Organ Şartlandırılmış Ortam: Metastatik Kanser Çalışmaları için Hasat Edilen Organ Hücrelerinden Ortam Üretme

Bazı organlar çözünür faktörler üretir ve meme kanseri metastazı için tercih edilen bölgeler haline gelir. Bu toplanan organ hücrelerinden hazırlanan şartlandırılmış bir ortam, bu tür faktörlerin tanımlanmasına ve incelenmesine yardımcı olabilir.

Karaciğer gibi hasat edilmiş bir organı soğuk PBS içeren bir tüpe yerleştirerek ve organın kalan kanını çıkarmak için tüpü yukarı ve aşağı çevirerek başlayın. Organı bir Petri kabına yerleştirin. Ve bir neşter kullanarak, organı küçük parçalara ayırın.

Bu parçaları, hücre büyümesini desteklemek ve kontaminasyonu önlemek için bir antibiyotik ile desteklenmiş bir bazal ortam içeren bir tüpe yeniden süspanse edin. Şimdi, hücre süspansiyonunu bir kültür plakasına dökün ve gerekli süre boyunca sürekli bir karbondioksit kaynağı ile 37 santigrat derecede inkübe edin.

İnkübasyon sırasında, bu hücreler metabolitleri, büyüme faktörlerini, hücre dışı matris proteinlerini ortama salar. Daha sonra, hücre süspansiyonunu bir santrifüj tüpüne aktarın ve seyreltmek için taze ortam ekleyin. Tüpü santrifüjleyin ve şartlandırılmış ortam olan süpernatanı yeni bir tüpe süzün.

Aşağıdaki protokolde, meme kanseri hücrelerinin metastatik davranışını incelemek için