JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 3:54 dk. • April 30th, 2023
- Ötenazi yapılmış bir balığı diseksiyon yatağına yerleştirin ve balığın solungaç seviyesinde başını kesmek için cerrahi bir bıçak kullanın. Başınızı ventral tarafı yukarı bakacak şekilde tutun ve beyni gözlere bağlayan optik sinirlerden yapılmış bir yapı olan optik kiazmayı görene kadar yumuşak dokuları çıkarın.
Optik sinirleri kesin ve gözleri çıkarın. Şimdi, balığı sırt tarafı yukarı bakacak şekilde yönlendirin ve beyni izole etmek için kafatasının parçalarını çıkarın. Beyni, dokunun sabit bir pH değerini korumak için bir diseksiyon ortamı içeren bir Petri kabına aktarın. Beynin bölümlerini gözlemleyin.
Koku soğancıkları, koku alma organlarına bağlı ön uçta koku sinyallerini algılayan bir çift yapıdır. Telensefalon hafıza ile ilgili alanları içerir. Habenula, telensefalondan beynin diğer bölgelerine bilgi iletir.
Optik tektum bir duyusal bilgi işleme merkezidir. Beyincik, somatik motor fonksiyon ve dengede rol oynar. Ve medulla, omurilikten beyne bilgi aktarır. Aşağıdaki protokolde, farklı bölgelerden nöral kök hücreler toplamak için beyni yetişkin bir zebra balığından izole edeceğiz.
Başlamak için, bir Petri kabını jel paketleri ile doldurarak bir diseksiyon yatağı hazırlayın. Daha sonra tabağı ilgili kapağıyla örtün ve eksi 20 santigrat derecede inkübe edin. Jel donduktan sonra, kabı dondurucudan çıkarın ve kapağının üzerine temiz bir kare filtre kağıdı yerleştirin. Hem kağıdı hem de tabağı plastik filmle sarmaya devam edin.
Daha sonra, tüm mikro diseksiyon aletlerini% 70 etanol ile tedavi edin. Bu sterilize edilmiş aletleri bir diseksiyon mikroskobunun yanına yerleştirin ve tamamlanmış diseksiyon yatağını fiber optik aydınlatmalı mikroskop altına yerleştirin. Önceden hazırlanmış bir kafa örneğini hemen diseksiyon yatağının üzerine yerleştirin ve sırt tarafı aşağı bakacak şekilde yönlendirin.
Ardından, yumuşak dokuyu başın arkasından ağza kadar uzunlamasına bir kesim yapmak için makas kullanın. Daha sonra, kafatasının tabanını forseps ile ortaya çıkarın ve bitişik dokuların tümünü çıkarın. Daha sonra, kafatasının yan duvarlarından birini başın arkasından başlayarak ve beynin tektum bölgesine doğru hareket ettirerek kesin. Karşı taraf için bu işlemi tekrarlayın. Optik siniri kesmeye devam edin. Ve sonra kafatasının en yanal iki tarafını tektum seviyesinde çıkarın
Son olarak, başın ventral tarafını yukarı çevirin. Ve forseps ile beyni açığa çıkarmak için kafatasının en apikal kısmını soyun. Daha sonra, beyni ve kafatasının kalan kısımlarını, penisilin streptomisin ile desteklenmiş DMM F12'den oluşan diseksiyon ortamı içeren bir tabağa aktarın. Mikroskop altında bir mikro bıçağın plastik sapı ile beyin dokusunu temizleyin, herhangi bir nöral yapıya zarar vermemeye dikkat edin. Tüm beyin türevli nörosferler oluşturmak için iki adede kadar zebra balığı beyni kullanın.