Yetişkin Zebra Balığı Elektrofizyolojisi: İn Vivo Nöronların Hücre Dışı Elektriksel Aktivitesini Ölçmek İçin Bir Yöntem

- Nöronlar, aksiyon potansiyelleri aracılığıyla elektriksel uyarılar yayar. Nöron dinlenme durumundayken, sodyum iyonlarının girişinden daha yavaş bir potasyum iyonu çıkışı olur ve bu da zar potansiyelinde değişikliğe yol açar. Bu, sodyum iyon kanallarının açılmasına ve sodyum iyonlarının içeri girmesine izin vererek elektriksel bir dürtü oluşturmasına neden olur.

Bir hücrede bu tür aktiviteleri inceleme yöntemine elektrofizyoloji denir. Yetişkin bir zebra balığının burun deliğine ikincil bir elektrot ucu sokarak işleme başlayın. Daha sonra, hücre dışı nöral aktiviteyi ölçmek için birincil elektrotları yüzeysel olarak, açıkta kalan optik tektumun içine yerleştirin.

Birincil elektrot, kendisini çevreleyen tüm hücrelerin hücre dışı zar potansiyelini ölçer. Sinyal, tüm bu hücrelerin birleşik zar potansiyelini temsil eder. Elektrot sinyali algılar ve onu bir amplifikatöre (bir osiloskop) iletir, bu da membran potansiyelinin görsel bir görüntüsünü ve bir bilgisayarı sunar.

Okumaları gözlemleyin ve birincil ve ikincil elektrotlar arasındaki elektriksel farkı analiz edin. Elektrofizyolojik ölçüm bir karşılaştırmadır. Örnek protokolde, farmakolojik bileşiklerin yetişkin bir zebra balığındaki nöral aktivite üzerindeki etkisini ölçeceğiz.

- Elektrofizyoloji kaydı için, entübasyon vanasını kapatın ve entübasyon tabanını trikin damlasına bağlayan Leur kilidini hızlı bir şekilde ayırın. Sağlam entübasyon kurulumunu elektrofizyoloji mikroskobuna taşıyın ve perfüzyon sistemine bağlayın. Trikızı yıkamak için habitat suyunu açın ve yaklaşık bir saat boyunca dakikada 1 mililitre oranında perfüze edin.

Bir mikro manipülatör kullanarak, ikincil elektrodu, elektrot ucu hayvanın burun deliğine veya üst çenenin altındaki daldırmaya yerleştirilebilecek şekilde konumlandırın. Ardından, birincil elektrot iğnesini kraniyotomi açıklığına yerleştirin. Ardından, iğneyi, uç optik tektum içinde oldukça yüzeysel olarak konumlandırılacak şekilde dokuya yerleştirin.

Elektrotun daha derin konumları küçük bir elektrik sinyaline neden olabilir. Veri toplama için, 0,1 kilohertz'lik alçak geçiren filtre ve 1 hertz'lik yüksek geçiren filtre ile birlikte 5.000 hertz örnekleme hızında boşluksuz mod kullanılır. Habitat suyu en az 45 dakika boyunca perfüze edildiğinde elektrofizyolojik aktivitenin kaydına başlayın. Deneysel ilaçların eklenmesinden en az 15 dakika önce bir doğal aktivite temeli kaydedin.