Name: Fare Beyin Dokusu Immunoelectron Mikroskopi için hazırlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-20T17:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: Öğrenin fare beyin dokusunu immunoelektron mikroskopi için hazırlama yöntemini. Transkardiyak perfüzyon, kesit alma ve immunoperoksidaz boyama adımlarını uygulayarak merkezi sinir sistemindeki protein dağılımını yüksek çözünürlükte görüntüleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz, teknik yardım için Rochester Tıp Merkezi Üniversitesi&#39;nden Elektron Mikroskobu Araştırma Core Tesisleri&#39;nde bir peristaltik pompa ve vibratome kullanımının yanı sıra, Karen L. Bentley ve Gayle Schneider Shao-Ming Lu ve Harris A. Gelbard teşekkür ederim. Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüsü, (EY019277), Whitehall Vakfı, Burroughs Wellcome Fonu ve AKM için Alfred P. Sloan Vakfı hibe tarafından finanse edildi. M.-È.T. Viyana de la recherche tr santé du Québec (FRSQ) doktora sonrası eğitim ödülü tarafından finanse edilmektedir.

1. Hayvan perfüzyon <ol><li> Perfüzyon bir gün önce, hazırlamak: - 2 L fosfat tamponu (PB 100 mM, pH 7.4) ve 1 L sodyum fosfat tamponlu salin (PBS;% 0.9, 50 mM PB NaCl, pH 7.4) çift distile su. 4 PB PBS ve 1L ° C Mağaza Bu perfüzyon ve öncesi gömme immünsitokimya için kullanılacaktır. -% 4.0 paraformaldehid 1L (PFA, pH 7.4) fiksatif 6 farelerin perfüzyon sağlayacak bir çözüm. Bu amaçla, ısı davlumbaz altında PB 1 L. 40 g granül paraformaldehid (PFA) tartılır ve 60 ° C'ye ulaştığında PB çözüm dökün Çözümü, 4 oda sıcaklığında (RT) ve mağaza serin PFA tamamen çözülmüş, ° C, açık olduğunda </li><li> Perfüzyon gününde, davlumbaz altında% 3,5 akrolein çözüm PB 500 mL hazırlamak. Daha sonra,% 3,5 akrolein ve filtre kağıdı kullanarak% 4.0 PFA çözümler filtresi. </li><li> 27 gauge ½ "iğne ile periton içine fare anestezi için, sodyum pentobarbital (80 mg / kg) enjekte edilir. </li><li> Perfüzyon sırasında, 50 ml PBS, 75 ml, akrolein ve PFA 150 ml sırayla fare dolaşıma geçecek. Peristaltik pompa kurmak için boru, PBS ile doldurun ve bir ucunda 23 gauge ¾ "kelebek iğne düzeltmek Hortumun diğer ucunu perfüzyon çözeltisi (PBS, acrolein veya PFA) içine daldırın. Peristaltik hızını ayarlama 20-25 ml / dk genç ve yetişkin farelerin pompası. perfüzyon boyunca dikkatli bir şekilde tüpün içinde oluşan hava kabarcıkları önlemek. </li><li> Devam etmeden önce, anestezi fare artık böyle bir kuyruk tutam gibi ağrılı uyaranlara yanıt verene kadar bekleyin. Diseksiyonu tepsi hayvan Lay ve bant kullanarak pençeleri düzeltmek. Cımbız ve makas ile deri ve göğüs boşluğunda kalp maruz açın. Beyin iskemi en aza indirmek için, perfüzyon hızla başlatılması gerekir. Sağ atrium küçük makas ile kesilerek açılır ve peristaltik pompa başlatmak. Cımbız ile kalp tutarken, sol ventrikül apeksi içine kelebek iğne takın. </li><li> Çözüm değişen zaman, peristaltik pompa durdurmak için başka bir çözüm tüp transferi ve pompa hemen yeniden başlatın. </li><li> 150 mL PFA zaman geçti, peristaltik pompa durdurun. Kullanarak, küçük bir makas, baş kesti cilt kadar açık ve gözler arasındaki kafatası kırmak. Beyin kolayca çıkarılabilir kadar küçük cımbız, kafatası küçük parçalar halinde kapalı dikkatle çip kullanılması. Beyin az 2 saat 4 Post-düzeltmek ° C PFA. PBS içinde 3 kez 10 dakika yıkayın. </li><li> Hemen bir vibratome kullanarak buz soğutmalı PBS içinde enine beyin (50 mikron kalınlığında kesitler) kesti. Ince bir fırça ile, PBS içeren bir cam şişenin içine immünsitokimya seçilen bölümleri aktarmak. Birkaç yıl öncesine kadar dölveriminin -20 ° C (% 30 etilen glikol ve PBS içinde% 30 gliserol) geri kalan bölümleri saklayın. </li></ol> 2. Ön-gömme immünsitokimya <ol><li> Immünhistokimya için, bölümler, cam şişe içinde serbestçe yüzen işlenir. Süreci boyunca, bir dikkatle bölümleri kurumasına izin kaçınmak gerekiyor. </li><li> Birincisi, bir transfer pipet kullanarak PBS çıkarın ve hemen yeni bir çözüm RT 30 dakika süreyle PBS içinde% 0.1 sodyum bor hidrür ile değiştirin. </li><li> PBS 3 kez 10 dakika ile tüm kabarcıklar kaldırarak bölümleri durulayın ve% 0,5 jelatin ve ikincil antikor oluşturulduğu hayvan% 5 normal serum (normal keçi serum içeren PBS engelleyici bir çözüm oda sıcaklığında 2 saat süreyle inkübe Iba1-immün mevcut örnek). </li><li> Çözümü engelleme birincil antikor ile 48 saat inkübe edin. Iba1-immün için, tavşan anti-Iba1 antikor (1:1000) kullanın. </li><li> PBS 3 kez 10 dakika bölümleri durulayın ve RT az 2 saat için çözüm engelleme biotin için konjuge sekonder antikor (1:1000) kuluçkaya yatmaktadır. Iba1-immün için, keçi anti-tavşan IgGs kullanın. </li><li> PBS 3 kez 10 dakika bölümleri durulayın ve RT az 1 saat için çözüm engelleme streptavidin horseradish peroksidaz (1:1000) inkübe. </li><li> PBS 10 dakika ile ve bölümleri HCI-tamponlu Tris / tuzlu su ile durulayın (TBS, 50 mM, pH 7.4) 2 kez 10 dakika. Etiketleme göstermek için,% 0.05 DAB ve TBS içinde% 0.01 hidrojen peroksit (taze hazırlanmış solüsyon) bölümleri kuluçkaya yatmaktadır. Boyama, koyu kahverengi (Şekil 1 örneğe bakın), TBS içinde durulayarak reaksiyon dur. Herhangi bir durumda, en fazla 5 dakika sonra reaksiyon sonunda. TBS 10 dakika ve PB 2 kez 10 