotonlu bir lazer kullanarak zebra balığı embriyolarında periferik duyusal aksonların aksotomisini gerçekleştireceğiz.
- Laboratuvarınızda özel yapım iki fotonlu bir skop yoksa, Zeiss 510 konfokal iki fotonlu mikroskop aksonları ayırmak için de kullanılabilir. Monte edilmiş embriyoyu sahneye yerleştirerek ve 25x su hedefi kullanar
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin