JoVE Encyclopedia of Experiments
Biyoloji
0 görüntüleme • 2:05 dk • April 30th, 2023
- İlk olarak, anestezi uygulanmış bir balığı, sırt tarafı yukarı bakacak şekilde önceden ıslatılmış bir süngerin içine yerleştirin. Elektroporasyondan önce, genetik materyali hedef dokuya, bu durumda ön beynin telensefalon adı verilen bir kısmına enjekte edin. Sonra, kafasına az miktarda ultrason jeli koyun. Ayrıca, verimli çalışmayı kolaylaştırmak için jeli elektrotların ucuna uygulayın. Pozitif elektrodu başın ventral tarafına ve negatif elektrodu dorsal tarafa yerleştirin.
Şimdi, elektrotları kafaya hafifçe bastırın ve birkaç elektrik akımı darbesi uygulayın. Akım, elektroporasyonlu hücrelerin plazma zarında geçici gözenekler oluşturur ve onları geçirgen hale getirir. Akım aynı zamanda çevrede bulunan DNA ekspresyon plazmitleri veya RNAi oligonükleotidleri gibi negatif yüklü parçacıkların hücrelere hareketini de kolaylaştırır. Aşağıdaki örnekte, yeni nöronların oluşumundan sorumlu kök hücreler olan ependimomglial hücrelere rekombinant bir plazmid eklemek için elektroporasyon kullanacağız.
- Balık telensefalonunu az miktarda ultrason jeli ile örtün. Plazmid enjekte edilen hayvanın elektroporasyonu için, süngeri ejeksiyon kurulumundan çıkarın ve elektrot uçlarının iç tarafını ultrason jeline daldırın. Balık kafasını, pozitif elektrot başın ventral tarafında ve negatif elektrot sırt tarafında olacak şekilde elektrotlar arasına yerleştirin. Daha sonra, balığın vücudunu süngerde tutarken, elektrotları nazikçe ve hassas bir şekilde telensefalona bastırın ve akımı ayak pedalıyla uygulayın, beş darbenin tümü bitene kadar elektrotları yerinde tutun.