dakikalık bölümlerde durulayın. </li></ol> 3. Elektron mikroskobu için işleme <ol><li> PB içine ince bir fırça kullanarak multiwell kültür plakasına bölümleri aktarın. Dumanlı kaputun altında PB% 1'lik osmiyum tetroksit çözüm hazırlayın. Kültür plaka kuyulardan PB çıkarın ve ince bir fırça ile düz bölümlere yayıldı. RT 30 dakika için% 1 osmiyum hemen batırmayın bölümleri. </li><li> Cam şişe içine bölümleri Transferi, PB 3 kez 10 dakika ile temizleyin, durulayın ve etanol konsantrasyonları artan içine 2 dakikalık daldırma yoluyla kurutmak: 2 kez% 35, 1 kez% 50,% 70,% 80,% 90, ve 95 % 3 kez propilen oksit tarafından% 100 3 kez. </li><li> Durcupan reçine hazırlamak için, tek renk olana kadar A, B bileşeni 20 g, 0.6 g bileşeni C, ve 0.4 g tek bir behere bileşeni D iyice karıştırın, 20 gr bileşen birleştirmek ve ağırlığında bir alüminyum dökün çanak. Gerekirse, reçine blokları, reçine kalıplar gömme ve 48-72 saat süreyle 55 ° C fırında kür içine dökerek hazırlanabilir. </li><li> Propilen oksit ile durulanır ince bir fırça kullanarak, RT gecede Durcupan reçine emprenye propilen oksit ve batırmayın bölümleri çıkarmak. </li><li> Ertesi gün, alüminyum reçine yumuşatmak için 10 dakika boyunca 55 ° C fırında çanak tartmak koydu. Propilen oksit, mont ince bir tabaka reçine ile bir ACLAR gömme filmi ile durulanır bir fırça kullanarak, başka bir gömme film ile kaplar ve eşit olarak (örneğin cam şişe, plastik kapaklar g yaklaşık 2) hafif ağırlıklarla dağıtmak, bölümler uzandı üstüne reçine yayılmasına yardım. Reçine polimerizasyon için, 48-72 saat (55 ° C) fırında kuluçkaya yatmaktadır. </li><li> Polimerizasyon sonra, bölümleri üst üste hafif ağırlıklarla ve gömme filmi çıkarın. Binoküler mikroskop altında (2x2 mm) kare ilgi alanları seçin ve bunları dikkatli bir şekilde tüketim jilet kullanarak film. </li><li> Tutkal superglue kullanarak reçine blokları ucunda ilgi alanları ve 55 ° C fırında 1 saat süreyle kür. </li><li> Kesit hazırlık, bir jilet ile bir ikizkenar yamuk şeklindeki reçine blok kırpın. </li><li> Ultramicrotome ve bir bardak bıçak kullanarak, doku yüzeyine tutkal ve reçine çıkarmak. Cam bıçak tekne çift distile su ile doldurun ve bir kaç yarı ince kesitler (0.5-1 mikron kalınlığında) kesmek. </li><li> Mükemmel bir döngü ile bir SuperFrost slayt bölümleri aktarın. 1 dakika için 80 ° C ısıtma plakası üzerinde slayt koyarak bölümlerde kurulayın. 1 dakika boyunca% 0.1 toluidin mavi leke (2 g sodyum borat ve 200 ml çift distile su ile 0.2 g toluidin mavi) birkaç damla ile kaplayın. Çift distile su ile boya aşan durulayın. Bölümlerde ışık mikroskobu ile incelenmesi reçine (Şekil 2) lekeli doku ayırt etmek sağlayacaktır. </li><li> Doku ve reçine arasındaki sınır bölümden orta ulaşana kadar kesme sürdürün. Aşağıdaki yordamı eğitim gerektirir unutmayın. Elmas bıçak ile bıçak cam değiştirin ve tekne çift distile su ile doldurun. Gümüş-altın ultra ince bölümler (60-80 nm kalınlığında) gümüş kesin ve ince ters cımbız kullanarak bakır örgü ızgaralar üzerinde dikkatle onları toplamak. Kuru bir filtre kağıdı üzerinde ızgaraları. </li><li> Kontrastı arttırmak için, ultra ince kesitler kurşun sitrat (0,03 g kurşun sitrat ve 0,1 ml 10N sodyum hidroksit 10 ml çift distile su 1) ile boyandı. Ince ters cımbız kullanarak, 2 dakika boyunca kurşun sitrat bir damla için bir kılavuz aktarın. Izgara çıkarın ve ince, çift distile su ile art arda 3 hamam ile durulayın. Son olarak, bir filtre kağıdı üzerinde ızgaraları kuru ve elektron mikroskopik inceleme (Şekil 3-6) kadar bir ızgara kutusunda saklayın. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar <img src="/files/ftp_upload/2021/2021fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 ışık mikroskobu düzeyinde Iba1 lekeli bölümü. Iba1 hücresel dağılımı immün özgüllüğü gösterir mikroglia, sınırlıdır. Ölçeği bar = 100 mikron. <img src="/files/ftp_upload/2021/2021fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 ışık mikroskobik düzeyde. Toluidine mavi boyanan yarı ince kesit. Immün elektron mikroskobu en yoğun görünecektir doku ve reçine arasındaki sınır unutmayın. <img src="/files/ftp_upload/2021/2021fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Elektron mikroskobik düzeyde Iba1 immünopozitif mikrogliyal perikaryon ve süreçleri gösteren Şekil 3 Ultrathin bölüm. Iba1 pozitif yapısal elemanların immunoperoksidaz-DAB elektron-yoğun çökelti tarafından kabul edilmektedir. Ölçek çubuğu = 2 mm. <img src="/files/ftp_upload/2021/2021fig4.jpg" alt="Şekil 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 4"> Elektron mikroskobik düzeyde farklı ebat ve şekillerde Iba1 immünopozitif mikrogliyal süreçleri gösteren Şekil 4 Ultrathin bölüm. Ölçek çubuğu = 2 mm. E 5 "/&gt; Şekil 5, hücre içi organellerin kimlik sağlayan, yüksek büyütmede Şekil 4 Iba1 pozitif mikrogliyal süreci gösteren Ultrathin bölüm. Ölçek çubuğu = 1 mm. <img src="/files/ftp_upload/2021/2021fig6.jpg" alt="Şekil 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 6"> Şekil 6 Ultrathin bölümünde yüksek büyütmede ultrastrüktürel bir Iba1 pozitif mikrogliyal süreci ve sinapsların da dahil olmak üzere neuropil Yakın unsurları arasındaki ilişkileri ortaya çıkaran . Ölçeği bar = 1 mikrona kadar.

