JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:19 dk. • April 30th, 2023
Lentivirus, RNA genetik materyali içeren bir Retrovirüstür. Bu virüs, transgenleri kanser hücre hatlarına sokmak için verimli ve kararlı bir yöntem sağlar. Yeşil floresan proteini veya GFP'yi eksprese eden Lentivirus içeren bir tüpe nöraminidaz ekleyerek başlayın. Virüsün bağlanma verimliliğini artırmak için tüpü bir saat boyunca 37 santigrat derecede tutun.
Daha sonra, bir pelet oluşturmak için tümör hücresi süspansiyonu içeren bir tüpü santrifüjleyin. Hücreleri yeniden süspanse etmek için polibren içeren mamosfer ortamı ekleyin. Polibren, Lentiviral enfeksiyon etkinliğini artıran katyonik bir polimerdir. Şimdi altı oyuklu bir doku kültürü plakasında oyuk başına en uygun tümör hücresi sayısını plakalayın. Kültür plakasının her bir oyuğuna gerekli miktarda Lentivirus ekleyin.
İçeriği karıştırmak için plakayı döndürün ve sürekli bir karbondioksit kaynağı ile 96 saat boyunca 37 santigrat derecede tutun. Lentivirus hücreye girer ve RNA'yı serbest bırakır. Viral ters transkriptaz, RNA'yı konakçı genomuna entegre olan çift sarmallı DNA'ya dönüştürür. Plakayı bir floresan mikroskobu altına yerleştirin ve başarılı transdüksiyon için hücreleri izleyin. Dönüştürülen hücreler, GFP ekspresyon
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin