JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 5:38 dk. • April 30th, 2023
- Başlamak için, akciğer kanseri hücrelerini doku kültürü ortamı içeren bir T-şişesine tohumlayın ve gece boyunca büyümesine izin verin. Daha sonra, miRNA'yı bir transfekte edici ajan ile transfekte edici bir ortama süspanse edin. Ortamı çıkarın ve miRNA'yı kanser hücrelerine sokacak bir transfekte edici ortam ekleyin. miRNA, tamamlayıcı bir mRNA dizisine bağlanan ve gen ekspresyonunu bloke eden, kodlamayan bir RNA molekülüdür. Şişeyi istenen süre boyunca inkübe edin.
Ardından, besiyerini doku kültürü besiyeri ile değiştirin ve gece boyunca büyütün. Hücre ayrışması için tripsin ekleyin. Karışımı PBS içeren bir santrifüj tüpüne aktarın ve santrifüjleyin. Süpernatanı çıkarın ve lizaz hücrelerine lizis tamponu ekleyin ve çökeltme için ultra saf etanol ekleyin. Nükleik asit ve santrifüjü saflaştırmak için karışımı bir ayırma kolonuna yerleştirin.
Akışı çıkarın ve parçalanmış hücre zarını ve santrifüjü çıkarmak için bir yıkama tamponu ekleyin. Yıkama tamponunu çıkarın ve DNA'yı numuneden ve santrifüjden çıkarmak için DNaz sindirim tamponu ile DNaz ekleyin. RNA ve santrifüjü izole etmek için RNA hazırlık tamponu ekleyin. Süpernatantta bulunan RNA'yı toplayın. Aşağıdaki protokolde, miRNA
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin