Birincil Mamosferlerin Üretimi: Hücre Potansiyelini Belirlemek İçin Bir Teknik
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 5:07 dk. • April 30th, 2023
Tek bir meme kanseri kök hücresi, birincil mamosfer adı verilen bir hücre kümesine yol açar. Bunları elde etmek için, hücrelerin büyüme aşamasında olduğundan emin olmak için önce %70 ila %80 birleşene kadar bir meme kanseri hücre hattı kültürleyin. Hücreleri şişeden ayırmak için Tripsin-EDTA ekleyin ve Tripsin'in etkisini durdurmak için serum içeren bir ortam ekleyin.
Şimdi, hücreleri bir tüpe alın ve hücre peletini elde etmek için santrifüjleyin. Peletleri serum olmadan mamosfer ortamında yeniden süspanse edin ve tek hücreli bir süspansiyon elde etmek için süspansiyonu bir hücre süzgeci kapağı filtresinden geçirin. Bu süspansiyon kök hücreler, progenitör hücreler ve farklı protein ekspresyonları gösteren farklılaşmış hücrelerden oluşur.
CD44 ve CD24, meme kanseri kök hücrelerinin karakteristik hücre yüzey proteinleridir. CD44 ekspresyonu için pozitif, CD24 için negatiftirler. Floresan veya manyetik aktive hücre sıralama kullanarak hücreleri hücre süspansiyonundan izole edin. Daha sonra, hücrelere bir alikot ve ad tripan mavisi lekesi alın ve tohumlama yoğunluğunu bulmak için bir hemositometre lamı kullanarak mililitre başına canlı hücre sayısını hesaplayın.
Son olarak, hücreleri a
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin