Yumuşak Agar Koloni Oluşumu Deneyi: Yeni Bileşiklerin Kanser Hücresi Proliferasyonu Üzerindeki Etkilerini Test Etmek İçin Bir Yöntem

Başlamak için, konik bir tüpte uygun bir erimiş agaroz konsantrasyonu alın ve buna istenen miktarda ılık kültür ortamı ekleyin. İçeriği karıştırmak için yavaşça ters çevirin. Bu karışımı altı oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna ekleyin ve katılaşmasına izin verin. Bu alt katmandır. Daha sonra, kanser hücrelerini ilgilenilen bileşik ile tedavi edin ve gerekli agaroz konsantrasyonunu ekleyin.

Şimdi, mililitre başına istenen sayıda hücre içeren bu karışımı her bir kuyucuğa dökün. Bu hücre içeren bir katmandır. Ortam katılaştıktan sonra, plakayı bir hafta boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Agarozu ortama karıştırarak bir besleyici tabaka hazırlayın ve bu karışımı ilgilenilen bileşikle tamamlayın. Bu besleyici tabakayı yavaşça her bir oyuğa ekleyin, katılaşmasına izin verin ve plakayı 37 santigrat derecede inkübe edin.

Koloniler oluşana kadar hücreleri ortamla yenilemek için bu besleme prosedürünü haftalık olarak tekrarlayın. İlgilenilen bileşik bir tümörjenite inhibitörü ise, hücrelerin büyümesini baskılayacak ve kuyucuklarda az sayıda koloni oluşmasına neden olacaktır. Aşağıdaki protokolde, PADI inhibitörlerinin meme kanseri hücrelerinin tümörjenitesi üzerindeki etkisini incel