<ol><li>Venable, J. H., Coggeshall, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+lead+citrate+stain+for+use+in+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A simplified lead citrate stain for use in electron microscopy.</a> J Cell Biol. 25, 407-407 (1965).</li>
<li>Riad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Somatodendritic+localization+of+5-HT1A+and+preterminal+axonal+localization+of+5-HT1B+serotonin+receptors+in+adult+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Somatodendritic localization of 5-HT1A and preterminal axonal localization of 5-HT1B serotonin receptors in adult rat brain.</a> J Comp Neurol. 417 (2), 181-181 (2000).</li>
<li>Tremblay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+of+EphA4+in+axon+terminals+and+dendritic+spines+of+adult+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Localization of EphA4 in axon terminals and dendritic spines of adult rat hippocampus.</a> J Comp Neurol. 501 (5), 691-691 (2007).</li>
<li>Tremblay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+course+of+EphA4+cellular+and+subcellular+localization+in+the+postnatal+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Developmental course of EphA4 cellular and subcellular localization in the postnatal rat hippocampus.</a> J Comp Neurol. 512 (6), 798-798 (2009).</li>
<li>Bouvier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-synaptic+and+post-synaptic+localization+of+EphA4+and+EphB2+in+adult+mouse+forebrain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Pre-synaptic and post-synaptic localization of EphA4 and EphB2 in adult mouse forebrain.</a> J Neurochem. 106 (2), 682-682 (2008).</li>
<li>Bouvier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EphA4+is+localized+in+clathrin-coated+and+synaptic+vesicles+in+adult+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">EphA4 is localized in clathrin-coated and synaptic vesicles in adult mouse brain.</a> J Neurochem. , (2010).</li>
</ol>

Burada, en iyi ultrastrüktürel korunması ve prosedürleri titizlikle yapılmaktadır immünositokimyasal algılama arasında mükemmel bir denge sağlar immunoelectron mikroskopi için fare beyin doku hazırlanması için bir protokol tanımlanmıştır. TEM ile birlikte, bu yöntem, birkaç ayırt edici özellikleri ve kimlik kriterleri ile hücresel öğeleri ayırt etmek sağlar. Özellikle, Iba1 immunoperoksidaz-DAB boyama neuropil içinde mikroglia perikarya ve süreçleri tanımlamak için, yanı sıra, morfoloji, hüc...

* Bir davlumbaz altında her zaman çalışmak ve acrolein, paraformaldehid ve osmiyum ele alınması ve düzgün bir şekilde kendi atık imha nitril eldiven giymeli.

fare beyin dokusu immunoelectron mikroskopi için hazırlanması

Preparation of Mouse Brain Tissue for Immunoelectron Microscopy

Transmisyon elektron mikroskobu (TEM), merkezi sinir sistemi, mikroglia, oligodendrocytic astrositik ve nöronal hücre içi bölmeleri (dendrit dendritik omurga, akson, akson terminali, perikaryon) yanı sıra, bunların hücre içi organelleri ve hücre iskeletinin görselleştirmek için son derece yararlı yüksek uzaysal çözünürlük. Olarak sunulan; TEM ile birlikte, ön gömme immünsitokimya birkaç ayırt edici özellikleri ve kimlik kriterleri (örneğin, mikroglia perikarya ve süreçleri, mikroglia özel işaretleyici Iba1 (iyonize kalsiyum bağlama adaptörü molekülü 1 karşı bir antikor kullanarak hücresel elemanların ayrımcılık sağlar burada)), nörotransmitter olarak hücresel elementler içeriği (örneğin, serotonerjik) ve ultrastrüktürel çözünür ve membrana bağlı proteinler lokalizasyonu (örneğin, 5 HT1A ve EphA4 reseptörler) belirlenmesi. Burada, akrolein fiksatörü, beyin bölümlerinin kaldırılması kesit ve kesit beynin yanı sıra immunoperoksidaz-diaminobenzidin (DAB), boyama, reçine gömme ve ultra ince fareler transcardiac perfüzyon için bir protokol açıklar. Ile immunohistokimyasal malzeme bu prosedürlerin tamamlanmasının ardından, TEM ile inceleme için hazırdır. Titizlikle yapılan zaman, bu tekniğin optimal ultrastrüktürel koruma ve immünositokimyasal algılama arasında mükemmel bir denge sağlar.

