Hücre Dışı Meme Yağ Pedleri: Meme Yağ Pedlerinden Hücre Dışı Matriks Hidrojellerinin Türetilmesi

İlk olarak, meme yağ yastıklarını veya MFP'leri Tripsin-EDTA çözeltisi içeren bir tabağa yerleştirin ve hücre matrisi yapışmalarını kırmak için istenen süre boyunca inkübe edin. MFP'leri deiyonize suyla yıkayın ve bir süzgeçten süzün. Mendilleri karıştırma çubuklu bir behere koyun ve Triton X-100 ekleyin. Dokunun hücre dışı matrisindeki büyüme faktörlerini etkilemeden hücreleri parçalamak için karıştırın.

MFP'leri süzün ve deiyonize su ile durulayın. Dokuları behere geri aktarın ve kalan hücreleri parçalamak için deoksikolik asit ekleyin. Daha sonra, MFP'leri süzün ve kontaminasyonu önlemek için penisilin-streptomisin ile deiyonize su içeren bir behere yerleştirin. Beheri gece boyunca 4 santigrat derecede inkübe edin.

MFP'leri süzün ve etanol ve perasetik asit içeren bir behere yerleştirin. Perasetik asit, dokunun hücre dışı matrisinin sertliğini arttırır. Bir süre karıştırın ve süzme adımını tekrarlayın. MFP'leri PBS ile ve ardından deiyonize su ile yıkayın. Süzülmüş MFP'leri propan-1-ol içeren bir behere aktarın.

Bir süre karıştırın, içindekileri süzün ve MFP'leri deiyonize suyla yıkayın. MFP'leri kurutun ve eksi 80 santigrat derecede saklayın. Aşağıdaki protokolde, murin meme yağ yastıkçıklarının hücrelerden arındırılmasını gerçekleştireceğiz.

İlk olarak, MFP'leri beş mililitre Tripsin-EDTA çözeltisi içeren altı santimetrelik tabaklara yerleştirin. Bulaşıkları% 70 etanol ile püskürtün ve silin ve bir saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. MFP'leri deiyonize su ile yıkamak için 0,7 milimetrelik süzgeçler kullanın ve dokunun üzerine üç kez su dökün. Yıkamalar arasında dokuya manuel olarak masaj yapmak için forseps kullanın.

Daha sonra, dokuyu hassas bir görev mendili üzerinde kısaca kurulayın ve tartın. Kurutulmuş dokuları uygun boyutta bir karıştırma çubuğu içeren önceden otoklavlanmış bir behere yerleştirin ve dokuları doku gramı başına 60 mililitre% 3 t-oktilfenoksi polietoksietanol ile kaplayın. Oda sıcaklığında bir saat karıştırın. Ardından, beher içeriğini bir süzgecin içine boşaltın.

Beheri deiyonize su ile durulayın ve bunu dokuların üzerine dökün. Bu durulama işlemini iki kez daha tekrarlayın ve durulamalar arasında dokuya manuel olarak masaj yapmak için forseps kullandığınızdan emin olun. Bundan sonra, dokuyu hassas bir görev üzerinde kısa bir süre kurulayın, silin ve tartın. Dokuları ve karıştırma çubuklarını aynı beherlere geri yerleştirin ve üzerlerini bir gram doku başına 60 mililitre% 4 deoksikolik asit ile kaplayın. Oda sıcaklığında bir saat karıştırın.

Ardından, beherin içindekileri bir ağ süzgecine boşaltın. Beheri deiyonize su ile durulayın ve bunu dokuların üzerine dökün. Bu durulama işlemini iki kez daha tekrarlayın ve durulamalar arasında dokuya manuel olarak masaj yapmak için forseps kullandığınızdan emin olun. Durulanan dokuyu hassas bir görevde kısa bir süre kurulayın, silin ve tartın.

Kurutulmuş dokuları,% 1 penisilin streptomisin ile desteklenmiş taze deiyonize su ile birlikte aynı behere yerleştirin. Beheri parafin film ile sıkıca kapatın ve gece boyunca 4 santigrat derecede bırakın. Ertesi gün, beher içeriğini bir süzgecin içine boşaltın. Dokuyu hassas bir görevde kısa bir süre kurulayın, silin ve tartın. Ardından, MFP'leri uygun boyutta bir karıştırma çubuğu ile aynı behere yerleştirin.

Dokuyu, doku gramı başına% 4 etanol ve% 0.1 perasetik asit içeren 60 mililitre bir çözelti ile örtün. Oda sıcaklığında iki saat karıştırın. Beherin içindekileri 0,7 milimetrelik bir süzgecin içine boşaltın. Dokuya manuel olarak masaj yapmak için forseps kullanın ve içindekileri tekrar behere yerleştirin. Dokuyu, bir gram doku başına 60 mililitre 1X PBS ile kaplayarak yıkayın.

Oda sıcaklığında 15 dakika karıştırın. Tüm bu yıkama işlemini bir kez daha tekrarlayın. Ardından, beherin içeriğini 0,7 milimetrelik bir süzgecin içine boşaltın. Forseps kullanarak, dokuya manuel olarak masaj yapın ve içindekileri tekrar behere yerleştirin. Dokuyu, bir gram doku başına 60 mililitre deiyonize su ile kaplayarak yıkayın.

Oda sıcaklığında 15 dakika karıştırın. Tüm bu yıkama işlemini bir kez daha tekrarlayın. Yıkanan dokuyu hassas bir görev üzerinde kısa bir süre kurulayın, silin ve tartın. Dokuyu ve içindekileri bir süzgecin içine boşaltın ve dokuya manuel olarak masaj yapmak için forseps kullanın. İçeriği tekrar behere yerleştirin ve dokuları bir gram doku başına 60 mililitre% 100 n-propanol ile kaplayın.

Oda sıcaklığında bir saat karıştırın. Ardından, dokuyu hassas bir görev mendili üzerinde kısa bir süre kurulayın ve tartın. Dokuyu ve içeriği 0,7 milimetrelik bir süzgecin içine boşaltın ve dokuya manuel olarak masaj yapmak için forseps kullanın. İçeriği tekrar behere yerleştirin ve dokuyu bir gram doku başına 60 mililitre deiyonize su ile kaplayarak yıkayın.

Oda sıcaklığında 15 dakika karıştırın. Bu yıkama işlemini üç kez tekrarlayın. Bundan sonra, dokuyu hassas bir görev mendili üzerinde kısaca kurulayın ve tartın. Dokuyu etiketli 15 mililitrelik bir tüpe aktarın ve gece boyunca eksi 80 santigrat derecede dondurun.