JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:01 dk. • April 30th, 2023
Metabolomik, hücrelerde bulunan metabolitleri tanımlamak ve ölçmek için yapılan çalışmadır. Numuneyi hazırlamak için, meme kanseri hücrelerini büyüme ortamı ile birlikte test ve kontrol olarak etiketlenmiş iki plakaya ekerek başlayın. 37 santigrat derecede üç gün inkübe edin. Şimdi, ortamı çıkarın ve test plakasına estradiol ve kontrol plakasına düz ortam ile taze ortam ekleyin.
Östradiol, meme kanseri hücrelerinde östrojen reseptörü alfa'ya bağlanarak belirli ekspresyonları indükleyerek metabolit bileşiminde bir değişikliğe neden olur. Plakaları istenen süre boyunca inkübe edin. Hücreleri yıkamak için ortamı buz gibi soğuk fosfat tamponlu salin veya PBS ile değiştirin ve ardından buz gibi soğuk aseton ekleyin. Buz gibi soğuk reaktifler, proteazların etkisini durdurur ve böylece protein bozulmasını önler.
Şimdi hücreleri plakalardan ayırmak için bir kazıyıcı kullanın ve bunları bir pipet yardımıyla tüplere aktarın. Bu hücre süspansiyonunun 20 mikrolitresini bir hemositometreye alın ve hücre sayısını sayın. Numuneleri daha fazla analiz için kullanılana kadar eksi 80 santigrat derecede saklayın. Aşağıdaki protokolde, gaz kromatografisi ve kütle spektrometresi için MCF-7 hücrelerinden
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin