Doğrudan Etkileşim ile 3D Ko-kültür: Etkileşimlerini İncelemek için Kanser Hücrelerini Monositlerle Birlikte Kültürlemek

Başlamak için, hücre dışı bir matris ekstraktına veya ECME'ye floresan boya ile söndürülmüş bir protein substratı olan DQ collagen IV'ü ekleyin. Bu özü iki kuyucuklu bir slaydın her bir kuyucuğuna dökün. Birincisini ko-kültür, ikincisini kontrol olarak etiketleyin. Kuyucuklara uygun miktarda floresan etiketli kanser hücresi süspansiyonu ekleyin ve hücre bağlanmasını teşvik etmek için slaytı istenen süre boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin.

İlk oyuğa gerekli miktarda monosit hücre süspansiyonu ekleyin. ECME'nin 37 santigrat derecede katılaşmasına izin verin. Her bir oyuğa eşit oranlarda kanser hücresi ve monosit kültür ortamı dökün ve slaytı bir karbondioksit ortamında istenen süre boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Ko-kültür kuyusunda, kanser hücreleri monositleri çekmek için monositler kemoatraktan protein gibi proteinler salgılar.

Buna karşılık, monositler, kollajeni parçalamak ve kanser hücrelerinin istilasını teşvik etmek için matris metaloproteinaz veya MMP üretir. Slaytı konfokal mikroskop altında gözlemleyin. DQ kollajen yıkımı, hücre etkileşimini gösteren ko-kültür hücrelerinde daha fazla, kontrol hücrelerinde daha az görülebilen floresan yayar. Aşağıdaki prot