İntraperitoneal Enjeksiyon: Yetişkin Bir Zebra Balığının Karın Boşluğuna Çözelti Verme Yöntemi

- Gastrointestinal sistemi boşaltmak ve karın bölgesinde ek alan yaratmak için enjeksiyondan önce yetişkin bir balığı 24 saat oruç tutun. İşlem gününde, balığı tricaine ile uyuşturun ve ventral tarafı yukarı bakacak şekilde ıslak bir sünger içindeki bir yuvaya yerleştirin.

Daha sonra, istenen miktarda enjeksiyon solüsyonunu bir laboratuvar filmi parçasına pipetleyin ve bir insülin iğnesine çekin. İğneyi ön-arka gövde ekseninden 45 derecelik bir açıyla pelvik yüzgeçler arasına yerleştirin ve yavaşça orta hatta itin. İğneyi karın boşluğuna, karın duvarı ile iç organlar arasındaki boşluğa yaklaşık 1 ila 2 milimetre ilerletin ve ilgilenilen çözeltiyi yavaşça enjekte edin. Herhangi bir dökülmeyi önlemek için iğneyi çıkarmadan önce beş saniye bekleyin. Şimdi, iğneyi dikkatlice çıkarın.

Enjeksiyondan sonra, balığı hızlı bir şekilde taze tank suyu içeren bir geri kazanım tankına aktarın. Balık hemen yüzmeye başlamazsa, anesteziden kurtulmasına yardımcı olmak için suyu solungaçların yakınında döndürün. Örnek protokolde, enfeksiyonu incelemek için RAG1 mutant balığına bir mycobacterium marinum solüsyonu enjekte edeceğiz.

- İlk olarak, seyreltilmiş bakteri çözeltisinin 5 mikrolitrelik damlacığını bir parça parafin filmi üzerine sıkın. Ardından, damlacığı 30 gauge insülin iğnesine çekin. Bu deney için beş ila sekiz aylık bir balık kullanın, biri vahşi tip bir balık ve diğeri bir RAG mutant balığıdır.

Bu balıkları ventral tarafı yukarı bakacak şekilde nemli köpüklü bir plastik parçasının yarıklarına yerleştirin. İnsülin iğnesini pelvik yüzgeçler arasına 45 derecelik bir açıyla enjekte edin. Tüm açıklığın karın boşluğunun içinde olduğundan emin olmak için iğne açıklığını yukarı doğru tutun. Ardından, bakteri çözeltisini yavaşça enjekte edin. Bundan sonra, iğneyi dikkatlice çıkarın ve balığı hemen taze tank suyuyla dolu bir geri kazanım tankına aktarın.

7H10 plakalarında her 15 dakikada bir kullanılan bakteri alikotundan örnekler alın. Enfeksiyon dozunu doğrulamak için bu örnekleri beş gün boyunca 29 santigrat derecede inkübe edin. Balığın sağlığını düzenli olarak kontrol edin, enfeksiyon semptomları olan balıkları %0,02'den fazla 3-aminobenzoik asit etil ester içeren suda kuluçkaya yatırarak ötenazi yaptığınızdan emin olun.