Biz beyin bölümlerinin kesit alma fareler, kaldırma ve kesit beynin yanı sıra immunoperoksidaz boyama, reçine gömme ve ultra ince transcardiac perfüzyon için bir protokol tanımlamaktadır. Bu prosedürlerin tamamlanmasının ardından, ile immunohistokimyasal malzeme transmisyon elektron mikroskobu ile incelenmesi için hazırdır.

Fare Beyin Dokusu Immunoelectron Mikroskopi için hazırlanması

Transmisyon elektron mikroskopisi (TEM); mikroglial, oligodendrositik, astrositik ve nöronal hücresel alt bölmelerin görüntülenmesinde son derece kullanışlıdır...

Bu prosedürün genel amacı, fare beyin dokusunu immüno elektron mikroskobisi için hazırlamaktır. Bu işlem, öncelikle hayvanın perfüzyonu yoluyla beynin fikse edilmesiyle gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı ise beynin kesilmesi ve kesitlerin immünohistokimya için işlenmesidir.Prosedürün üçüncü adımı kesitlerin osmiyumlanması,yevüresizleştirilmesi ve gömülmesidir. Prosedürün son adımı ise ultra ince kesitlerin alınmasıdır. Nihayetinde, merkezi sinir sisteminin farklı bölgeleri ve hücre tipleri içindeki çeşitli proteinlerin dağılımını yüksek uzamsal çözünürlükte gösteren sonuçlar elde edilebilir.Merhaba, ben Rochester Üniversitesi Nörobiyoloji ve Anatomi Bölümü'ndeki Esca Laboratuvarı'ndan Maria Trombley. Bugün size immün elektron mikroskobu için fare beyin dokusu hazırlama prosedürünü göstereceğiz. Bu prosedürü laboratuvarımızda gelişim, deneyime bağlı plastisite ve yaşlanma sırasında mikroglia ve sinapslar arasındaki etkileşimleri incelemek için kullanıyoruz.Hadi başlayalım. Fare beynini intrakardiyak perfüzyon yoluyla sabitledikten sonra, 4 °C'de yaklaşık 10 mililitre formaldehit içerisinde iki saat boyunca post-fiksasyona tabi tutun. Beyni 4 °C'de, bir vibratör kullanarak 10'

preparation-of-mouse-brain-tissue-for-immunoelectron-microscopy

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video, fare beyninin bölümlerinin Meynert bölgesinin çekirdek bazalisindeki kolinerjik liflerin immünohistokimyasal boyanmasını göstermektedir. Bölümler bloke edilir ve kolin asetiltransferaza karşı primer ile tedavi edilir, ardından biyotinile edilmiş sekonder antikorlar takip edilir. İkincil antikorlara bağlanan avidin-biotin-peroksidaz kompleksleri eklenir, ardından kromojenik substrat gelir. Kesitler daha sonra kurutulur ve mikroskop altında görselleştirmeden önce monte edilir.

Fare Beyninin Meyner Çekirdeği Basalis'teki Sinir Liflerinin İmmünohistokimyasal Boyanması

Kaynak: Kummari, E., et. al., Lazer Yakalama Mikrodiseksiyonu - Bireysel Dopamin Nöronlarının ve Tüm Ventral Tegmental Alanın İzolasyonunun Bir Gösterimi., J. Vis. Uzm. (2015)Bu videoda, sonraki lazer yakalama mikrodiseksiyonu için beyin dokusu kesitlerindeki dopamin nöronları için immünohistokimya protokolünü gösteriyoruz.

Dopamin Nöronlarını Hedeflemek için Fare Beyin Dokusu Kesitlerinin İmmünohistokimyası

Kaynak: Schönherr, S., et. al. Fare Amigdalasındaki Glutamat Reseptörlerinin Girişe Özgü Düzenlemesini İncelemek için Kombine Optogenetik ve Donma Kırığı Replika İmmün Etiketleme. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, elektron mikroskobu için fare beyin dokusunun donarak kırılmış kopyalarının immüno-etiketlemesini göstermektedir. Kırılmış ve kaplanmış kopyalar, reseptörleri açığa çıkarmak için sindirilir. Primer ve altın etiketli sekonder antikorlar, spesifik nöronal membran reseptörlerini etiketlemek...

