Doz Yükseltme: Kanser Hücrelerinde İlaç Direnci Geliştirmek İçin Bir Yöntem
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:17 dk. • April 30th, 2023
- Tirozin Kinaz İnhibitörleri, TKI, kinaz reseptörünün ATP'ye bağlanmasını engelleyerek fosforilasyonu önler. Kanser hücrelerini büyüme ortamında kaplamakla başlayın. Uygun yoğunluğa ulaşmalarına izin verin ve hücreleri birden fazla kuyuya aktarın. Gece boyunca büyüdükten sonra, farklı ilaç konsantrasyonlarını birden fazla oyuğa dağıtın ve hücrelerin istenen süre boyunca büyümesine izin verin. Hücre canlılığını ölçmek için suda çözünür bir boya olan MTT'yi ekleyin. Mitokondriyal enzimler, MTT'yi canlı hücrelerin içinde çözünmeyen mor formazana dönüştürür.
Uygun bir çözündürücü madde ekleyerek reaksiyonu durdurun ve formazı spektrofotometrik olarak ölçün. Bu yönteme MTT tahlili denir. İlaç konsantrasyonlarına karşı formazan ile gösterilen canlı hücrelerin bir grafiğini çizin. Yazılımı kullanarak hücrelerin %50'sini öldüren ilaç konsantrasyonunu bularak inhibitör konsantrasyonu (IC 50) hesaplayın.
Daha sonra, büyüme ortamında kanser hücrelerini büyütün ve bunları üç farklı plakaya dağıtın. Hücreler alt birleşime ulaştıktan sonra, IC50 konsantrasyonunun 1/10 seyreltmesini ekleyin. Hücrelerin büyümesine ve MTT testini gerçekleştirmesine izin verin. Bu işlemi artan ilaç dozu ile tekrarl
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin