CTC İmmünofloresan Testi: Dolaşımdaki Tümör Hücrelerini Karakterize Etmek İçin Bir Teknik

JoVE Encyclopedia of Experiments

Kanser Araştırmaları

0 görüntüleme • 4:05 dk • April 30th, 2023

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- Başlamak için, izole edilmiş dolaşımdaki tümör hücrelerini veya CTC'leri, hücreleri sıvı kesilmesinden ve basınç hasarından koruyan bir bağlanma önleyici solüsyon kullanarak gerekli konsantrasyona seyreltin. Daha sonra, bir poli-lizin kaplı mikroskop lamını ve bir sitosantrifüj filtre kartını bir sitosantrifüj hunisi düzeneğine monte edin. Hücre süspansiyonunu düzeneğin huni portuna aktarın ve ardından sitosantrifüjleme yapın.

Merkezkaç kuvveti, tek katmanlı bir hücre tabakasını slayt üzerindeki dairesel bir alana yoğunlaştırır ve biriktirir. Silikon bir izolatör kullanarak hücrelerle biriken alanı izole edin. Kuruduktan sonra hücreleri paraformaldehit kullanarak sabitleyin. Daha sonra, hücreleri, hücre yüzeyindeki spesifik olmayan herhangi bir bağlanma bölgesine kolayca bağlanan proteinler içeren uygun bir bloke edici çözelti ile inkübe edin.

Şimdi, hücreleri floresan etiketli bir antikor çözeltisi ile etiketleyin. Florofor etiketli antikorlar, hücre yüzeyindeki spesifik hedef molekülleri tanır ve onlara bağlanır. Bağlanmamış antikorları çıkarmak için numuneyi yıkayın. Numuneyi görüntülemeye hazırlamak için bir montaj solüsyonu ekleyin.

CTC'lerdeki hedef antijenlere bağlı antikor-florofor konjugatları tarafından yayılan ışığı tespit etmek için bir floresan mikroskobu kullanın. Bu protokolde, küçük hücreli dışı akciğer kanseri hasta örneklerinde CTC'lerin immünofloresan testi gerçekleştirilecektir.

- İmmünofloresan boyama için, hücreleri bir hemositometrede sayın ve zenginleştirilmiş numuneyi, 100 mikrolitre% 0.2 anti-bağlayıcı çözelti konsantrasyonu başına 1 kez 10 ila beşinci hücreye seyreltin. Ardından, numune odasının konturunu nemlendirmek için 50 mikrolitre bağlanma önleyici solüsyonla ıslatılmış bir pamuklu çubuk kullanın ve numune haznesine bir poli-lizin cam slayt yerleştirin.

Hazneyi kapatın ve numuneyi süpernatantın son 100 mikrolitresinde yeniden süspanse etmeden önce bir mikropipet ucunu bağlayıcı solüsyonla kaplamak için üç kez yukarı ve aşağı pipetleyin. Hücre çözeltisini numune odasına aktarın ve numuneyi özel bir santrifüjde düşük bir ivmeyle 4 dakika boyunca dakikada 400 dönüşte sitospinleyin.

Santrifüjlemenin sonunda, biriktirme alanının etrafına bir silikon izolatör yerleştirin ve sürgünün iki dakika boyunca bir mikrobiyolojik güvenlik kabini altında kurumasını bekleyin. Daha sonra, hücre eğrili numuneyi 100 mikrolitre% 4 paraformaldehit ile oda sıcaklığında 10 dakika boyunca sabitleyin, ardından oda sıcaklığında yıkama başına 200 mikrolitre PBS ile 2 dakikalık üç yıkama yapın.

Son yıkamadan sonra, oda sıcaklığında bloke edici reaktifte 30 dakikalık bir inkübasyon ile spesifik olmayan herhangi bir bağlanmayı bloke edin ve ardından ilgilenilen antikor çözeltisinin 100 mikrolitresi ile etiketleyin. Etiketli slaytı 100 x 15 mililitrelik bir Petri kabına, 2 mililitre steril su ile nemlendirilmiş bir parça emici kağıda yerleştirin ve kabı gece boyunca 4 santigrat derecede kapalı olarak ışıktan koruyarak yerleştirin.

Ertesi sabah, numuneyi gösterildiği gibi PBS ile üç kez yıkayın ve numuneyi 10 mikrolitre uygun bir montaj solüsyonu ve bir cam kapak kızağı ile monte edin. Ardından kapak fişini şeffaf oje ile kapatın.

11:31

Tümör Gelişim Değerlendirme Mikro bilgisayarlı Tomografi ile ve Takibi Tedavi Yanıtın Akciğer Kanseri Fare Modeli

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:49

IMMUNO-Onkoloji araştırmalar Formalin sabit Karsinomu doku örnekleri Multiplex ayirt Panel otomatik

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:29

İmmünfluoresans Ile Küçük Hücreli Olmayan Akciğer Kanseri Hastalarından Dolaşımdaki Tümör Hücrelerinin Yarı Otomatik PD-L1 Karakterizasyonu ve Numaralandırılması

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:32

Hasta Kan Örneklerinden Canlı Dolaşımdaki Tümör Hücreleri Rapid İzolasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:32

İmmünofloresan Testi: Tıbbi Bir Tel Üzerinde Yakalanan Tümör Hücrelerini Tanımlamak İçin Bir Yöntem

İlgili videolar

0 Görüntüler

14:14

Klinik ve Klinik Öncesi Araştırma Uygulamaları Tümör Hücre (CTC) Tahliller Sirkülasyon semiautomated adaptasyon

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:10

Yakalama ve Kan gelen Canlı Sirkülasyon Tümör Hücrelerinin Yayın

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:32

Multiplexed ayirt analizi ve Intratumoral PD-1+ Tim-3+ CD8 miktar+ T hücreleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:56

Tümör hücrelerinin tümör hücreleri dolaşan yakalamak için tıbbi bir tel kullanarak karakterizasyonu: 3D bir yaklaşım tabanlı ayirt ve DNA balık

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:47

Dolaşımdaki Tümör Hücre Hatları: Temel ve Çevirisel Araştırmalar için Yenilikçi Bir Araç

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 1 Ağustos 2026