Fare Beyin Dokusunun Donarak Kırılmış Bir Örneğinde Nöronal Membran Proteinlerinin İmmünoetiketlenmesi

Kaynak: Louth, E. L.,  et al. Golgi-Cox yöntemini kullanarak kalın beyin bölümlerindeki nöronları görüntüleme. J. Vis. Uzm.  (2017)Bu video, üst ve alt odak sınırlarını ayarlayarak ve üst üste binen görüntüleri yakalayarak Golgi-Cox lekeli kalın bir beyin bölümündeki nöronları görüntülemeyi göstermektedir. Ayrıntılı nöronal projeksiyonları sağlamak için birden fazla konum görüntülenir ve bunlar bir 3D temsil oluşturmak için birleştirilir.

Golgi-Cox Metalik Boyama Kullanılarak Bir Fare Beyin Bölümündeki Nöronların Mikroskobik Görüntülenmesi

Bu yazıda yüksek çözünürlüklü, floresan etiketli fare beyinleri ince beyin anatomisi ile, yeniden tam deneysel prosedürü açıklar. Açıklanan protokol numune hazırlama ve temizleme, görüntüleme, veri post-processing ve çok ölçekli görselleştirme için montaj örneği içerir.

Eşodaklı Işık Sac Mikroskobu ile Tüm Fare Brain mikron çaplı Çözünürlük Optik Tomografi

Burada, kolay ve düşük maliyetli sağlar ve zaman tasarrufu sağlayan bir protokol kimyasal transmisyon elektron mikroskobu için immünohistokimya ön gömme uyumlu uzun süreli koruma sağlayan, akrolein sabitleyici ile primat beyin dokusunun düzeltmek için.

İmmünohistokimya ve elektron mikroskobu Ön gömme için İnsan Olmayan Primat Beyin Dokusu Hazırlanması

Burada, bir sinaptik protein ayirt boyama kullanarak işaret protein, confocal mikroskobu ve bilgisayar tabanlı analiz göre dağılımını belirlemek için nicel bir yaklaşım açıklar.

Türdeş olmayan dağıtım ayirt kullanarak fare beynindeki bir sinaptik protein miktarının

Bu raporda, immünhistokimya (ıHC) için dondurulmuş fare Retina bölümlerini hazırlamak için kapsamlı yöntemler açıklanmaktadır.  Tanımlanan yöntemlerle oküler posterior bardak diseksiyonu, paraformaldehit fikstasyon, optimum kesme sıcaklığı (OCT) medya ve doku oryantasyonu, seksiyonlama ve immünostasyonu katıştırma bulunmaktadır.

Immünhistokimya için fare retinal Cryo-bölümler hazırlanması

Bu protokol, çok etiketli FISH ve floresan IHC sinyali elde etmek amacıyla hem taze dondurulmuş hem de sabit fare beyin bölümlerinde floresan in situ hibridizasyon (FISH) ve floresan immünohistokimyasını (IHC) birleştirmek için bir yöntemi açıklar. IHC, sitoplazmik ve membrana bağlı proteinleri hedefledi.

Multipleks Floresan In Situ Hibridizasyonun Floresan İmmünohistokimya ile Taze Dondurulmuş veya Sabit Fare Beyin Kesitlerinde Birleştirilmesi

Bu protokol, perfüzyon, beyin kesiti, serbest yüzen immünostaining, doku montajı ve görüntüleme dahil olmak üzere fare beyni histolojik çalışmaları için verimli ve tekrarlanabilir bir yaklaşımı açıklar.

Fare Beyinlerinin Serbest Yüzen İmmünasyon

İndüklenebilir bir transgenik soy izleme fare çizgisi kullanarak kök hücreleri ve soylarını bir florofor ile kalıcı olarak işaretleme yeteneği, in vivo aktivasyon, proliferasyon, göç ve / veya farklılaşmanın mekansal ve zamansal analizine izin verir. Soy izleme, soy bağlılığı, müdahaleye yanıt ve çok potansiyelli hakkında yeni bilgiler ortaya çıkarabilir.

Yetişkin Fare Beynindeki İndüklenebilir Floresan Etiketli Kök Hücrelerin Soy İzi

Öğrenin fare beyin dokusunu immunoelektron mikroskopi için hazırlama yöntemini. Transkardiyak perfüzyon, kesit alma ve immunoperoksidaz boyama adımlarını uygulayarak merkezi sinir sistemindeki protein dağılımını yüksek çözünürlükte görüntüleyin.

Fare Beyin Dokusu Immunoelectron Mikroskopi için hazırlanması

Daha fazla video keşfet