Antikor mikrodizisi: miRNA ile tedavi edilen akciğer kanseri hücrelerinin protein ekspresyonunu incelemek için bir teknik

- Protein örneğine bir biyotin çözeltisi ve bir etiketleme tamponu ekleyerek başlayın. Biyotinin proteinlere bağlanmasını kolaylaştırmak için inkübe edin. Bir durdurma reaktifi ve girdap ekleyin. Daha sonra, antikorların spesifik olmayan bağlanmasını önlemek için bir bloke edici reaktif içeren bir tabağa bir antikor mikrodizi slaydı yerleştirin. Engelleme solüsyonunu çıkarmak için slaytı çift damıtılmış suyla yıkayın. Mikrodizi slaytını bir hazneye yerleştirin. Biyotinile protein örneğini bir birleştirme çözeltisi ile karıştırın ve hedef proteinlerin karşılık gelen antikorlarına bağlanmasını kolaylaştırmak için lam üzerine ekleyin. Sürgüyü yıkama tamponu içeren bir tabağa aktarın ve tamponu çift damıtılmış su ile değiştirin. Daha sonra, slaytı, biyotinile proteinlere bağlanmasını desteklemek için floresan etiketli streptavidin içeren bir algılama tamponuna yerleştirin.

Floresan yoğunluğunu korumak için çanağı karanlıkta inkübe edin. Slaytı çıkarın ve bir mikrodizi tarayıcıya yerleştirin. Tarayıcı, hedef proteine bağlı streptavidinden gelen floresan sinyalleri arar. Floresan yoğunluğuna bağlı olarak, yazılım protein ekspresyonunun derecesini analiz eder. Aşağıdaki protokolde, hücre