Kalp Diseksiyonu: Zebra Balığı Kardiyak Gelişimini Gözlemlemek İçin Bir Yöntem

- Bir zebra balığı kalbi, sinüs venosus, atriyum, ventrikül ve soğanlı arteryoz olmak üzere dört odadan oluşur. Göğüs yüzgecini destekleyen iskelet sisteminin bir parçası olan operkulum ile pektoral kuşak arasında ventral tarafta ön tarafta bulunur. Kalbi incelemek için, ötenazi yapılmış sabit bir balığı, balık dokularının sabit bir pH'ını korumak ve ventral tarafı yukarı doğru yönlendirmek için fosfat tamponlu salin içeren bir Petri kabına yerleştirin.

Balık kafasını forseps ile gözler ve solungaçlar arasında tutun. Bir mikroskor kullanarak, solungaçları boyunca, ön göbek boyunca kesin ve ardından ilk iki kesiği birleştirerek dikey olarak kesin. Keskin bir cımbızla, kalbi kaplayan zar olan gümüş perikard'ı ortaya çıkarmak için göğüs yüzgecini ve alttaki göğüs kuşağını çıkarın. Kalbi görünür hale getirmek için perikardları forseps ile çıkarın. Şimdi soğanlı arteryoza bağlı arteri kesin.

Daha sonra, forsepsleri atriyumun altına yerleştirin ve kalbi vücut boşluğundan çıkarın. Kalbi forseps ile tutun ve kalbin dışında bulunan istenmeyen dokuyu çıkarmak için başka bir forseps kullanın. Aşağıdaki protokolde, balığın yaşam süresi boyunca gelişimini görüntülemek için farklı büyüklükteki balıkların kalbini inceleyeceğiz.

- Tek bir balığın ve ortaya çıkan disseke edilmiş kalbin daha sonra analiz edilmek üzere izlenmesine izin vermek için her balığa bir sayı-harf kombinasyonu atayın. Tüm ölçümler de dahil olmak üzere tüm verileri bir elektronik tabloya girin ve bu etiketlere göre düzenleyin. Diseksiyondan önce, PCR tüp şeritlerini atanmış takip numarasıyla etiketleyin ve tüpleri PBT veya daha fazla analiz için uygun başka bir çözelti ile doldurun. Vücudu forseps ile stabilize ederken, başı gözler ve solungaçlar arasında tutarken, balığın ventral tarafını bir Petri kabında yukarı doğru yönlendirin. Standart uzunlukta 12 milimetreden daha kısa balıklar için, keskin forseps veya bir iğne tutucuda mikro iğne kullanarak, kalbi ortaya çıkarmak için göğüs kaslarını ve yüzgeçlerini vücuttan çıkarın.

- Diseksiyon sırasında forsepslerin sürekli hareketi, PBT'de balığı hareket ettiren akımlara neden olabilir. Bu özellikle küçük balıklar için sorunludur. Bu, göğüs kaslarını ve yüzgeci çıkarmak ve vücut boşluğunu açmak için mikroiğnenin kullanılması gerekir.

- Kalbi atriyumun altından boşluktan nazikçe çıkarmak için forsepsleri kullanın. Balık bir floresan kardiyak işaretleyici içeriyorsa, diseksiyon için bir floresan dürbünü kullanın ve kalbin floresan ile çıkarıldığını doğrulayın. Kalp boşluktan çıkarıldıktan sonra, kalbi tutmak için forseps ve kalbin dışından ekstra kardiyak olmayan dokuyu ve epikardiyal astarı çıkarmak için bir mikroiğne kullanın.

Standart uzunlukta 12 milimetreden daha uzun balıklar için, yaylı saplı mikro makas kullanarak üç kesi yapın. İlk önce, solungaçlardan enine bir kesim yapın. İkinci olarak, ön göbekte başka bir enine kesim yapın. Üçüncüsü, her iki enine kesimi birbirine bağlayan ventral tarafta sagital bir kesim yapın. Keskin forseps kullanarak, vücut boşluğunu açmak ve perikardın gümüşi dokusunu ortaya çıkarmak için göğüs kaslarını ve yüzgeçlerini vücuttan çıkarın.

Bu perikardiyal dokuyu çıkarın. Ve kalp görünür hale gelecektir. Kalbin üstünde bulunan soğanlı arteryoza bağlı arteri kesmek için mikro makası kullanın. Bu arter kesildikten sonra, forsepsin uçlarını atriyumun altına yerleştirin ve kalbi boşluktan çıkarmak için forsepsleri kullanın. Kalple birlikte gelen ekstra doku varsa, daha sonra çıkarılabileceği için sorun değil. Alternatif olarak, bazı balıklarda, soğanlı soğanı nazikçe çekerek kalbi çıkarmak mümkündür ve kalbin geri kalanı takip edecektir.

- Alternatif tekniği kullanıyorsanız, kolayca zarar görebileceğinden, atriyumun konumuna dikkat edin. Kalple birlikte gelen ekstra doku varsa, bu iyidir ve daha sonra temizlenebilir.

- Kalp boşluktan çıkarıldıktan sonra, kalbi tutmak için iki forseps kullanın ve kalbi tutmak için fazla dokuyu veya bir çift forseps ve ekstra kardiyak olmayan dokuyu çıkarmak için bir mikroiğne kullanın.