İntramüsküler (IM) Enjeksiyon: Yetişkin Bir Zebra Balığının Dorsal Kasına Bileşik Uygulama

- Trikare anestezi uygulanmış bir balığı, sırt tarafı yukarı bakacak şekilde ıslak bir sünger üzerine aktarın. Balığı taşıyan süngeri mikroskop altına yerleştirin. Vücut ekseninden 45 derecelik bir açıyla sırt kasının yakınına bir mikro enjeksiyon iğnesi yerleştirin.

Ardından, sırt yüzgecinin önündeki, iğneyi büyük bir kuvvet uygulamadan sokabileceğiniz pullarla kaplı olmayan noktayı bulun. Daha sonra iğneyi nazikçe yerleştirin ve fenol kırmızısı gibi bir işaretleyici ile birlikte ilgilenilen bileşiği kas içine yavaşça enjekte edin.

İlgilenilen bileşik genetik materyal içeriyorsa, enjeksiyon bölgesinin her iki tarafına elektrotlar yerleştirerek ve akımı uygulayarak hücreleri elektropore edin. Akım, kas hücrelerini geçirgen hale getirir ve genetik materyali verimli bir şekilde alabilir. İşlemden sonra, balığı hemen bir kurtarma tankına aktarın. Aşağıdaki protokolde, mikobakteriyoza karşı bir DNA aşısı sağlamak için yetişkin bir zebra balığına kas içi enjeksiyon yapacağız.

Enjeksiyon sırasında balığı sabit bir pozisyonda tutmak için, dolgu olarak ortasında bir oluk kesilmiş bir sünger parçası kullanın. Süngeri sistem suyuna iyice batırın ve bir Petri kabına koyun. Plastik bir kaşık kullanarak, uyuşturulmuş bir zebra balığını, balığın ventral tarafı olukta olacak şekilde ıslak süngere aktarın. Mikroskop altında, iğneyi zebra balığının sırt kasına yakın 45 derecelik bir açıyla yerleştirin. Daha sonra sırt yüzgecinin önündeki pulsuz küçük noktayı bulun ve iğneyi kasın içine itin.

Herhangi bir direnç hissedilirse, bitişik bir nokta deneyin. Plazmid solüsyonunu kas içine kademeli olarak enjekte etmek için bir ayak pedalı kullanın. Mikroskop altında, fenol kırmızısı kas dokusuna girerken görünür olmalıdır.

Enjeksiyon bölgesinin her iki tarafına cımbız tipi elektrotları yerleştirerek enjeksiyondan hemen sonra balığı elektriklendirin. Elektroporatördeki Başlat düğmesine basın ve altı adet 40 volt, 50 milisaniyelik darbe verin. Ardından balığı nazikçe bir kurtarma tankına aktarın. Son olarak, balığı metin protokolüne göre uyuşturduktan sonra, enjeksiyon bölgesinin yakınında EGFP ifadesini görmek için bir UV ışığı kullanın.