JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 0:04 dk. • April 30th, 2023
- Zebra balığı larvalarında, görsel bir uyaran somatosensoriyel nöronları aktive edebilir ve bir kaçış tepkisini tetikleyebilir. Larva, trigeminal ve Rohon-Beard nöronlarında bulunan iki tür nöron vardır. Bu nöronların aktivitesini, transgenik ışığa duyarlı iyon kanallarını ifade etmek için onları değiştirerek manipüle edebiliriz. Bu yaklaşıma optogenetik denir.
Bu tekniği uygulamak için, sırt tarafı yukarı bakacak şekilde bir transgenik larvayı agaroz jele monte edin ve diseksiyon mikroskobu altına yerleştirin. Agarozun kama şeklindeki bir kısmını yumurta sarısı ve kuyruğun etrafından ayırmak için bir tıraş bıçağı kullanın. Bu alanı yumurta suyu ile doldurun. Agarozu larvaların gövdesinden ve kuyruğundan uzaklaştırın.
Bir optik kablonun ucunu, Rohon-Beard nöronunun hücre gövdesinin bulunduğu gövdenin yakınına yerleştirin. Mavi lazer ışığı darbesi verin. Mavi ışığa maruz kaldığında, nöronun zarındaki transgenik ışığa duyarlı iyon kanalları açılır ve iyonların girmesine izin vererek kaçış tepkisini ortaya çıkaran bir aksiyon potansiyelini tetikler. Yüksek hızlı bir kamera kullanarak larvaların davranışlarını kaydedin.
Örnek protokolde, bir channelrhodopsin varyantını eksprese eden R
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin