İntraduktal Enjeksiyon: Fare Meme Bezinin Kanallarına Enjeksiyon Karışımının Verilmesi

İntraduktal enjeksiyon, kanser hücreleri, ekspresyon vektörleri veya meme bezinin kanallarına izleyici bir boya ile takviye edilmiş bir terapötik ajan içerebilen bir enjeksiyon karışımının verilmesi tekniğidir.

Bu prosedür için, enjeksiyon karışımı ile bir şırınga yükleyin. Ardından, anestezi uygulanmış bir farenin ventral tarafı yukarı bakacak şekilde cerrahi bir yatağa yerleştirin. Kasık veya beşinci meme bezi çifti arasındaki deride bir kesi yapın. Duktal ağacı görselleştirmek için deri flebini parietal peritondan dikkatlice ayırın.

Forseps kullanarak, meme ucunu kaldırın ve kanal açıklığını görmek için dış kısmını dikkatlice kesin. Deri kanadının kenarını kaldırmak için bir cımbız kullanın ve enjeksiyon karışımını vermek için şırınga iğnesini nazikçe meme ucuna sokun. İzleyici boyanın meme duktal ağacına hareketini izleyin. Boya, stroma'ya sızmadan duktal ağaçta yayılır ve bu da başarılı bir enjeksiyonu gösterir.

Dökülmeyi önlemek için birkaç saniye bekleyin, ardından iğneyi enjeksiyon bölgesinden yavaşça çıkarın. Kesiyi yara klipsi ile kapatın. Aşağıdaki protokolde, Cre eksprese eden adenovirüsü fare meme bezine vermek için intraduktal enjeksiyon yapacağız.

Cerrahi prosedür boyunca aseptik teknikler kullanın. İki dördüncü kasık meme bezi arasında yaklaşık bir santimetre uzunluğunda cilt üzerinde bir kesi yeri yapın. Meme duktal ağacını görselleştirmek için deri flebini parietal peritondan dikkatlice ayırın.

Bir mikro diseksiyon makası kullanarak yakındaki herhangi bir cildi kesmeden dış meme ucunu çıkarmak için meme ucunu saatçi forsepsleriyle dikkatlice tutun. Yaklaşık üç ila beş mikrolitre Cre adenovirüs enjeksiyon karışımını, 33 gauge metal göbek iğnesi takılı 25 mikrolitrelik bir Hamilton şırıngasına yükleyin.

Karışıma dahil edilen mavi boyaya bağlı olarak şırıngadaki enjeksiyon karışımının hacmini tahmin edin. İnce kavisli bir cımbızla cilt flebinin kenarını nazikçe tutun ve mavi boyanın meme duktal ağacına yayılmasını izlerken Cre adenovirüs enjeksiyon karışımını meme ucuna yavaşça enjekte edin. Duktal lümene zarar vermemek için enjeksiyon hızını mümkün olduğunca yavaş tutun.

Başarılı bir intraduktal enjeksiyon, stromal bölmeye sızmadan tüm duktal ağaç boyunca yayılan enjekte edilen sıvılarla gösterilir. Enjekte edilen sıvının herhangi bir sızıntısını önlemek için iğneyi meme ucundan yavaşça çekin. Meme bezinin distal tarafını veya enjekte edilen meme ucunun çevresini inceleyin.

Burada gösterildiği gibi yakındaki stroma'ya yayılan boya, başarılı bir intraduktal enjeksiyondan ziyade bir meme yağ yastığı enjeksiyonunu gösterir. Ameliyat yaralarını ve cildi yara klipsleri ile kapatın.

Fareyi anesteziden çıkarın ve iyileşme için temiz bir kafes içindeki bir ısıtma yastığının üzerine yerleştirin. Metin protokolünde açıklandığı gibi meme tümörünün gelişimini izleyin.