Hücre Döngüsü Analizi: miRNA ile Transfekte Edilmiş Akciğer Kanseri Hücrelerinin Hücre Döngüsü Düzenlemesini İncelemek İçin Bir Yaklaşım

- Bir mikroRNA veya miRNA, küçük, kodlamayan bir RNA'dır. mRNA transfeksiyonunu veya bir hücreye girişini takiben, bir miRNA protein kompleksi oluşturur. Kompleks, spesifik mRNA'yı hedefler ve ona bağlanır ve ekspresyonunu negatif olarak düzenleyerek hücre döngüsü ilerlemesini durdurur.

Analize başlamak için, miRNA ile transfekte edilmiş akciğer kanseri hücrelerinin hasat edilmiş bir kültürüne uygun bir dehidrasyon fiksatifi ekleyin. Fiksatif hücreleri korur ve ayrıca hücre zarına nüfuz eder. Hücreleri propidyum iyodür, bir floresan nükleik asit boyası ve ribonükleaz enzimi karışımına tabi tutun.

Boya hücrelere girer ve hem DNA'yı hem de RNA'yı boyar. Enzimler, optimal DNA miktar tayinine izin vererek RNA'yı spesifik olarak bozar. Tek tek hücrelerin floresan yoğunluğuna bağlı olarak farklı hücre döngüsü fazlarında durdurulan hücrelerin oranını belirlemek için bir akış sitometresi kullanın.

Dinlenme ve büyüme aşamalarındaki hücreler daha düşük DNA içeriğine ve dolayısıyla daha düşük floresan yoğunluğuna sahiptir. Boşluk 2 fazındaki hücreler, iki kat daha fazla DNA miktarına sahip hücreler, iki kat daha fazla floresan yoğunluğu üretir. DNA sentez fazındaki hücreler, diğer iki popülas